果糖二磷酸钠

果糖二磷酸钠
Guotang Erlinsuanna
Fructose Sodium Diphosphate
C6H11Na3O12P2 406.06
C6H11Na3O12P2 • 8H2O 550.17 本品为果糖-1,6-二磷酸三钠盐或果糖-1,6-二磷酸三钠盐八水合物。

按无水物计算，含C6H11Na3O12P2不得少于95.0%。

【性状】本品为白色或类白色的结晶性粉末；微有特臭，味微咸；果糖二磷酸钠（C6H11Na3O12P2）极具引湿性。

本品在水中易溶，在乙醚、乙醇或丙酮中几乎不溶。

【鉴别】（1）取本品适量，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。

另取果糖二磷酸钠对照品适量，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅤB）试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一微晶纤维素薄层板（板厚约0.5mm）上，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液（35:20:22.5:15:7.5）为展开剂，展开后晾干，喷以盐酸间苯二胺乙醇溶液（取盐酸间苯二胺0.36g，加76％乙醇溶液10ml使溶解），在105℃加热30分钟使显色，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同；继续再喷以丙酮-12.5％钼酸铵溶液-盐酸-高氯酸（86:8:3:3）混合溶液，供试品溶液所显斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同。

（2）取本品约50mg，置坩埚中，加无水碳酸钠2g，混合后，炽灼至灰化，放冷，加水10ml 使溶解，加硝酸使成酸性，滤过，滤液加钼酸铵试液，加热，即发生黄色沉淀；加过量氨试液，沉淀溶解。

（3）本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致（中国药典2010年版二部附录ⅣC）。

（4）本品的水溶液显钠盐的鉴别反应（中国药典2010年版二部附录Ⅲ）。

【检查】酸度取本品1.0g（以C6H11Na3O12P2计算），加水10ml溶解后，依法测定（中国药典2010年版二部附录ⅥH），pH值应为5.5～6.5。

溶液的澄清度与颜色取本品1.5g（以C6H11Na3O12P2计算），加水10ml溶解后，溶液应澄清无色。

如显色，与黄色、橙黄色或黄绿色2号标准比色液（中国药典2010年版二部附录ⅨA 第一法）比较，不得更深。

游离磷酸盐取本品20mg（以C6H11Na3O12P2计算），精密称定，置25ml量瓶中，加水15ml 使溶解；另精密量取标准磷酸盐溶液[精密称取经105℃干燥2小时的磷酸二氢钾0.1433g，置
1000ml量瓶中，加硫酸溶液（3→10）10ml与水适量使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，临用时再加水稀释10倍，即每1ml相当于10 g的PO4]8ml，置另一25ml量瓶中，各精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液（取无水亚硫酸钠5g，亚硫酸氢钠94.3g与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.7g，充分混合，临用前取此混合物1.5g，加水10ml使溶解，必要时滤过）1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA），在740nm的波长处测定吸光度，按无水物计算，含游离磷酸盐（以PO4计）不得大于0.4％。

氯化物取本品0.10g（以C6H11Na3O12P2计算），依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅧA），与标准氯化钠溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.03％）。

硫酸盐取本品0.50g（以C6H11Na3O12P2计算），依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅧB），与标准硫酸钾溶液2.5ml制成的对照液比较，不得更浓（0.05％）。

有关物质取本品，加水制成每1ml中含0.1g（以C6H11Na3O12P2计算）的溶液，作为供试品溶液；精密称取6-磷酸果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液（1）；精密称取果糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液（2）；精密称取6-磷酸葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质对照品溶液（3）；另取6-磷酸果糖对照品、果糖对照品、6-磷酸葡萄糖及本品适量，加水制成每1ml中各含6-磷酸果糖0.25mg、果糖0.25mg、6-磷酸葡萄糖0.25mg与本品2mg的混合对照溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅤB）试验，吸取上述5种溶液各5μl，分别点于同一微晶纤维素薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液（35:20:22.5:15:7.5）为展开剂，展开，晾干，喷以间苯二酚乙醇盐酸溶液（取间苯二酚0.5g，加80%乙醇溶液100ml使溶解，加盐酸5ml，摇匀），在105℃加热5分钟使显色，立即检视。

混合对照溶液应显示四个清晰分离的斑点。

供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，并分别应与杂质对照品溶液（1）、（2）或（3）主斑点的位置相同，其斑点颜色与相应的对照品溶液主斑点比较，不得更深（0.5％）。

水分取本品，照水分测定法（中国药典2010年版二部附录ⅧM第一法）测定，含水分不得过10.0%（C6H11Na3O12P2 ）或应为24.0%～27.0%（C6H11Na3O12P2 • 8H2O）。

铁盐取本品1.0g（以C6H11Na3O12P2计算），加水35ml溶解后，加稀盐酸溶液3ml，过硫酸铵30mg与30%硫氰酸铵溶液3ml，加水稀释至50ml，摇匀，加正丁醇10ml，振摇，放置，醇层如显色，与标准铁溶液1.0ml制成的对照液比较，不得更深（0.001％）。

重金属取本品1.0g（以C6H11Na3O12P2计算），加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水适量使溶解成25ml，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅧH第一法），含重金属不得过百万分之十。

砷盐取本品2.0g（以C6H11Na3O12P2计算），加盐酸5ml与水23ml溶解后，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅧJ第一法），应符合规定（0.0001%）。

蛋白质取本品1.0g（以C6H11Na3O12P2计算），加水10ml溶解后，逐滴加入30%磺基水杨酸溶液2ml，不得产生浑浊。

异常毒性取本品，加注射用水制成每1ml中含16mg（以C6H11Na3O12P2计算）的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪC），按静脉注射法缓慢注射，应符合规定（供注射用）。

降压物质取本品，加灭菌注射用水制成每1ml中含50mg（C6H11Na3O12P2计算）的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪG），剂量按猫体重每1Kg注射1ml，应符合规定。

（供注射用）
热原取本品，加注射用水制成每1ml中含100mg（以C6H11Na3O12P2计算）的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪD），剂量按家兔体重每1kg缓缓注射6ml，应符合规定（供注射用）。

过敏反应取本品，加灭菌注射用水制成每1ml中含100mg（以C6H11Na3O12P2计算）的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪK），应符合规定。

（供注射用）无菌取本品7.0g，加灭菌水50ml使溶解，用薄膜过滤法处理后，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅪH），应符合规定（供注射用）。

可见异物称取本品5份，每份5g（以C6H11Na3O12P2计算），分别置洁净透明的适宜玻璃容器内，加水溶解并稀释至50ml，依法检查（中国药典2010年版二部附录ⅨH）。

5份供试品中，均不得检出明显可见异物。

如检出微细可见异物，应不得过10个。

如仅有1份不符合规定，另取10份同法复试，均应符合规定（供注射用）。

【含量测定】取本品适量，采用适宜的酶法测定（附件1或2）。

【类别】心血管系统疾病辅助用药；水电解质平衡类药。

【贮藏】密封，在阴凉处保存。

【制剂】（1）果糖二磷酸钠口服溶液（2）果糖二磷酸钠片（3）果糖二磷酸钠注射液（4）果糖二磷酸钠胶囊（5）注射用果糖二磷酸钠
附件1.
混悬液酶试剂法
(1)试剂 盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/L ，pH7.6）：取盐酸三乙醇胺18.6g ，加水200ml 溶解，加乙二胺四乙酸二钠3.7g ，溶解后，用2mol/L 氢氧化钠溶液(约18ml)调节pH 值至7.6，加水稀释至250ml 。

或取三乙醇胺17.5g ，加水约200ml ，加盐酸4ml ，混匀，加乙二胺四乙酸二钠
3.7g ，溶解后，用2mol/L 氢氧化钠溶液或2mol/L 盐酸溶液调节pH 值至7.6，加水稀释至250ml 。

滤过后4℃保存,一周内使用。

还原型辅酶Ⅰ（NADH ）溶液：取NADH 二钠盐7mg ，溶于2ml 盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）中。

4℃保存。

3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液（GDH/TIM ）：取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液（GDH ）与磷酸丙糖异构酶混悬液（TIM ）适量，用3.2mol/L 硫酸铵溶液（pH6）稀释成每1ml 约含GDH310U 和TIM1550U 的溶液。

4℃保存。

醛缩酶混悬液（ALD ）：取醛缩酶混悬液（ALD ）适量，用3.2mol/L 硫酸铵溶液（pH6）稀释成每1ml 中约含ALD90U 的溶液。

（2）供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml 约含0.2mg （按无水物计算）的溶液。

（3）测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）3.0ml ，供试品溶液0.1ml ，还原型辅酶Ⅰ溶液0.05ml ，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml ，置1cm 吸收池中，摇匀，放置15分钟；另取盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）3.15ml ，甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml ，置另一吸收池中，摇匀，作为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA ），在340nm 波长处测定供试品溶液的吸光度A 1，再在每池中加醛缩酶混悬液0.02ml ，摇匀，于20℃～25℃放置约5分钟，在340nm 波长处测定供试品池的吸光度，直至吸光度基本不变读取吸光度A 2。

求出吸光度差值ΔA （ΔA=0.9937A 1-A 2），按下式计算，即得。

1001.006.40619.32
1029.6%3⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯∆A =W 稀释倍数）果糖二磷酸钠含量（ 式中 0.9937为3.17/3.19；
3.19为样品池中溶液的最终体积（ml ）；
6.29⨯103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数；
2为果糖二磷酸钠反应系数；
406.06为果糖二磷酸钠（C 6H 11Na 3O 12P 2）的分子量；
0.1为供试品溶液加入体积(ml)；
W 为供试品的取样量(mg)（以C 6H 11Na 3O 12P 2计算）。

附件2
固体复合酶试剂法
（1）试剂 空白酶溶液：取固体复合酶（酶活力测定方法见注1，活力应符合规定）60mg ，用盐酸三乙醇胺缓冲液（取三乙醇胺17.5g ，加水约200ml ，加盐酸4ml ，混匀，加乙二胺四乙酸二钠3.7g ，溶解后，用2mol/L 氢氧化钠溶液或2mol/L 盐酸溶液调节pH 值至7.6，加水稀释至250ml 。

滤过后4℃保存，一周内使用。

）溶解并稀释至20ml 。

垂熔漏斗过滤，4℃保存，两天内使用。

测定酶溶液：取空白酶溶液10ml ，加还原型辅酶Ⅰ（NADH ）3.0mg ，溶解后4℃保存，两天内使用。

（2）供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加水溶解并制成每1ml 约含0.4mg （按无水物计算)的溶液。

（3）测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml ，测定酶溶液1ml ，置石英吸收池中；另精密量取上述缓冲液2ml ，空白酶溶液1ml 置另一吸收池，作为空白，摇匀，静置15分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA ），在340nm 波长处测定吸光度A 1。

各池再分别精密加入供试品溶液0.1ml ，摇匀，于20℃～25℃放置10分钟，在340nm 的波长处测定，直至吸光度基本不变，读取吸光度A 2。

求出吸光度差值ΔA （ΔA= A 1－1.0333A 2），按下式计算，即得。

1001.006.4060.32
1029.6%3⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯∆A =W 稀释倍数）果糖二磷酸钠含量（ 式中 3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积（ml ）；
6.29 ⨯ 103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数；
2为果糖二磷酸钠反应系数；
406.06为果糖二磷酸钠（C 6H 11Na 3O 12P 2）的分子量；
0.1为供试品溶液加入体积(ml)；
W 为供试品的取样量(mg) （以C 6H 11Na 3O 12P 2计算）。

注1：固体复合酶的活力测定
固体复合酶 系指供果糖二磷酸钠含量测定专用的复合酶试剂，含醛缩酶（ALD ，Aldolase ）、磷酸丙糖异构酶（TIM ，Triose-phosphate isomerase ）和磷酸甘油脱氢酶（GDH ，Glycerinphosphate dehydrogenase ）。

复合酶活力系指每1mg 酶每1分钟催化果糖二磷酸钠的μg 数。

每1mg 固体复合酶活力应不得低于40μg 。

试剂的制备
（1）盐酸三乙醇胺缓冲液（0.4mol/L ，pH7.6）：见含量测定项下。

（2）复合酶溶液：取固体复合酶0.1g ，用盐酸三乙醇胺缓冲液（pH7.6）溶解并稀释至10ml 。

垂熔漏斗过滤，4℃保存。

（3）还原型辅酶Ⅰ(NADH)溶液:取还原型辅酶Ⅰ6.5mg ，用盐酸三乙醇胺缓冲液溶解并稀释至50ml 。

（4）果糖二磷酸钠溶液：取果糖二磷酸钠0.3g （以C 6H 11Na 3O 12P 2计算），用水溶解并稀释至10ml 。

测定法
取石英吸收池两只，一只加还原型辅酶Ⅰ溶液2.99ml 和果糖二磷酸钠溶液10μl ，作为样品池；另一只加盐酸三乙醇胺缓冲液2.99ml 和果糖二磷酸钠溶液10μl ，作为空白池，摇匀，静置5分钟，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA ），在340nm 波长处测定吸光度。

向样品池中加入复合酶溶液40μl ，在20℃～25℃立即摇匀并准确记时，于1、2、3、4、5分钟分别测定吸光度，以时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，取近似直线部分的斜率（即平均每分钟吸收度的差值ΔA ）按下式计算复合酶的活力。

W
1000206.4063106.293⨯⨯⨯⨯∆A =复合酶活力 式中 6.29 ⨯ 103为还原型辅酶Ⅰ(NADH)的摩尔吸收系数；
3为反应溶液体积（ml ）；
406.06为果糖二磷酸钠（C 6H 11Na 3O 12P 2）的分子量；
1000为毫克转化为微克（μg ）的系数；
2为果糖二磷酸钠反应系数；
W 为加入样品池中的复合酶溶液中含固体复合酶的毫克数(mg)。

复合酶活力系指每1mg 酶每分钟催化果糖二磷酸钠的μg 数（μg/分钟/mg ），应不少于40μg 。