本科毕业设计论文-金属离子的探针检测

摘要
金属离子是化学、生命科学、环境科学和医学等许多科学领域研究的重要对象，对溶液中金属离子的识别和检测是分析化学的主要任务之一。

荧光分子探针检测法不仅简便，而且在高灵敏度、选择性、时间分辨、实时原位检测方面均有突出优点。

因此在传统的受体分子上按照荧光分子传感器设计原理连接荧光团构造的超分子荧光传感器用于识别金属离子的研究受到越来越广泛的关注。

本论文主要工作是对已合成的荧光探针化合物利用紫外可见分光光度计和荧光分光光度计进行检测。

本研究进行了多个不同探针对不同金属离子的检测，其中有两个比较成功。

一个是对铜离子有高选择性的探针A对水中铜离子检测，在对检测液进行3D扫描后得出探针A的检测波长，即探针A检测铜离子的激发波长EX=550nm，发射波长EM=590nm。

在对不同浓度的铜离子的荧光扫描中得出探针检测铜离子的标准曲线，其线性方程为y=1.761x+12.4。

从标准曲线中得出该探针A的检测限为6.345μM／L。

该探针检测限低，具有良好的选择性，无其他金属干扰。

是一种方便快捷的检测方法。

另一个是对汞离子具有高选择性的探针B对水中汞离子的检测，在对检测液进行3D扫描后得出探针B的检测波长，即探针B检测汞离子的激发波长EX=570nm，发射波长EM=594nm。

在对不同浓度的汞离子的荧光扫描中得出探针B检测汞离子的标准曲线，其线性方程为y=1871.8x―181.5。

从标准曲线中得出探针B的检测限为0.239μM／L，在对其进行不同PH检测中得出检测液的适宜PH值为6—8 。

在此PH值响应值较高，检测结果较理想。

还得出该探针具有良好的选择性，我其他金属干扰。

探针B的优点是水溶性好，完全水溶，使得在实际应用中可直接用水做缓冲溶剂，使检测更加方便快捷。

关键词：金属离子；荧光探针；Cu2+；Hg2+
Fluorescent chemosensors for selective detection of metal ions
in natural water
Abstract
The analysis and detection of the transition metal ions is currently of significant importance for chemistry, as they are closed with biology, environment and clinic. The method of fluorescence is not only simple but also can realize space, real time, high sensitive and selective. So the fluorescence supramolecular sensors, which are composed of traditional receptors connecting fluorophores, to metal ions are attracting many people‘s attentions.
In this paper, our main work is to test the fluorescent probe A that have already synthesized by UV-vis spectrophotometer and fluorescence spectrophotometer. During the research progress, we test several different probes, in which the following two is the best. The first one is a high selective probe of copper ions in a CH3CN/H2O solution. We got the Excitation wavelength 550nm and the emission wavelength 590nm by the 3D scanning. We also tested different concentrations of copper ions with the fluorescent probe to get the standard curve y=1.761x+12.4. And the gainod the detection limit to 6.345 from the standard curve. This fluorescent probe has advantages of low detection limit, good selectivity and no other metal ions interference. The other one is a high selective probe of mercury ions. In 100﹪ aqueous solution. We got the excitation wavelength 570nm and the emission wavelength 594nm by the 3D scanning. We also tested different concentrations of mercury ions with the fluorescent probe to get the standard curve y=1871.8x―181.5. And the gainod the detection limit to 0.239 from the standard curve. This fluorescent probe has advantages of low detection limit, good selectivity and no other metal ions interference.
Key words: Metal ion; Fluorescent probe; Cu2+；Hg2+
目录
摘要 (1)
Abstract (2)
插图或附表清单 (1)
引言 (3)
1绪论 (4)
1.1金属离子识别的意义和方法简介 (4)
1.2荧光光谱 (5)
1.2.1荧光的产生 (5)
1.2.2荧光光谱的基本概念 (5)
1.2.3荧光光谱的主要参量 (6)
1.3荧光分析法 (7)
1.3.1荧光分析法的发展简史 (7)
1.3.2荧光分析法定量分析及其原理 (8)
1.3.3荧光分析的优点 (10)
1.3.4荧光定量分析的各种条件 (10)
1.4荧光分析法的灵敏度和选择性 (11)
1.5荧光的影响因素 (12)
1.5.1分子结构与荧光的关系 (12)
1.5.2环境因素对荧光的影响 (13)
1.6荧光分析法的应用 (14)
1.6.1金属离子检测中的应用 (14)
1.6.2有机污染物检测中的应用 (15)
1.6.3无机污染物检测中的应用[72,73-79] (15)
1.6.4有毒有害气体检测中的应用 (16)
1.6.5微量元素检测中的应用 (17)
1.6.6其他的检测应用 (17)
1.7荧光分子探针 (18)
1.7.1概述 (18)
1.7.2荧光分子探针的研究现状 (19)
1.8荧光分子探针用于金属离子识别的研究现状 (19)
2铜离子探针对铜离子含量的测定 (20)
2.1本章引论 (20)
2.2实验部分 (21)
2.2.1试剂 (21)
2.2.2仪器 (22)
2.2.3溶液的配制 (22)
2.2.4测定铜离子含量的操作方法 (22)
2.3实验结果与讨论 (28)
2.3.1探针与铜离子反应时间对检测的影响 (28)
2.3.3干扰离子对铜离子分析检测的影响 (28)
2.3.4测量范围及极线性分析 (29)
2.4本章小结 (29)
3汞离子探针对汞离子含量的测定 (29)
3.1引言 (29)
3.2实验部分 (30)
3.2.1试剂 (30)
3.2.2仪器 (30)
3.2.3溶液的配制 (30)
3.2.4测定汞离子含量的操作方法 (30)
3.3实验结果与讨论 (39)
3.3.1不同溶剂对荧光光谱的影响 (39)
3.3.2 PH的影响 (40)
3.3.3干扰离子对铜离子分析检测的影响 (40)
3.3.4测量范围及极线性分析 (40)
3.3.5反应时间对检测的影响 (41)
3.4本章小结 (41)
结论 (42)
参考文献 (43)
附录 (54)
致谢 (71)
插图或附表清单
图1.1 2003—2008年间相关的SIC文章数量 (20)
图2.1铜离子探针A紫外可见光光谱扫描 (22)
图2.2铜离子探针A荧光3D扫描图 (23)
图2.3设定激发波长EX为550nm扫描发射波长从500nm到700nm的荧光强度 (24)
图2.4设定发射波长EM为590nm扫描激发波长从450nm到700nm的荧光强度 (24)
图2.5固定铜离子浓度变探针A的浓度荧光扫描散点图 (25)
图2.6加入铜离子后随着时间的增加荧光强度的变化曲线 (26)
图2.7探针A的标准曲线 (27)
图2.8探针A检测干扰曲线 (28)
图3.1汞离子探针B紫外可见光光谱扫描 (31)
图3.2汞离子探针B空白3D扫描谱图 (32)
图3.3汞离子探针B荧光3D扫描图 (32)
图3.4设定激发波长EX为570nm到700nm的荧光强度 (33)
图3.5设定发射波长EM为594nm扫描激发波长从450nm到700nm的荧光强度 (33)
图3.6不加探针和加入探针溶液颜色比较 (34)
图3.7固定汞离子浓度变探针B的浓度荧光扫描散点图 (35)
图3.8变PBS对荧光强度的影响 (36)
图3.9探针B检测汞离子荧光强度随时间变化曲线 (37)
图3.10不同浓度的汞离子荧光曲线 (38)
图3.11扫描的标准曲线 (38)
图3.12汞离子检测干扰曲线 (39)
注释说明清单HEPES 4-羟乙基哌嗪乙磺酸
UV-VIS 紫外可见光谱仪
PBS 磷酸盐缓冲液
引言
社会的发展带来了城市化的扩大、人口的增加、人民生活水平的提高，然而随之而来的是人类活动导致的环境污染的急剧增加。

人工合成各类化学药品的数目及产量以指数增长速度递增，造成了许多环境问题。

面对这种现实，环境保护成为每个人义不容辞的职责，这也是国民经济持续发展的必需。

鉴于此，环境化学已被列为化学中五个应优先发展的尖端领域之一。

作为环境化学的一个重要分支，环境分析化学，又是环境科学和环境保护的重要基础。

它是研究环境中污染物的种类、成分，以及如何对环境中化学污染物进行定性分析和定量分析的一个学科。

由于其研究对象广，污染物含量低，所以要求分析手段有更高的灵敏度和更低的检测限;更高的分析速度和自动化程度; 更高的准确度和更好的精密度;更好的选择性和更少的物质干扰;更完善可信的形态分析。

要达到这一目标，就要应用
现代分析化学中的各项新成就，以及其他技术科学的最新成就，来共同解决环境污染分析问题。

这其中之一就是研究发展适用于环境污染分析的新型仪器;以及研究新型的分
析方法，特别是发展准确、可靠、灵敏、快速、选择性强、简便的环境污染分析技术和新型污染物的分析测试方法。

分子荧光分析是一种重要的光谱化学分析手段，可以说其集众优点于一身，不仅检测限低，灵敏度高，选择性好，而且方法简捷快速。

其中荧光分子探针检测技术在环境分析化学中占有重要的地位[1]。

荧光分子探针检测技术已经在短时间迅速发展成为分析领域中最重要的研究领域之一，并成功地应用于新型环境污染自动检测网络系统的建立、生产过程和化学反应的自动控制、临床化学中各种无机和有机分析、药物分析、免疫分析、生命分析及生命科学等领域[2]。

随着近场光学纳米技术的发展和亚微米极的出现，大大地缩小光化学传感器的几何尺寸，从而使活体内单个细胞的无损伤分析成为可能[3]。

并且荧光探针无需参比，不受电场、磁场的影响、易于通过光纤实现远程实时、在线自动监测而极为引人注目[4].。

1绪论
1.1金属离子识别的意义和方法简介
自然界中广泛存在着多种碱金属、碱土金属、过渡金属和重金属元素。

这些金属元素在环境、生物、医学、化学科学中都具有非常重要的功能和作用。

例如：碱金属钠、钾离子是在生命体中大量存在的电解质离子；碱土金属钙、镁离子是生命体中重要的组成部分和信号转导离子；过渡金属、重金属离子的功能和作用则更加丰富，它们在不同浓度下往往会显示出差异性的正面作用或负面作用，比如锌离子和铜离子浓度低于1μM时，在许多生命过程（生物催化反应酶的辅酶、生物运输过程、生物合成等）中都是不可或缺的[5,6]，然而，当在生物体中存在浓度过高时，这些过渡金属则会产生对一些必须酶的抑制作用、生物氧化/还原过程异常、神经毒性等有害作用[7,8]。

一些重金属如汞、六价铬、铅、镉等，是剧毒类金属元素，它们具有较强的潜在致癌和致畸性，对生物细胞、组织的毒性非常大，可使与新陈代谢相关的酶、生物蛋白质合成等出现异常。

有益金属离子在生命体系中具有重要作用，缺乏它们将影响正常的生理活动，生物体需要适量摄入；而有害金属离子对环境和健康的危害极大，往往来源于工农业生产的排放物。

因此，对于各种金属离子的准确定量分析和识别，将非常有助于研究生命必须金属元素在生物体中产生作用的机理、及时发现所缺金属元素并进行补充、有效监控环境危害重金属离子在水质、土壤等环境样品中的存在等重要研究课题的开展。

目前常用的金属离子分析检测方法主要分为直接法和间接法两大类[9]。

直接法是一类直接利用金属离子自身物理、化学性质对其进行分析检测的方法，包括原子吸收/发射光谱法和离子选择性电极法；间接法是一类利用金属离子和指示剂（也可称为化学分子探针）之间的特异性化学反应或超分子作用产生的信号变化对金属离子进行分析检测的方法，包括传统的金属离子指示剂和近年来研究较热的金属离子荧光分子探针。

直接法和间接法各有其优点和缺点。

例如：原子吸收/发射光谱法的优点是技术成熟、分析灵敏可靠、受样品中有机杂质等的干扰很小，缺点是仪器复杂、需要高温原子化部件、分析时能耗和成本高；离子选择性电极法的优点是分析灵敏、对特定金属离子选择性好、电信号可方便的转换到用户界面，缺点是电极表面情况对分析结果影响较大、需要
对电极进行保养、分析前需要繁琐的标定过程、溶液中电化学活性杂质对分析结果的影响较大；传统指示剂的优点是简单方便，缺点是灵敏度和选择性较低；金属离子荧光分子探针的优点是简单方便、对特定金属离子的选择性和灵敏度都较高、可对金属离子实现（细胞内）原位分析和成像分析，缺点是研究尚不如传统方法成熟、荧光分子探针的设计和合成没有针对每种金属离子的一般性通法。

1.2荧光光谱
1.2.1荧光的产生
荧光是一种光致发光现象。

室温下，大多数分子处于在基态的最低振动能层。

处于基态的分子吸收能量(电能、热能、化学能或光能等)后被激发，跃迁到激发态，激发态不稳定，分子将很快衰变到基态。

若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象称为“发光”。

荧光和磷光是最常见的两种光致发光。

但是，荧光和磷光这两种光致发光过程的产生机制有十分明显的区别。

荧光的产生有对光子的吸收和再发射这两个过程。

两个过程都是瞬时的，在这两个过程中存在时间间隔，一般为8-10S左右，这一间隔的时间长短是可变化的。

因为在这一段时间内处于激发态的分子发射荧光去活过程与各种无辐射去活过程是相互竞争的，当光进入物质以后，可能有两种情况:一种是进入物质后，能量几乎不被吸收;另一种是能量效率取决于分子的环境因素，而荧光发生的内在因素则取决于分子的结构，大多数荧光物质都含有兀→兀*跃迁的苯环及其衍生物[10,11]。

1.2.2荧光光谱的基本概念
根据量子理论，微观体系(原子、分子等)的内部运动一般是不连续的，有一系列分立的能级。

体系由一能级向其他能级的过渡称为跃迁。

体系由高向低能级的跃迁伴随着能量的释放;由低能级向高能级跃迁伴随着能量的吸能量的释放和吸收可以以辐射的方式进行(放出或吸收光子)，成为辐射跃迁也可以以无辐射的方式进行，如离子相互碰撞而产生的能量就是无辐射跃迁子。

全部能级间可能的辐射跃迁对应于一系列辐射频率，成为该物质的光谱。

光光谱包括激发谱和发射谱两种。

激发谱是荧光物质在不同波长的激发光作用测得的某一波长处的荧光强度的变化情况，也就是不同波长的激发光的相对效发射谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况，就是荧
光中不同波长的光成分的相对强度。

同辐射发射和吸收相关联的除了原和分子外，还有他们的聚集结构—如晶格、半导体中的电子空穴对等等。

荧光现象涉及分子的激发和发射两种过程，因而它能提供比吸收光谱更信息。

荧光光谱具备以下三个特征[12]:
①激发光谱的形状和吸收光谱极为相似;
②发射光的形态和激发光的波长无关;
③发射光的形状和吸收光谱极为相似，且基本上呈镜像对称关系。

1.2.3荧光光谱的主要参量
1.激发谱和发射谱
荧光光谱包括激发谱和发射谱两种。

激发谱是荧光团在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处(通常是其荧光光谱峰位的波长)的荧光强度的变化情况，也就是不同波长的激发光的相对效率。

激发光谱的形状与吸收光谱的形状极为相似，经校正后的真实激发光谱与吸收光谱不仅形状相同，而且波长位置也一样。

这是因为物质分子吸收能量的过程就是激发过程。

发射光谱则是某一固定波长的激发光作用下荧光强度在不同波长处的分布情况，也就是荧光中不同波长的光成分的相对强度。

荧光发射光谱显示了若干普遍的特性[13]。

(1)斯托克斯位移。

在溶液荧光光谱中，所观察到的荧光发射波长总是大于激发波长，因为首次发现这种波长位移现象的人是Stokes，故称Stokes位移。

这是由于受激分子通过振动驰豫而失去振动能，也由于溶液中溶剂分子与受激分子的碰撞，也会有能量的损失。

因此在激发和发射之间产生了能量损失。

(2)荧光发射光谱的形状与激发波长、发射波长无关。

这是因为分子吸收了不同能量的光子可以有基态激发到几个不同的电子激发态，而具有几个吸收带。

由于较高激发态通过内转换及振动驰豫回到第一电子激发态的几率是很高的，远大于由高能激发态直接发射光子的速度，故在荧光发射时，不论用哪一个波长的光辐射激发，电子都从第一电子激发态的最低振动能层返回到基态的各个振动能层，所以荧光发射光谱与激发波长无关。

(3)镜像规则。

通常荧光发射光和他的吸收光谱呈镜像对称关系。

在发射谱中最大荧光强度的位置常记为λmax，它是荧光光谱的一个重要参数，且对环境的极性和荧光团的运动均敏感。

2.荧光寿命
当某种物质被一束激光激发后，该物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态上，再以辐射跃迁的形式发出荧光回到基态.当激发停止后，分子的荧光强度降到激发时最大强度的l/e所需的时间称为荧光寿命，通常用丫表示。

通过测量寿命可以得到有关分子结构和动力学等方面的许多信息[14,15]。

3.荧光量子产率
荧光量子产率(fluorescent quantum yield)又称荧光量子效率，通常用ΦF表示。

是指激发态分子中通过发射荧光而回到基态的分子占全部激发态分子的分数，荧光量子产率(ΦF)即荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。

它的数值在通常情况下总是小于1。

ΦF的数值越大则化合物的荧光越强，而无荧光的物质的荧光量子产率却等于或非常接近于零[16,17]。

Φ对于荧光团周围的环境以及各种碎灭过程很敏感，ΦF的改变必然会引起荧光强度的改变。

因此，若要研究ΦF的相对值，我们只需测荧光强度就可以。

4.荧光强度
荧光强度F取决于激发态的初始分布I A与ΦF的乘积。

这里的F指的是向各个方向上发射的荧光强度的总和，实际上，光谱仪收集的只是其中的一小部分，因此仪器测到的荧光强度为F=I AΦF Z，这里Z是仪器因子[18,19]。

很显然荧光强度与样品在波长λA处的消光系数有关，而消光系数与激发波长是密切相关的，消光系数随波长的变化称为即吸收谱，因此荧光强度也随激发波长的变化而变化。

实际上仪器因子Z与波长是有关的，这就使得激发谱与吸收谱并不完全相似。

1.3荧光分析法
1.3.1荧光分析法的发展简史
具有荧光性质的物质分子中都具有一系列紧密相隔的电子能级，当物质受到紫外光或可见光照射时，由于这些光子的能量较高，可引起物质分子中的电子发生能级间的跃迁而变成电子激发态分子。

电子激发态分子不稳定，可能通过辐射跃迁等分子内去活化
过程丧失多余的能量返回基态，在此过程中，发生光子的发射，伴随着荧光产生。

荧光是某种物质在吸收光能后重新发射不同波长的光，具有不同的颜色和不同强度。

根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量的方法，称为荧光分析法[20,21]。

第一次记录荧光现象的是16世经西班牙的内科医生的植物学家N.Monardes，1575年他提到在含有一种称为“Lignum NePhriticum”的木头切片的水溶液中，呈现了极为可爱的天蓝色。

17世纪和18世纪中还发现了其它一些发荧光的材料和溶液，然而在解释荧光现象方面却几乎没有什么进展。

直到1852年，Stokes在考察奎宁和叶绿素的荧光时，用分光计观察到其荧光的波长比入射光的波长稍长些，判明这咱现象是是物质在吸收光后重新发射不同波长的光，从而导入了荧光是光发射的概念。

历史上首次利用荧光做分析的是1867年Goppelsroder应用铝一桑色素配合物的荧光进行铝的测定。

自此，荧光分析越来越受到人们的关注。

20世纪以来，随着激光、微处理机和电子学的新成就等一些新的科学技术的引入，大大推动了荧光分析法理论方面的进展，促进了诸如同步荧光测定、导数荧光测定、时间分辨荧光测定、荧光偏振测定、荧光免疫测定、低温荧光测定、固体表面荧光测定、荧光反应速率法、三维荧光光谱技术和荧光光纤化学传感器等荧光分析方面的某些新方法、新技术的发展，并且相应地加速了各式各样新型的荧光分析仪器的问世，方法的应用范围大大扩展，遍及于工业、农业、医药卫生、环境保护、公安情报和科学研究等各个领域中。

如今，荧光分析法己经成为一种十分重要而且有效的光谱化学分析手段，并不断地有新方法、新技术、新应用和研究进展的专著出版[22-28]。

1.3.2荧光分析法定量分析及其原理
荧光分析法的定量测定方法较多，可分为直接测定法和间接测定法两类。

1.直接测定法:
利用荧光分析法对被分析物质进行浓度测定，最简单的便是直接测定法。

某些物质只要本身能发荧光，只须将含这类物质的样品作适当的前处理或分离除去干扰物质，即可通过测量它的荧光强度来测定其浓度[29,30]。

具体方法有两种。

(1)直接比较法:配制标准溶液的荧光强度Fx，己知标准溶液的浓度CS，便可求得样品中待测荧光物质的含量。

如果空白溶液的荧光强度调不到零，则必须从Fs和Fx值中扣除空白溶液的荧光强度F O，然后进行计算。

(2)标准曲线法:将已知含量的标准品经过和样品同样处理后，配成一系列标准溶液，测定其荧光强度，以荧光强度对荧光物质含量绘制标准曲线。

再测定样品溶液的荧光强度，由标准曲线便可求出样品中待测荧光物质的含量。

为了使各次所绘制的标准曲线能重合一致，每次应以同一标准溶液对仪器进行校正。

如果该溶液在紫外光照射下不够稳定，则必须改用另一种稳定而荧光峰相近的标准溶液来进行校正。

例如，测定维生素B1时，可用硫酸奎宁溶液作为基准;测定维生素
B2时，可用荧光素钠溶液作为基准来校正仪器[31,32]。

2.间接测定法:
有许多物质，它们本身不能发荧光，或者荧光量子产率很低，仅能显现非常微弱的荧光，无法直接测定，这时可采用间接测定方法[33,34]。

间接测定方法有以下几种:
(l)化学转化法:通过化学反应将非荧光物质变为适合于测定的荧光物质。

例如金属与鳌合剂反应生成具有荧光的螯合物[35,36]。

有机化合物可通过光化学反应、降解、氧化还原、偶联、缩合或酶促反应，使它们转化为荧光物质。

(2)荧光碎灭法:这种方法是利用本身不发荧光的被分析物质能使某种荧光化合物的荧光碎灭的性质，通过测量荧光化合物荧光强度的下降，间接地测定该物质的浓度[37,38]。

(3)敏化发光法:对于很低浓度的分析物质，如果采用一般的荧光测定方法，其荧光信号太弱而无法检测，可使用一种物质(敏化剂)以吸收激发光，然后将激发光能传递给发荧光的分析物质，从而提高被分析物质测定的灵敏度。

在实验室，一般采用工作曲线法进行校正。

既用处理过的已知量的物质，和式样溶液配成标准溶液，测定其荧光强度，再以标准溶液浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标绘制工作曲线。

然后由所测得的试样溶液的荧光强度对照工作曲线以求出试样溶液中分析物质的浓度。

有时候可以通过加入某种化合物于试样溶液中，而这种化合物可特效地碎灭分析物质的荧光，从而获得一种很接近于真实空白的空白溶液[39,40]。

1.3.3荧光分析的优点
荧光分析法凭借其高灵敏度，得以迅速发展。

众所周知在微量物质的各种分析方法中，比色法和分光光度法应用最为广泛。

而荧光分析法的灵敏度一般要比这两种方法高2~3个数量级，它的灵敏度常可达亿分之几。

这是因为在荧光分析中，是由所测得的荧光强度来测定荧光物质的含量，而荧光强度的测量值不仅和被测溶液中荧光物质的本性及其浓度有关，而且与激发光的波长和强度以及荧光分析检测器的灵敏度有关。

因此加大激发光的强度，可以增大荧光强度，从而提高分析的灵敏度。

荧光分析还有一个优点，就是高选择性。

在对金属离子的测定中，荧光分析得到了广泛的应用，主要源于这种分析方法对金属离子有很高的选择性。

与此同时，荧光分析法还具有动态线性范围宽，方法简便，重现性好，取样量少，仪器设备不复杂等优点。

然而，不能对本身不发荧光的物质进行直接检测，这在某种程度上妨碍了荧光分析应用范围的扩展。

因此，还要更深入的研究化合物结构的关系与荧光的产生，才能合成更多的灵敏度高选择性好的新荧光试剂，使荧光分析的能够更好的能到应用[41]。

1.3.4荧光定量分析的各种条件
在荧光定量分析中，为了确定荧光分析的最佳工作条件，应考察以下的因素的影响及其消除方法同时还必须准确测定待测组分的激发和发射光谱[42]。

试剂是荧光分析的必备物品。

荧光分析所用的试剂要求纯度非常高，因为试剂中极少量的杂质有时也会与探针反应，而生成其他物质;长期放置的试剂可能会分解;溶解在试剂中的氧对荧光有碎灭作用，所有的这些，都可能会对探针荧光光谱跟荧光强度产生影响。

因此，实验中一定要确保试剂的纯度，各种试剂都需要事先提纯，实验用水应为去离子水或二次蒸馏水。

荧光物质的荧光光谱和荧光强度在不同的溶剂中会有很大的区别。

这种影响分为一般溶剂效应和特殊溶剂效应。

因此，在实验中，一定要选择合适的溶剂，并且该溶剂要有足够的纯度。