肌钙蛋白(TPI)检测作业指导书 医学检验

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文件名称:肌钙蛋白（TPI）检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02
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文件信息表
(Procedure information form)
表号: KM-MP03•02•04 文件名称
Title of DOC.(Doc. Code)
肌钙蛋白（TPI）检测作业指导书（KM-SOP0300•346）
版本号(Edition No.) Edition 3.0 生效日期(Operative
date)
2008-03-13
文控部门
(Doc. Control Dept.)
实验室文控室
回顾日期/签名(Review date /signature ) 回顾日期
(Review
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替代文件(Replaces) 肌钙蛋白（TPI）检测作业指导书(Edition 2.0)
存放地点(Location)/持有人（Holder）No. Location （Holder） No. Location （Holder）
1 实验室文控室（陈彬）
2 化学发光室（段学成）
作者签名/日期(Author signature/date)
廖巍俊审批人签名/日期(Authorized by :
Signature/Date)
陈建波
接收人签名/日期
（Receiptor/Date）
副本数(Copy No.)
肌钙蛋白I（TPI）检测作业指导书
（Standard operation procedure for analysis of Troponin I）
1. 原理（Test principle）:
固相、酶标记化学发光免疫量度检测。

固相（包被珠）包被有鼠单克隆TN I抗体，试剂含有碱性磷酸酶标记的兔抗TN I多克隆抗体。

试剂与样本中的TN I同时与包被有鼠单克隆TN I抗体的包被珠温育，形成抗体夹心复合物。

未结合的酶标记物经离心去除，最终加入化学发光底物，产生与结合酶成比例的光信号。

2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:
标本收集（Specimen collection）:类型（Type）:血清(Serum)或血浆（plasma）;用量(Volume)0.4mL，仪器加样量(Sampling volume)50μL
拒收标本（Specimen rejection）：EDTA抗凝血，严重脂血或污染的样本应拒收。

推荐使用超速离心清除脂血（lipoprotein）样本。

溶血（hemolysis）样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。

血清（serum）样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。

为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。

对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。

源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。

本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。

标本储存条件(Specimen storage conditions)：室温(Room temperature):2-8℃8小时；冷藏5天；十天后处理标本
3、试剂(Reagent)：
3.1美国IMMULITE 原装试剂。

3.1.1试剂内组份(Components)：
试剂盒组分必须成套使用，条码为实验必需。

Troponin I 检测单位（LTI1）
每个带有条码的检测单位内有一个包被珠，包被有单克隆鼠抗肌钙蛋白I抗体。

2-8℃可稳定至失效期。

(Stored in 2～8℃based on manufacturer instruction) LKTI1：100个，LKTI5：500个
打开包装之前应恢复至室温，从包装顶部剪开，完整保留拉链隆起缘。

使用后将拉链重新封好，避免潮湿。

Troponin I 试剂楔（LTI2）
试剂楔带有条码。

7.5mL碱性磷酸酶标记的多克隆羊抗肌钙蛋白I抗体缓冲液，含防腐剂。

封盖低温保存：2-8℃可稳定至失效期。

建议打开包装后在提示保存条件下30天内用完。

LKTI1：1个，LKTI5：5个
Troponin I校正（LTIL，LTIH）
两瓶（低、高）冻干的含肌钙蛋白I的非人血清基质。

使用前至少30分钟复溶，每瓶加3.0mL蒸馏水或去离子水。

轻轻翻转混匀，直到冻干粉全部充分溶解。

复溶后2~8℃可稳定30天，或-20℃可稳定6个月（分装）。

LKTI1：1套，LKTI5：2套
3.1.2未随试剂盒提供的组分
Troponin I 样本稀释液：（LTIZ）
用于人工稀释病人样本。

每瓶25mL，为不含肌钙蛋白I的非人血清基质。

开封后，2~8℃可稳定30天，或-20℃可稳定6个月（分装）。

LSUBX：化学发光底物
LPWS2：探针清洗液
LKPM：探针清洗试剂盒
LCHx-y：样本杯架（带条码）
LSCP：样本杯（一次性）
LSCC：样本杯盖（可选）
CCCM：双水平，非人血清基质的心肌标志物质控，肌钙蛋白是其中四种不同成分之一。

其它必需：样本加样戏管、蒸馏水或去离子水、质控。

3.2试剂准备(Reagent preperation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。

Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time;New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Recod the results.
4 仪器（Instrument）：美国IMMULITE.
4.1 仪器准备（Prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。

然后运行仪器操作软件。

而后排水及底物，防止内有残留气柱。

在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。

5.安全防范（Safety Precautions）：
操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6校准（Calibration if Applicable）：
6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage)：美国IMMULITE 原装校准品。

要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。

Stop using overdue calibration e it within expiration date,storage in 2-8℃
配制（Calibration material redissolve）：用复溶专用加样枪准确吸取2mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。

Label confecting date ,calibration lot,person who confected, expiration date.then
复溶后校准品成分的稳定性：保存于15~25℃，可稳定8小时
保存于2~8℃，可稳定2天
保存于（-15）~（-25）℃，可稳定1个月（不可反复冻融）。

6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(If one of the two happens, recalibration )
（1）试剂批号改变(Reagent lot changes)
（2）根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) （3）校准周期（Frequency of calibration）：两周(Two weeks)。

6.3步骤：在计算机屏幕上选择kit Entry项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择Patient Entry项，输入校正信息.然后将两个样本杯中分别加入至少600ul的A，B 校准品，放在加样履带上。

点击GO。

仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。

校准结果判断标准: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。

7操作过程：(Procedural Steps)
7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清. 本项目编号为2xxx（一个x 代表一个阿拉伯数字）。

7.2取出空样本杯架，将空的样本杯放入样本杯架上。

将离好的血清加入对应的样本杯中。

7.3将样品杯放到进样链条的箭头处，其后放入TPI反应杯。

在Worklist Enter中输入样品杯中样品相对应的实验号。

结果出来后，打印机自动打印出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。

7.4数据联机入系统( Send data to LIS )
数据审核(Data checkup)：联机是否正确？对照申请表格与仪器LIST中的实验号和加样杯号是否一一正确对应，原始导出结果与系统结果是否对应。

8质量控制(Quality control)：
使用心肌标志物专用质控,当室内质控失控时，重取质控品重新检测一次；若室内质控仍不能满足要求，则检查校准是否过期，重新校准，再检测室内质控；仍不能满足
要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。

室内质控操作过程：从冰箱冷冻格拿出的分装质控品必须放置室温半小时以上，每次用量至少180ul，上机操作同日常标本。

BMG最大允许误差ALE为22%，室内质控CV为5.12%（低）、2.99%（高），偏移为4.59%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则:13s/22s/R4s/41s N=2; 高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41s N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理
9计算(Calculations if Applicable)：无
10 参考范围：(reference interval)
统计100份合格体检标本:（广东省职业病防治院，详情请在系统中搜索）
样本含量:100
结果全部在我们给的范围：低于1.0ng/mL
所以得到验证，参考区间为：低于1.0ng/mL。

11 结果解释：（Interpretation of Results）
血清TPⅠ变化可反映心急细胞的损伤程度。

心肌损伤后3～6小时开始升高，14～20小时达高峰，5～7天恢复。

TPⅠ尽管特异性高，但是其灵敏度较底。

因此只有发生了心肌损伤3~6小时以后才可见TP I升高。

12方法的局限性（Method Limitations）：
采用EDTA血浆样本会得到偏低的检测结果。

人血清中的嗜异性抗体会与试剂盒组分中的免疫球蛋白发生反应，从而干扰体外免疫检测【见Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-33】。

经常接触动物或动物血清制品的病人样本可证明这种潜在导致异常结果干扰的存在。

已经证明这些试剂可以将这种风险最小化，但是少数情况下血清与实验组分之间潜在的交叉反应还是会出现。

为达到诊断目的，次实验的检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。

12.1精密度（Precision）:
2.1 批间精密度:取2006年11月份的肌钙蛋白I质控记录作统计(单位pmol/L)
Mean SD CV%
0.8910 0.0456 5.12%
17.7733 0.5311 2.99%
总体数据均在1/3SD范围内，与厂商声称的情况相比基本一致，符合要求。

2.2批内精密度:选择医学决定水平附近的病人样本,在相当短的时间测定10个数据,测定时带质控,且质控在控:
Mean SD CV%
3.79 0.129 3.39%
总体数据均在1/3SD范范围内，与厂商声称的情况相比基本一致，符合要求。

12.2灵敏度（Sensitivity）：0.1ng/mL
12.3分析测试范围（AMR）：0.1~180ng/mL
12.4病人结果报告范围（CRR）：0.1~720 ng/mL
12.5稀释(Dilution)：
需要手工稀释的样品，用去离子水将样本稀释4倍（加稀释液160uL，血清40uL稀释），其他操作跟样本操作相同。

最大稀释倍数为4倍。

稀释材料（Dilution material）:去离子水
最大稀释倍数（Dilution times）:1:4(40ul Sample: 160ul diluent)
12.7干扰物质（Interfering Substances）：
胆红素影响（Bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至200 mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。

溶血影响（Hemolysis）：样本中压积红细胞的浓度直至30 µL/mL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。

脂血影响（Lipoprotein）：样本中甘油三酯的浓度直至5000 mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。

12.8注意事项（Notices）仅供体外诊断使用。

(Use only for invitro diagnosis)
●试剂：2～8℃保存。

其处理应遵守相应的法律规定。

●对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。

源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV 1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有反应。

●加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。

其处理措施应采用在铅或铜质容
器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。

●化学发光底物：避免污染和日光直射。

（参见说明）
●水：使用蒸馏水或去离子水。

12.9其他（Others）：方法学比较或项目的特殊要求等。

13 临床意义：（Clinical Significance）
生物学特性：
可抑制肌动蛋白中ATP酶活性，使肌肉松弛，防止肌纤维收缩。

心肌损伤使，TNⅠ释放入血液，血清TNⅠ变化可反映心急细胞的损伤程度。

心肌损伤后3～6小时开始升高，14～20小时达高峰，5～7天恢复。

TNⅠ尽管灵敏度较低，但特异性较高。

升高见于：
急性心梗等心肌损害，在急性心肌炎中也会升高，但多为低水平增高。

14参考文献：（References）
①Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies:a problem for all
immunoassays.Clin Chem 1988:34:27-33
②IMMULITE Troponin I试剂说明书
③中华医学检验全书
④IMMULITE 操作说明书。