[医学]第七章抗原抗体反应

检（待）测系统 补体系统
指示系统
溶血
补体结合阴性反应 （－），无待测物
不溶血
补体结合阳性反应 （＋），含待测物
二、 常见免疫分析方法
1、免疫分析的定义： 利用抗原抗体的特异性反应的特性对抗原或抗体进行量和 质的测定分析。
2、特点： • 特异性强 • 灵敏度高 • 反应速度快
一）免疫沉淀
1、环状沉淀反应 应用：抗原抗体的定性及定量分析。 方法：试管法，玻片法
鉴别抗原与抗体反应间的特异性如何：根据相邻孔中 不同抗原与同一抗血清反应形成的沉淀线形状的变化 判断抗原间是否存在共同的AD。 ② 定量分析： 测定抗血清效价及抗原的最佳浓度。
两孔抗原
完全融合
互不干扰 的交叉线
同一血清与不同抗原反应
向共同Ag 方向突出
定性分析
双向免疫扩散定量分析：测定抗血清效价及抗原的最佳浓度
应用： 定性与定量分析，常用于测定血清中IgG、IgM、 IgA及补体的含量。
2）双向扩散法（Ouchterlony法）： 在琼脂糖凝胶平板内打两排孔，孔中分别加入抗原、抗 体，抗原、抗体分别呈辐射状向含胶内扩散，当抗原与 抗体在胶内相遇，且二者的量达一定比例时则形成可见 的沉淀线。
应用： ① 定性分析：
3）补体结合反应 ： 在补体参与下，并以绵羊红细胞和溶血素（抗绵羊红细胞 的抗体）为指示系统的抗原抗体反应。
3、补体结合反应系统： ① 检（待）测系统： 待测的抗原+ 抗血清（抗体、补体） ② 指示系统： 绵羊红细胞（抗原）+ 溶血素（抗体） ③ 补体系统 豚鼠的新鲜血清
4、反应过程
红细胞+溶血素 抗原 + 抗血清 + 豚鼠新鲜血清
常用已知抗体来 检测未知抗原。 定量实验时，由 于抗原分子小， 反应面积大，且 为保证Ag与Ab 的适宜比例，有 足够的抗体参与 反应，操作上通 常是稀释抗原 （上层），而不 稀释抗体（下层） 与图示相反
2、凝胶扩散沉淀 1）单向扩散法（Mancini法）：
将抗血清均匀地混合于琼脂糖凝胶（浓度为：0.8~1% ） 内，倒平板，平板打孔，孔中加入待测的抗原样品，抗 原呈辐射状向含抗体的胶内扩散，至抗原与抗体的量达 一定比例时形成可见的沉淀环。 一定条件下沉淀环的直径或面积与相应的抗原含量成正比。
＋＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ － －
＋＋
＋＋
＋
＋ ＋－－
＋
＋
＋
－ －－－
＋
＋
＋
－ －－－
表中＋～＋＋＋代表出现沉淀线的强度， 如：
1:8 、1:16抗体出现中等浓度沉淀线， 1:32出现较弱的沉淀线。
抗血清的效价为 1:16
最佳抗原浓度为： 1:16
3、免疫电泳：
利用蛋白质在凝胶中电泳移动速率不同而被分离的特性
3、类型： ① 环状沉淀反应：
将已知抗原（抗体）注入特制小试管中，再沿管壁徐徐加入 适量抗体（抗原），在两液界面出现白色的沉淀圆环的现象。
② 絮状沉淀反应： 将已知抗原与抗体在试管内混匀后，出现肉眼可见的絮 状沉淀的现象。
③ 凝胶扩散试验： 利用可溶性抗原、抗体在半固体琼脂内扩散，在其扩散 的某一部分出现白色沉淀线的现象。
第七章抗原抗体反 应
一）凝集反应 ： 1、定义：
颗粒性抗原与相应抗体相遇后，在电解质参与下出现肉眼 可见凝集物的现象。 2、参与要素： ① 凝聚原：参与凝聚反应的抗原，如：血细胞、菌体等。 ② 凝聚素：参与凝聚反应的抗体。
3、类型 ①直接凝集反应（定性实验，检测抗原或抗体）：
颗粒性抗原与相应抗体在有电解质时，直接、玻片法：细菌及ABO血型鉴定（标准血清检测抗原） B、试管法：肥达氏反应（伤寒或副伤寒杆菌标准液检测血清 ）
② 间接凝集反应（检测可溶性抗原或抗体）： 将可溶性抗原吸附于与免疫无关的小颗粒（载体）表面 后，与相应的抗体在电解质存在的下而发生的凝集反应。
常用载体颗粒： 红细胞 [人（ O 型）和动物（绵羊、兔鸡等）]、胶体颗粒、 聚苯乙烯乳酸、活性碳等
+

含有待测抗原，不凝集，阳性反应
+
+

Patient’s sample
二）沉淀反应： 1、定义：
可溶性抗原与相应抗体在一定条件下，出现细微沉淀物的 现象。
2、参与因素： ① 沉淀原：参与沉淀反应的抗原。
包括：蛋白质、多糖和类脂溶液、血清、细菌抽提液、 组织浸出液等。
② 沉淀素：参与沉淀反应的抗体。
四）补体参与的反应
1、反应特点： 抗原抗体复合物激活补体，被活化的补体成分可与抗原 抗体复合物结合；补体被复合物结合后即被消耗。
2、反应类型
1）溶菌反应： 某些革兰氏阳性菌，与相应抗体结合后，形成抗原抗体 复合物，在加入补体，则出现的细菌溶解现象。
2）溶血反应： 红细胞与相应抗体特异性结合后，在有足量补体存在条件 下，出现红细胞溶解的现象。
凝胶扩散实验分为： 单向琼脂扩散（定性、定量分析） 双向琼脂扩散（定性分析）
三）中和反应： 抗体使相应抗原（毒素或病毒）的毒性或传染性丧失的反应 。
抗毒素：使相应毒素失去毒性的抗体。
中和抗体：使相应病毒丧失传染性的抗体。
中和反应应用： 毒素或病毒种型的鉴定与抗原性分析； 抗毒素或中和抗体的效价测定。
间接血细胞凝集试验：以红细胞作为载体的凝集反应。
③ 凝集抑制实验
将可溶性抗原与相应抗体预先作用，然后再加入致敏颗粒 （吸附相同可溶性抗原的乳胶颗粒）, 由于抗体已被可溶性 抗原结合, 因而致敏颗粒不发生凝集现象。如免疫妊娠实验 测验尿中HCG（乳胶凝集抑制试验，无凝集者为阳性）。
不含待测抗原，产生凝集，但为阴性反应
抗原 稀释度 不稀释
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64
不稀释 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
＋＋ ＋ ＋
抗血清稀释度
1/2
1/4
＋＋＋＋ ＋＋＋
1/8 ＋＋
1/16 1/32 1/64 1/128 ＋＋ ＋ － －
＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ － －
＋＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋ － －
与免疫琼脂扩散结合起来的分析方法。
1）原理：
PH8.6时，混合蛋白抗原多数带负电，向正极移动（少数
带正电的则向负极移动），不同抗原分子因大小及所带
电荷不同，其电泳速度不一样而被分离。 2）特点：
加快反应速度；提高免疫沉淀的灵敏度。
3）免疫电泳的方法
① 血清免疫电泳