9765试剂盒核酸提取
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(一)使用TaKaRa公司,货号9765试剂盒提取玉米核酸
1.使用电子天平称取0.1g左右玉米粉,置于2mL 离心管中。
2.向离心管中加入300μL的Buffer GL、20 μL的Proteinase K和10μL的RNase A,充分混匀后,置于56℃金属浴裂解过夜(可时常将样品取出进行振荡或吸打以加速裂解)。
3.裂解之后,12000 rpm 离心2分钟,吸取上清液置于新的离心管中。
4.向上清液中加入200μL Buffer GB 和200μL 100%乙醇,充分混匀。
5.将Spin Column 安置于Collection Tube 上,溶液移至Spin Column 中,12,000 rpm 离心2 分钟,弃滤液。
6.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
7.向Spin Column 中加入500μL的Buffer WA,12,000 rpm 离心1 分钟,弃滤液。使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
8.沿Spin Column 管壁加入700μL的Buffer WB,于便完全冲洗沾附于管壁上的盐份,12000 rpm 离心2分钟,弃滤液。
注意:请确认Buffer WB 中已经加入了指定体积的100%乙醇=
9.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
10. 重复步骤8.
11. 将Spin Column 安置于新的剪去管盖的1.5 ml 的离心管上,在Spin Column 膜的中央处加入50~200μL Elution Buffer,室温静置5 分钟。
注意:事先将Elution Buffer加热至65℃,于提高洗脱效率。
12. 室温静置后,12, 000 rpm 离心2 分钟洗脱DNA。
13. 将离下的液体重新加入Spin Column 膜的中央处,室温静置5 分钟后,12,000 rpm 离心2分钟洗脱DNA。
14.将洗脱后的DNA转移至新的1.5mL离心管中保存。
(二)使用TaKaRa公司,货号9765试剂盒提取肉骨粉核酸
1.使用电子天平称取0.1g左右肉骨粉,置于2mL 离心管中。
2.向离心管中加入300μL的Buffer GL、20 μL的Proteinase K和10μL的RNase A,充分混匀后,置于56℃金属浴裂解2~3小时(可时常将样品取出进行振荡或吸打以加速裂解)。
3.裂解之后,12000 rpm 离心2分钟,吸取上清液置于新的离心管中。
4.向上清液中加入200μL Buffer GB 和200μL 100%乙醇,充分混匀。
5.将Spin Column 安置于Collection Tube 上,溶液移至Spin Column 中,12,000 rpm 离心2 分钟,弃滤液。
6.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
7.向Spin Column 中加入500μL的Buffer WA,12,000 rpm 离心1 分钟,弃滤液。使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
8.沿Spin Column 管壁加入700μL的Buffer WB,于便完全冲洗沾附于管壁上的盐份,12000 rpm 离心2分钟,弃滤液。
注意:请确认Buffer WB 中已经加入了指定体积的100%乙醇=
9.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection
Tube 上。
10. 重复步骤8.
11. 将Spin Column 安置于新的剪去管盖的1.5 ml 的离心管上,在Spin Column 膜的中央处加入50~200μL Elution Buffer,室温静置5 分钟。
注意:事先将Elution Buffer加热至65℃,于提高洗脱效率。
12. 室温静置后,12, 000 rpm 离心2 分钟洗脱DNA。
13. 将离下的液体重新加入Spin Column 膜的中央处,室温静置5 分钟后,12,000 rpm 离心2分钟洗脱DNA。
14.将洗脱后的DNA转移至新的1.5mL离心管中保存。
(三)使用TaKaRa公司,货号9765试剂盒提取动物组织核酸
1.取绿豆大小动物组织,置于2mL 离心管中。
2.向离心管中加入300μL的Buffer GL、20 μL的Proteinase K和10μL的RNase A,充分混匀后,置于56℃金属浴裂解30分钟(可时常将样品取出进行振荡或吸打以加速裂解)。
3.裂解之后,12000 rpm 离心2分钟,吸取上清液置于新的离心管中。
4.向上清液中加入200μL Buffer GB 和200μL 100%乙醇,充分混匀。
5.将Spin Column 安置于Collection Tube 上,溶液移至Spin Column 中,12,000 rpm 离心2 分钟,弃滤液。
6.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
7.向Spin Column 中加入500μL的Buffer WA,12,000 rpm 离心1 分钟,弃滤液。使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
8.沿Spin Column 管壁加入700μL的Buffer WB,于便完全冲洗沾附于管壁上的盐份,12000 rpm 离心2分钟,弃滤液。
注意:请确认Buffer WB 中已经加入了指定体积的100%乙醇=
9.使用吸水纸吸取Collection Tube中残余液体,将Spin Column重新安置于Collection Tube 上。
10. 重复步骤8.
11. 将Spin Column 安置于新的剪去管盖的1.5 ml 的离心管上,在Spin Column 膜的中央处加入50~200μL Elution Buffer,室温静置5 分钟。
注意:事先将Elution Buffer加热至65℃,于提高洗脱效率。
12. 室温静置后,12, 000 rpm 离心2 分钟洗脱DNA。
13. 将离下的液体重新加入Spin Column 膜的中央处,室温静置5 分钟后,12,000 rpm 离心2分钟洗脱DNA。
14.将洗脱后的DNA转移至新的1.5mL离心管中保存。