鸡新城疫的诊断(整理).ppt
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50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀释至第10孔，并将第10 孔的液 体混匀后取50μl弃去。第11孔为病毒对照，第12孔为盐水对照。 ③用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，向1～11孔中分 别加50μl。然后，振荡1min，将反应板置室温下作用20min， 或在 37℃恒温培养箱中作用5～10min。 ④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％红细胞悬液50μl，再 将反应板置于微型振荡器上振荡15～30s，混和均匀。 ⑤将反应板置37℃ 温箱中作用15～30min 后取出，观察并记录结果。
接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。
每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚， 废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。
然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。
最新.
3
方法步骤
（一）ND的临床诊断 （二）ND的实验室诊断
最新.
4
（一）ND的临床诊断
1．按家禽尸体剖检程序，首先检查鸡的体表组织，然后 检查皮下组织，最后打开体腔，暴露整个胸腔和腹腔 器官，检查内部组织器官。鸡新城疫主要检查消化道 病变。
2．将剖检所见填写于病理剖检记录表内。 3．根据剖检记录，归纳分析进行初步诊断。
最新.
10
⑤结果判定及记录
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层， 呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层， 而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
最新.
8
2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
最新.
9
（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。 ①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器 挤压3～5次使病毒混和均匀，然后取50μl移入第二孔，混匀后取50μl 移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出 50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，作对照。 ③换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。 ④加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（18～ 20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出， 观察并判定结果。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。
如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。
最新.
15
血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
待检血清
50 50 50 …… 50 50 弃
4单位病毒
1%的红细胞 50 50 50 …… 50 50 50 50
振荡1min，置于室温30~40min，或置37℃温箱15~30 min
结果观察 （血凝价）
凝 不滑
不凝 滑
不凝 滑
最新.
12
HA视频
最新.
13
（2）微量血凝抑制试验（HI）
用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 ①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。 ②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出
置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作 为接种材料。
在这同时，应对接种材料作无菌检查如有细菌生长， 应将原始材料再作除菌处理，也可改用细菌滤器过滤 除菌。
最新.
7
（2）鸡胚接种
用9～11日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡 胚），将上述处理过的材料，取0.1～0.2ml接种于尿囊腔内。
最新.
5
（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定最新.源自61．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理
分离病毒的材料应来自早期病例
病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等 器官组织混合
将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素 10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌
最新.
14
⑥结果判断和记录
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病 毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于 反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用 的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红 细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红 细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现 明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。
最新.
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血凝试验（HA）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
病毒液
50 50 50 …… 50 50 50 弃
技能训练8 鸡新城疫的诊断
最新.
1
实训目标
掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室 诊断的方法
最新.
2
仪器材料
疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、 工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。
9～11日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、 注射器（1～5ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪 刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、 吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、 蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒 精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96 孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、混合振荡器； 1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准 阳性血清等。
接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。
每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚， 废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上 （气室向上）。
然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。 留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。
最新.
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方法步骤
（一）ND的临床诊断 （二）ND的实验室诊断
最新.
4
（一）ND的临床诊断
1．按家禽尸体剖检程序，首先检查鸡的体表组织，然后 检查皮下组织，最后打开体腔，暴露整个胸腔和腹腔 器官，检查内部组织器官。鸡新城疫主要检查消化道 病变。
2．将剖检所见填写于病理剖检记录表内。 3．根据剖检记录，归纳分析进行初步诊断。
最新.
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⑤结果判定及记录
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层， 呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层， 而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒 致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出 血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
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2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）
最新.
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（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗 原的HA滴度。 ①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。 ②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器 挤压3～5次使病毒混和均匀，然后取50μl移入第二孔，混匀后取50μl 移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出 50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，作对照。 ③换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。 ④加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（18～ 20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出， 观察并判定结果。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。
如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。
最新.
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血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
待检血清
50 50 50 …… 50 50 弃
4单位病毒
1%的红细胞 50 50 50 …… 50 50 50 50
振荡1min，置于室温30~40min，或置37℃温箱15~30 min
结果观察 （血凝价）
凝 不滑
不凝 滑
不凝 滑
最新.
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HA视频
最新.
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（2）微量血凝抑制试验（HI）
用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 ①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。 ②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出
置冰箱中作用2～4h，然后离心沉淀，取其上清液作 为接种材料。
在这同时，应对接种材料作无菌检查如有细菌生长， 应将原始材料再作除菌处理，也可改用细菌滤器过滤 除菌。
最新.
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（2）鸡胚接种
用9～11日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡 胚），将上述处理过的材料，取0.1～0.2ml接种于尿囊腔内。
最新.
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（二）ND的实验室诊断
1．病毒的分离培养 2．病毒的鉴定最新.源自61．病毒的分离培养
（1）病料采集与处理
分离病毒的材料应来自早期病例
病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等 器官组织混合
将病料制成1∶5～1∶10的乳剂，每毫升加入青霉素 10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌
最新.
14
⑥结果判断和记录
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病 毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于 反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用 的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红 细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红 细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现 明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。
最新.
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血凝试验（HA）
孔号
试剂
1
2
3 …… 9
10 11 12
生理盐水
50 50 50 …… 50 50 50 50
病毒液
50 50 50 …… 50 50 50 弃
技能训练8 鸡新城疫的诊断
最新.
1
实训目标
掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室 诊断的方法
最新.
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仪器材料
疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、 工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。
9～11日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、 注射器（1～5ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪 刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、 吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、 蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒 精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96 孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、混合振荡器； 1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准 阳性血清等。