诊断学——临床常见病原体检测

菌落特征、生化反应结果和血清学实验进行鉴定 分离培养是微生物学检验中确诊的关键步骤，标本的正确采集尤为重要！
• 血清学试验
标本送检
• 一般要求标本采集后2小时内送达实验室。 • 血培养标本、脑脊液标本延迟送检不应放4℃保存。 • 烈性传染病标本需专人护送。
可能贴错条形 码
这样不对，扭 着我腰都酸啦！
标本的实验室质量评估标准
1、标本信息要全。 2、仔细核对标本采集日期和送检日期。延误的标本，一般情况
下不接收。通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过24h。 而病毒检测的标本可于4℃存放2～3天。 3、检查送检容器是否完整，有无破损或渗漏等情况，若有则不予 接收。 4、标本储存、运送方式不当，不予接收。
（三）病原体核酸的检测
• 常用试验方法有： 1、聚合酶链式反应PCR（polymerase chain reaction）。 2、核酸探针杂交技术 3、实时荧光定量PCR （Realtime PCR） 4、基因芯片等
（三）病原体核酸的检测
1.细菌
（四）病原体的分离培养和鉴定
采集合适的标本 合适的培养方法/培养基、培养条件
一、临床各类标本的采集运送和检查方法
标本采集的基本原则
➢根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位，尽量采 集病变明显部位标本。
➢在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗生素使用前（ 如使用过抗生素应在申请单上注明）。
➢采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖密封、立即送 检。
➢标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。 ➢所有的标本都视为感染性标本，做好安全防护。
（一）直接显微镜检查 （二）病原体特异性抗原检查 （三）病原体核酸检查 （四）病原体的分离培养和鉴定 （五）血清学试验
（一）直接显微镜检查-不染色标本
方法：压滴法、悬滴法、 湿片法。 意义：是否有生长、活动方式。部分
病原体可借此初步诊断，如梅毒螺 旋体。
（一）直接显微镜检查-染色标本
染色标本目的：了解细菌的形态、染色性或观察宿主细胞内 包涵体。
（一）血液标本的采集
菌血症、败血症或 脓毒血症
血液
采集时间
发热初期 发热前 2 小时
发热高峰期
采血量（ml） 成人：10-20 婴儿、儿童：5
需厌氧同时采集可增加阳性率
采集频率
24小时内 采血2~3次
（二）尿液标本的采集
采集量：10-20ml
中段尿
晨尿 注意清洁 外生殖器
Leabharlann Baidu
导尿
更换新的导 尿管
穿刺尿
脑膜炎奈瑟菌 肺炎链球菌 流感嗜血杆菌
不耐冷！
抗酸染色
阳性：菌体呈红色 阴性：菌体呈蓝色
主要用于分枝杆菌（结核）、奴卡菌鉴别
阳性
阴性
荧光染色
• 用形态学和免疫学相结合的方法可特异性地检测某些病原体的存在
阴道加德纳菌
沙眼衣原体
电镜检查
SARS（severe acute respiratory syndrome ） 病原体的确定。
电镜检查不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值
(二)病原体特异性抗原检查
原理：利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知 抗体检测患者血清及其他体液中的待测抗原。
方法：免疫荧光技术、酶联免疫技术、 化学发光 技术、乳凝集试验、对流免疫电泳
不足：标本中如果存在多种正常寄居微生 物， 可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。
标本的实验室质量评估标准
5、明显被污染的标本不予接收。 6、标本量明显不足的标本，不予接收。 7、同一天申请做同一实验的重复送检标本(血培养除外)，不予接收 8、对于烈性传染病标本的采集和运送应严格执行相关规定，要有完善
的防护措施，按规定包裹及冷藏，附有详细的采样及送检纪录，由 专人护送
检查方法
3-4 cm，轻轻转动并停留时10-15秒后取出
（八）创伤、组织和脓肿标本
创伤范围大 开放n性脓肿 封闭性脓肿 疑为厌氧菌
不同部位采集多份标本 采集脓液及病灶深部分泌物
无菌干燥注射器抽取
取脓液后立即排净注射器内空气， 针头插入无菌橡皮塞送检。
（九）血清
• 用于检测患者特异性抗原抗体 病毒肝炎性抗原抗体检测 梅毒、艾滋病病毒抗原抗体检测
采样容器：运送拭子
眼部标本：亦可在局部麻醉后取角膜刮屑。
耳标本：外耳道疖和中耳道炎用拭子采样， 鼓膜穿刺亦可用于新生儿和老年人。
（七）泌尿生殖道标本采集
（七）泌尿生殖道标本采集
男性： • 尿道口分泌物：性传播性疾病 • 前列腺液：前列腺炎 • 尿道拭子：在取材前2小时内不应排尿，用男性采样拭子插入尿道
考虑厌氧菌 感染
（四）呼吸道标本
类型：鼻咽拭子、痰 经气管采集的标本。
合格痰标本 鳞状上皮≤10/LP。
上呼吸道存在正常菌群， 在采集标本与结果分析
时应予考虑！
（五）脑脊液与其它无菌体液采集
胸水 腹水 心包液
无菌采集是培养成功 的首要因素!
脑膜炎奈瑟菌 肺炎链球菌 流感嗜血杆菌
不耐冷！
（六）眼、耳标本采集
(二)病原体特异性抗原检查
细菌的血清分型： • 检测细菌不同的抗原构造，还可分析细菌的菌群和血清型，如沙门
菌属、志贺菌属和霍乱菌属等
（三）病原体核酸的检测
意义 • 灵敏度高，是检测病原体微生物最灵敏的方法，但具有一定
的假阳性与假阴性。 • 特异性强，阳性只表明存在某种病原体的核酸，是否正被感
染应结合临床具体分析。 • 特别适用于目前尚不能分离培养或很难分离培养的微生物。 • 适用于核酸变异的病原微生物，如病毒
诊断学——临床常见病原体 检测
掌 1、临床各类标本的采集、运送和检查的方法；
握 2、临床常见病原体的种类分布及变迁情况 ；
3、耐药病原体检测的意义。
熟
医院感染常见病原体的检查。
悉 了 1、药敏试验的原理和方法
解 2、性传播疾病病原体检查的内容
一、临床各类标本的采集运送和检查方法 二、病原体耐药性检测 三、临床常见病原体检测 四、病毒性肝炎检测 五、性传播疾病病原体检测 六、医院感染常见病原体检测
方法：革兰染色、墨汁染色、抗酸染色、荧光染色 意义：快速诊断的方法之一
• 阳性：紫色或紫红色 • 阴性：红色
革兰染色
阳 性 球 菌
阴性杆菌 真菌孢子
墨汁染色
目的：检查新型隐球菌
宽厚荚膜
脑脊液标本如不能及时送检，是否可冷藏保存？为什么？
（五）脑脊液与其它无菌体液采集
胸水 腹水 心包液
无菌采集是培养成功 的首要因素!