呼吸道感染常见病原菌
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➢无痰者用高渗盐水吸入导痰。
➢意识障碍者可经鼻或口腔吸痰，或经 人工气道吸痰。
CAP病原学诊断
标本采集
➢咽试子应用无菌湿棉签取，即时送检。
➢ 实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼 脂（含抗菌素）， 置5-10％CO2气体 环境。
标本质量评价
直接涂片镜检： 鳞状上皮细胞<10/低倍视野 白细胞>25/低倍视野
炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
G-杆菌：嗜血杆菌、鲍特菌
嗜血杆菌属
嗜血杆菌属（Haemophilus）细菌为 一类无动力、无芽孢的革兰阴性短小杆 菌常呈球杆状、丝状等多形态。
分类
隶属巴斯德菌科，嗜血杆菌属。
本菌属包括16个菌种，其中9个与临床有关
临床意义
嗜血杆菌存在于正常人上呼吸道。 可引起上呼吸道、泌尿道感染及脑膜炎、 菌血症等感染性疾病。
③ 肺炎衣原体抗体滴度升高≥4倍 ④ LP直接荧光抗体阳性＋抗体滴度升高
CAP病原学诊断
检测结果判定
2.有意义: ① 合格痰标本培养细菌≥3+ ② 细菌少量生长，但与镜检结果一致 （肺球、流感、卡他莫拉菌） ③ 入院3天内多次培养到相同细菌 ④ 血清肺炎衣原体抗体升高≥1：32 ⑤ LP抗体升高≥1：320（ELISA）， 或间接荧光抗体≥1：512
报告
图 流感嗜血杆菌的检验程序
检验方法
（1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌
物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉 淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰 阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症 状，作初步诊断。
（2）分离培养：
将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼 脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于 巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35℃培养18～ 24h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫 星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试 验和荚膜肿胀试验分型。
CAP病原学诊断
我国苛养菌分离现状
未建立标本送检指南； 送检标本与接种时间相隔太长； 不具备苛养菌分离的培养基； 无CO2培养环境； 不能辨别菌落； 无鉴别试剂
苛养菌分离率低，污染菌影响药敏结果， 迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料。
CAP病原学诊断
标本采集
➢ 痰标本：采集应在抗菌治疗前，清 晨清水漱口三次，深咳痰。
流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原不同可分为a、
b、c、d、e、f 6个血清型，其中b型致病性最
强，f次之。
微生物特性
流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和耐热R 抗原。
流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为三种类 型：粘液型（M）、光滑型（S）、粗糙型 （R）。
微生物检验
标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试 子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥， 及时送检。
社区获得性呼吸道感染的病原学
社区获得性呼吸道感染常见病原菌
3% 7% 4% 7% 2%
12%
肺炎链球菌
流感嗜血杆菌
金葡菌
支厡体
嗜肺军团菌
65%
病毒
其他
其他致病菌包括：卡它莫拉菌、GNB、衣原体等
Adapted from Woodhead M.J Antimicrob Chemother .1994:34(suppl A):85-92
血液、脑脊液
检验程序
脑脊液、鼻咽试子、痰、脓液
增菌培养 35℃ 鉴定
分离培养 巧克力琼脂
血液琼脂
35℃ 5~10%CO2 挑选可疑菌落
直接涂片染色 革兰阴性小杆菌多形性
初报
分型
菌落特征 菌体形态 卫星试验 X、V因子需求试验
吲哚 、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型） 荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型）
CAP病原学诊断
检测结果判定 3. 无意义:
① 痰培养到上呼吸道正常菌（草链、表 葡、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等）
② 多种病原菌少量生长 ③ 不符上述“确定”和“有意义”条款
苛养菌
苛养菌：对营养要求苛刻，在普通培养 基上不生长或难以生长的一类细菌。
临床常见的有：
G+球菌：肺炎链球菌
G-球菌：卡他布兰汉菌、脑膜
鳞状上皮细胞：白细胞<1：2.5
细胞学筛选标本的必要性
细胞学筛选标本的必要性
标本处理
痰标本用无菌盐水约20ML漂洗2次 用等量sputosol 作用20分钟，溶解粘痰 用四区划线法分别接种血平板、巧克力
平板和麦康凯平板 放置CO2培养箱孵育 从采集标本到接种平板应短于2小时
需氧或兼性厌氧
最适生长温度： 35℃
PH
7.6-7.8
生长因子：X、V
5%-10% CO2
嗜血杆菌对生长因子的需求
菌种
X因子 V因子 溶血性
流感嗜血杆菌 +
+
-
副流感嗜血杆菌 -
+
-
埃及嗜血杆菌 +
+
-
杜克嗜血杆菌 +
- +/-
嗜沫嗜血杆菌 +
-
-
溶血性嗜血杆菌 +
+
+
微生物特性
流感嗜血杆菌根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸试 验的反应不同可分为8个生物型；副流感嗜血 杆菌亦可分为8个生物型
感染菌可能性大，重复培养：2+ ～ 3+： 感染菌
多为wk.baidu.com染菌
CAP病原学诊断
检测结果（细菌、非典型病原体）判定
1. 确定: ① 血或胸液培养到病原菌 ② 纤支镜或人工气道吸取标本：
细菌>105cfu/ml（2+） BALF：细菌≥104cfu/ml（1-2+） PSB、PBALF：细菌>103cfu/ml（1+）
临床意义
流感嗜血杆菌： 常引起咽炎、中耳炎、肺炎、鼻炎、
脑膜炎、心包炎、骨髓炎等。
主要致病物质： 内毒素、荚膜、菌毛和酶类。
临床意义
副流感嗜血杆菌：咽炎和心内膜炎。 溶血嗜血杆菌：儿童上呼吸道感染。 埃及嗜血杆菌：急性眼结膜炎。 副嗜沫嗜血杆菌：心内膜炎、肺炎、
脑膜炎。
杜克嗜血杆菌：软下疳
培养特性：
以色列CAP的病因调查(1991-92: 346例)
45
阳
40 35
性 30
％ 25
20
15
10
5
0
肺炎链球菌 肺炎支原体 肺炎衣原体
军团菌 流布呼感氏吸嗜柯道血克病杆斯毒菌体
其它
Thorax 1999;51:179
以色列不同年龄组CAP的病因调查
第一位 第二位 17－44岁 肺炎支原体 肺炎链球菌 45－54岁 肺炎链球菌 肺炎支原体 >55岁 肺炎链球菌 肺炎衣原体
报告方式
痰培养以半定量形式记录菌量，即1+、 2+、3+、4+
未发现致病菌生长时，培养48小时出报 告，以免部分致病菌漏检
半定量培养结果的临床意义
半定量
（致病菌或条件 致病菌浓度）
相对定量
(CFU/ml )
临床意义
+
≤104±
多为污染菌
++
+++ ++++
≈105
≈106 ≥107±
污染菌可能性大，重复培养 1+：污染菌 2+：难以确定 3+：感染菌
➢意识障碍者可经鼻或口腔吸痰，或经 人工气道吸痰。
CAP病原学诊断
标本采集
➢咽试子应用无菌湿棉签取，即时送检。
➢ 实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼 脂（含抗菌素）， 置5-10％CO2气体 环境。
标本质量评价
直接涂片镜检： 鳞状上皮细胞<10/低倍视野 白细胞>25/低倍视野
炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
G-杆菌：嗜血杆菌、鲍特菌
嗜血杆菌属
嗜血杆菌属（Haemophilus）细菌为 一类无动力、无芽孢的革兰阴性短小杆 菌常呈球杆状、丝状等多形态。
分类
隶属巴斯德菌科，嗜血杆菌属。
本菌属包括16个菌种，其中9个与临床有关
临床意义
嗜血杆菌存在于正常人上呼吸道。 可引起上呼吸道、泌尿道感染及脑膜炎、 菌血症等感染性疾病。
③ 肺炎衣原体抗体滴度升高≥4倍 ④ LP直接荧光抗体阳性＋抗体滴度升高
CAP病原学诊断
检测结果判定
2.有意义: ① 合格痰标本培养细菌≥3+ ② 细菌少量生长，但与镜检结果一致 （肺球、流感、卡他莫拉菌） ③ 入院3天内多次培养到相同细菌 ④ 血清肺炎衣原体抗体升高≥1：32 ⑤ LP抗体升高≥1：320（ELISA）， 或间接荧光抗体≥1：512
报告
图 流感嗜血杆菌的检验程序
检验方法
（1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌
物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉 淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰 阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症 状，作初步诊断。
（2）分离培养：
将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼 脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于 巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35℃培养18～ 24h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫 星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试 验和荚膜肿胀试验分型。
CAP病原学诊断
我国苛养菌分离现状
未建立标本送检指南； 送检标本与接种时间相隔太长； 不具备苛养菌分离的培养基； 无CO2培养环境； 不能辨别菌落； 无鉴别试剂
苛养菌分离率低，污染菌影响药敏结果， 迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料。
CAP病原学诊断
标本采集
➢ 痰标本：采集应在抗菌治疗前，清 晨清水漱口三次，深咳痰。
流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原不同可分为a、
b、c、d、e、f 6个血清型，其中b型致病性最
强，f次之。
微生物特性
流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和耐热R 抗原。
流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为三种类 型：粘液型（M）、光滑型（S）、粗糙型 （R）。
微生物检验
标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试 子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥， 及时送检。
社区获得性呼吸道感染的病原学
社区获得性呼吸道感染常见病原菌
3% 7% 4% 7% 2%
12%
肺炎链球菌
流感嗜血杆菌
金葡菌
支厡体
嗜肺军团菌
65%
病毒
其他
其他致病菌包括：卡它莫拉菌、GNB、衣原体等
Adapted from Woodhead M.J Antimicrob Chemother .1994:34(suppl A):85-92
血液、脑脊液
检验程序
脑脊液、鼻咽试子、痰、脓液
增菌培养 35℃ 鉴定
分离培养 巧克力琼脂
血液琼脂
35℃ 5~10%CO2 挑选可疑菌落
直接涂片染色 革兰阴性小杆菌多形性
初报
分型
菌落特征 菌体形态 卫星试验 X、V因子需求试验
吲哚 、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型） 荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型）
CAP病原学诊断
检测结果判定 3. 无意义:
① 痰培养到上呼吸道正常菌（草链、表 葡、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等）
② 多种病原菌少量生长 ③ 不符上述“确定”和“有意义”条款
苛养菌
苛养菌：对营养要求苛刻，在普通培养 基上不生长或难以生长的一类细菌。
临床常见的有：
G+球菌：肺炎链球菌
G-球菌：卡他布兰汉菌、脑膜
鳞状上皮细胞：白细胞<1：2.5
细胞学筛选标本的必要性
细胞学筛选标本的必要性
标本处理
痰标本用无菌盐水约20ML漂洗2次 用等量sputosol 作用20分钟，溶解粘痰 用四区划线法分别接种血平板、巧克力
平板和麦康凯平板 放置CO2培养箱孵育 从采集标本到接种平板应短于2小时
需氧或兼性厌氧
最适生长温度： 35℃
PH
7.6-7.8
生长因子：X、V
5%-10% CO2
嗜血杆菌对生长因子的需求
菌种
X因子 V因子 溶血性
流感嗜血杆菌 +
+
-
副流感嗜血杆菌 -
+
-
埃及嗜血杆菌 +
+
-
杜克嗜血杆菌 +
- +/-
嗜沫嗜血杆菌 +
-
-
溶血性嗜血杆菌 +
+
+
微生物特性
流感嗜血杆菌根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸试 验的反应不同可分为8个生物型；副流感嗜血 杆菌亦可分为8个生物型
感染菌可能性大，重复培养：2+ ～ 3+： 感染菌
多为wk.baidu.com染菌
CAP病原学诊断
检测结果（细菌、非典型病原体）判定
1. 确定: ① 血或胸液培养到病原菌 ② 纤支镜或人工气道吸取标本：
细菌>105cfu/ml（2+） BALF：细菌≥104cfu/ml（1-2+） PSB、PBALF：细菌>103cfu/ml（1+）
临床意义
流感嗜血杆菌： 常引起咽炎、中耳炎、肺炎、鼻炎、
脑膜炎、心包炎、骨髓炎等。
主要致病物质： 内毒素、荚膜、菌毛和酶类。
临床意义
副流感嗜血杆菌：咽炎和心内膜炎。 溶血嗜血杆菌：儿童上呼吸道感染。 埃及嗜血杆菌：急性眼结膜炎。 副嗜沫嗜血杆菌：心内膜炎、肺炎、
脑膜炎。
杜克嗜血杆菌：软下疳
培养特性：
以色列CAP的病因调查(1991-92: 346例)
45
阳
40 35
性 30
％ 25
20
15
10
5
0
肺炎链球菌 肺炎支原体 肺炎衣原体
军团菌 流布呼感氏吸嗜柯道血克病杆斯毒菌体
其它
Thorax 1999;51:179
以色列不同年龄组CAP的病因调查
第一位 第二位 17－44岁 肺炎支原体 肺炎链球菌 45－54岁 肺炎链球菌 肺炎支原体 >55岁 肺炎链球菌 肺炎衣原体
报告方式
痰培养以半定量形式记录菌量，即1+、 2+、3+、4+
未发现致病菌生长时，培养48小时出报 告，以免部分致病菌漏检
半定量培养结果的临床意义
半定量
（致病菌或条件 致病菌浓度）
相对定量
(CFU/ml )
临床意义
+
≤104±
多为污染菌
++
+++ ++++
≈105
≈106 ≥107±
污染菌可能性大，重复培养 1+：污染菌 2+：难以确定 3+：感染菌