顶空气相色谱法测定小鼠血液中乙醇的浓度

顶空气相色谱法测定小鼠血液中乙醇的浓度
雷红伟,高铁祥,田先翔,杨　敏,陈　靓
(湖北中医学院药学院,湖北武汉430065)
摘要:目的　建立测定小鼠血液乙醇的浓度的灵敏方法。

方法　取仲丁醇标液1m l和血样0125m l放入顶空瓶中,用内衬聚四氟乙烯膜的硅垫密封,置电热恒温器中60℃加热平衡30m in,气相色谱仪测定小鼠血液的乙醇浓度。

结果　校正因子Fi/Fs的平均值为31686,平均偏差为2115%。

结论　本方法是测定血液乙醇浓度简便、灵敏、有效的方法。

关键词:顶空气相色谱法;血药浓度;乙醇;仲丁醇
中图分类号:R96911 文献标识码:A 文章编号:1008-987X(2007)02-0037-02
D e tec ti o n o f the A l co ho l Co ncen tra ti o n i n R a ts’B l o o d by
Head sp ace Ga s C h r om a t o g rap h
Hong wei Lei,Tiexiang Gao,Xianxiang Tian,et,al
(11Depart m ent of Phar macol ogy,Phar maceutic of Hubei Chinese medicfal college W uhan430065) Ab s trac t:O b j ec ti ve:To detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.M ethods:Sec-butyl alcohol is used as the inter2 nal standard and,heated at the te mperature of60℃and balanced f or30m inutes.Heads pace gas chr omat ograph is adop ted t o detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.Results:The average value of correcti on fact or Fi/Fs is3.686,and the average deviati on is2.15%.Conclusi ons:Heads pace gas chr omat ograph is the si m p le,flexible and effective method t o detect the alco2 hol concentrati on in Rats bl ood.
Ke y wo rd s:Heads pace gas chr omat ograph;B l ood concentrati on;A lcohol;Sec-butyl alcohol
血液乙醇含量测定,一般采用三氯醋酸稀释[1],离心后取上清液经微孔滤膜过滤,再以气相色谱法测定。

该法处理繁琐,有时不能满足实际工作需要。

笔者采用顶空气相色谱法(GC)[2]测定小鼠血液的乙醇浓度,操作简便,准确可靠。

1　材料与方法
111　材料
11111　药品与试剂
无水乙醇(天津市北方化学玻璃购销中心),批号: 20031118,密度0179;仲丁醇(天津化学试剂有限公司),批号:20001129;密度0181;肝素钠注射液(常州千红制药有限公司),批号:20040131。

11112　仪器:上海天美GC-7890型检测器、电恒温加热器、10m l顶空玻璃瓶若干、250μl气密型注射器、250μl微量移液器,50μl微量移液器。

11113　色谱条件　DET:250℃;I N J:200℃;OVE N:110℃;色谱柱:OV-103130m×0132mm×110μm。

112　实验方法
11211　试剂的配制　①乙醇/仲丁醇标液:分别吸取1010μl仲丁醇和10μl乙醇于10m l双蒸水中,浓度分别为0181mg/m l和0179mg/m l。

②仲丁醇标液:吸取1010μl仲丁醇于10m l双蒸水中,浓度为018mg/m l。

11212　内标法测定的原理[2]:C i=F i A i(1)C s=F s A s(2)
上式中C
i
和C
s
分别是组分I和内标物S的浓度,F
i
和F
s 分别是组分I和内标物的比例系数,A i和A s是组分Ⅰ和内标物S的气相色谱峰面积。

将式(1)、(2)两式相比得:C
i
/C s=(F i/F s)×(A i/ A s)(3):F i/F s=(C i/C s)×(A i/A s)(4)式(4)中的Fi/Fs称为相对校正因,只要配制已知浓度的组分I和内标物S,平衡后测定两峰面积值,就可以根据式(4)计算出相对校
正因子。

将式(3)重排得:C
i
=(F i/F s)×(A i/A s)×C s (5)
11213　相对校对因子的测定　取乙醇/仲丁醇标液1m l和双蒸水0125m l于顶空瓶中,用内衬聚四氟乙烯膜的硅胶垫密封,置电热恒温器中60℃加热30m in,然后用150μl气密型注射器吸100μl进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面积,
计算A
i
/A s,根据式(4)得出相对校正因子F i/F s,重复3次。

11214　A i/A s与C i线性关系比较　分别以5、15、20、25μl乙醇与10μl仲丁醇配制4种乙醇/仲丁醇标液。

分别用含5、10、15、20、25μl乙醇的乙醇/仲丁醇标液1m l于5个顶空瓶中,每瓶再各加0125m l双蒸水,用内衬聚四氟乙烯膜的硅胶垫密封,置电热恒温器中60℃加热30m in,然后用250μl气密型注射器吸100μl进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面
・
7
3
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2007年6月第9卷第2期June12007,Vol19,No12 湖北中医学院学报
Journal of Hubei College of T C M
作者简介:雷红伟(19682),男,湖北中医学院药学院讲师。

积,计算A i /A s 。

以C i 为横坐标,A i /A s 为纵坐标,绘制曲线,观察线性关系。

11215　血中乙醇的浓厚测定:取小白鼠60只,实验前12h 禁
食不禁水,灌服56度白酒二倍稀释液012m l/10g,于酒后30、
60、90、120和180m in 时每组各取10只小鼠经眼眶采血015m l,放入肝素抗凝EP 管中备测。

60℃加热30m in
[3]。

然后用250
μl 气密型注射器吸100μl 进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面积,计算A i /
A s ,根据式(8)计算血样中的乙醇浓度。

2　结果
21
1　相对校正因子的测定结果
测定结果见表1。

表1　相对校对因子(F i /F s )的测定结果
122平均值
相对标准偏差
31638
3642
31777
31686
2115%
F i /F s 平均值为31686,相对标准偏差为2115%,F i /F s 值可看作常数31686。

212　A i /A s 和C i 线性关系比较
测定结果表明C i 和A i /A s 成正比,数据见表2;以C i 为横坐标,A i /A s 为纵坐标绘制的曲线表明两者成线性关系,见图
1。

回去归方程为:Y =010176+310719X (6)R 2
=019982,P
>010001(7)。

综上所述,相对校正因子C V 很小,可作常数31686,C i
和A i /A s 成正比,因此可用式(5)计算血样中的乙醇浓度。

即:C i =31686×(A i /A s )
×0181(8)。

A i /A s 的测定结果见
表2。

其线性关系比较见图1。

图1　A i /A s 随乙醇浓度变化的线性关系比较
表2　A i /A s 的测定结果
乙醇含量(μl )
乙醇浓度(mg/m l )
A i A s A i /A s 5014053243700112210017915996039012651511192050556901368201158285956290150825
1198
3752
5845
01642
213　小鼠血中不同时间乙醇浓度的测定结果
测定结果见表3,药时曲线见图2。

表3　小鼠乙醇浓度测定结果
时间(m in )
乙醇浓度(mg/L )
30654±11360985±325901381±3291201411±300150920±135180
792±201
图2　乙醇的药时曲线图
3　讨论
顶空分析是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组份在原样品中的含量的分析方法。

顶空分析只取气相部分进行分析,大大减少了样品基质对分析的干扰,它是GC 分析最为简便的方法[3]。

本次试验采取静态顶空测定血样中乙醇的含量。

为保证不同样品乙醇浓度与乙醇色谱峰面积值成线性关系。

本次试验在样品中加入仲丁醇作为内标液,观察乙醇色谱峰面积和仲丁醇色谱峰面积的比值与乙醇浓度间的线性关系。

试验表明多次测定乙醇/仲丁醇标液所得F i /F s 可作为常数,以F i /F s 的平均值31686作为相对校正因子。

在A i /A s 和C i 线性关系比较试验中可见A i /A s 和C i 成线性关系。

如图1。

由此可见顶空气相色谱内标法测定乙醇浓度准确、可靠,本法测定的结果与多项资料结果一致,证明静态顶空气相色谱内标法是测定血液中乙醇浓度简便、灵敏、有效的方法。

参考文献:
[1]　徐淑云,陈修,卞如濂1药理学实验方法[M ]1北京:人民卫
生出版社,198211731
[2]　王永华1顶空气相色谱测定血液中乙醇含量[J ]1Modern Scien 2
tific I nstruments,2000,(3):262271
[3]　刘虎威1气相色谱方法及应用[M ]1北京:化学工业出版社,
2000113321471
(收稿日期:2007-01-31　编辑:郑晓屏)
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83・湖北中医学院学报 2007年第9卷第2期。