内源性活性物质研究报告
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第二向是将在 IPG 胶条中经过第一向分离的蛋白质转移到 SDS-PAGE凝 胶上，根据蛋白质的相对质量或分子量 (MW) 大小与第一向相垂直的分离。沿 垂直的方向进行 SDS-PAGE电泳（聚丙烯酰氨凝胶电泳），按分子量大小进行 分离。样品经过电荷和质量两次分离后，得到等电点和分子量的信息。
2D胶电泳数据库
双向凝胶电泳（2D胶电泳）的基本原理
先将蛋白质根据其等电点在 pH 梯度胶内进行等电聚焦，然后按照它们的 相对分子质量大小进行 SDS-PAGE 第二次电泳分离。
第一向进行等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)，由于蛋白质具有两性解离 和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所 带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并 随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电 点 pH 位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等 电点 pH 区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋 白质扩散到高于其等电点的 pH 区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极 移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH 梯度介质 区域内。目前常使用预制胶条 (IPG, immobilized pH gradient) 用于蛋白质的等 电聚焦分离，将聚焦好的 IPG 胶条在含有 SDS 的缓冲液中平衡。
体内药物分析
内源性活性物质的分析
王伟
内源性哺乳动物体内天然存 在的具有生理功能和生物学活性的物质，它们可以是 小分子化学物质，也可能是糖类、生物活性肽类、核 苷和核酸、生长因子、内源性调节因子、细胞因子和 蛋白质等。
2、研究意义
许多重大的突破都是由于发现了体内那些具有重
免疫组织化学染色法
免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤 光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗 原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组 织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以 用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的 位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是 具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、 病原体等都可侦测。
将发光系统与免疫反应相结合，用于检 测抗原或抗体的技术。
以发光物质标记抗原或抗体，免疫反应 后引发发光反应，根据发光强度对抗体或抗 原进行的测定。
层析 chromatography
基于不同物质在流动相和固定相之间 的分配系数不同而将混合组分分离的技术。 当流动相(液体或气体)流经固定相(多孔的 固体或覆盖在固体支持物上的液体)时，各 组分沿固定相移动的速度不同而分离。能 用于微量样品的分析和大量样品的纯化制 备。 层析是应用蛋白质的等电点不同而分 析分离蛋白质的。
免疫组织化学染色法
免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏
度、简便快速以及成本低廉，所以广为医院 采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌 症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防 和诊疗上都是相当重要的一个方法。
发光免疫测定
luminescence immunoassay;LIA;luminescent immunoassay
要生理活性的物质，并发现调节这些物质的其它相关 物质。基因克隆使“ 受体一指导” 和 “ 酶一指导” 的新 药的发现在方法学上得到完善。D NA 重组和转基因技 术的发展已使蛋白质和肽类药物的生产及其它内源性 分子作为新药成为可能。
蛋白质类内源性活性物质的 分析
Western Blot
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它 是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用 的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗 体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进 行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得 特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情 况的信息。
荧光探针
荧光探针除应用于核酸和蛋白质的 定量分析外，在核酸染色、DNA电泳、 核酸分子杂交、定量PCR技术以及DNA 测序上都有着广泛的应用。
可以分为荧光素类探针、无机离子 荧光探针、荧光量子点、分子信标几类
与G蛋白偶联受体相关的内源性活性物 质对心肌细胞功能和形态的影响
免疫组织化学法
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色 剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体 反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、 定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特 异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显 微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作 用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白 质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫化 学技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫 荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感， 且更为实用的免疫酶技术。
测定时，受检标本与固相载体表面的抗原 或抗体起反应，洗涤加入酶标记抗原或抗 体，加入酶反应的底物后，底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与标本中受检物 质的量直接相关，由此进行定性或定量分 析。
免疫测定在临床检验中的应用的可行性
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均 可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利 用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原， 尤其采用基因工程方法制备包被抗原来检测样 本中的相应抗体，都大大提高了ELISA的特异性， 加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使 ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最 广泛应用的检测方法之一。
细胞因子的测定
ELISA系列的试剂盒
细胞因子绝大部分是蛋白质， 并且一般都用ELISA试剂盒测定。
ELISA法
酶联免疫吸附剂测定是主要的 测蛋白的方法
ELISA 的原理
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗 体的特异性反应与酶对底物的高效催化作 用相结合的一种 敏感性很高的实验技术。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的 酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗 体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或 抗体既保留其免疫学活性，又保留其酶的 活性。
2D胶电泳数据库
双向凝胶电泳（2D胶电泳）的基本原理
先将蛋白质根据其等电点在 pH 梯度胶内进行等电聚焦，然后按照它们的 相对分子质量大小进行 SDS-PAGE 第二次电泳分离。
第一向进行等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)，由于蛋白质具有两性解离 和等电点特性，将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，会向与其所 带电荷相反的电极方向移动。移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并 随着移动的进行，该蛋白所带的电荷数和迁移速度下降。当蛋白迁移至其等电 点 pH 位置时，其净电荷数为零，在电场中不再移动。当蛋白扩散到低于其等 电点 pH 区域时，带正电荷，在电场的影响下重新向阴极移动。同样，如果蛋 白质扩散到高于其等电点的 pH 区域时，则带负电，在电场的作用下会向阳极 移动。根据各自不同的等电点，蛋白质最终被聚焦在一个很窄的pH 梯度介质 区域内。目前常使用预制胶条 (IPG, immobilized pH gradient) 用于蛋白质的等 电聚焦分离，将聚焦好的 IPG 胶条在含有 SDS 的缓冲液中平衡。
体内药物分析
内源性活性物质的分析
王伟
内源性哺乳动物体内天然存 在的具有生理功能和生物学活性的物质，它们可以是 小分子化学物质，也可能是糖类、生物活性肽类、核 苷和核酸、生长因子、内源性调节因子、细胞因子和 蛋白质等。
2、研究意义
许多重大的突破都是由于发现了体内那些具有重
免疫组织化学染色法
免疫组织化学染色法是指在抗体上结合萤 光或可呈色的化学物质，利用免疫学原理中抗 原和抗体间专一性的结合反应，检测细胞或组 织中是否有目标抗原的存在，此方式不只可以 用来测知抗原的表现量也可观察抗原所表现的 位置。只要是能够让抗体结合的物质，也就是 具有抗原性的物质包括蛋白质、核酸、多糖、 病原体等都可侦测。
将发光系统与免疫反应相结合，用于检 测抗原或抗体的技术。
以发光物质标记抗原或抗体，免疫反应 后引发发光反应，根据发光强度对抗体或抗 原进行的测定。
层析 chromatography
基于不同物质在流动相和固定相之间 的分配系数不同而将混合组分分离的技术。 当流动相(液体或气体)流经固定相(多孔的 固体或覆盖在固体支持物上的液体)时，各 组分沿固定相移动的速度不同而分离。能 用于微量样品的分析和大量样品的纯化制 备。 层析是应用蛋白质的等电点不同而分 析分离蛋白质的。
免疫组织化学染色法
免疫组织化学的优势在于专一性、灵敏
度、简便快速以及成本低廉，所以广为医院 采用，通常是借由特定的肿瘤标记来筛选癌 症。免疫组织化学染色法对基础研究及预防 和诊疗上都是相当重要的一个方法。
发光免疫测定
luminescence immunoassay;LIA;luminescent immunoassay
要生理活性的物质，并发现调节这些物质的其它相关 物质。基因克隆使“ 受体一指导” 和 “ 酶一指导” 的新 药的发现在方法学上得到完善。D NA 重组和转基因技 术的发展已使蛋白质和肽类药物的生产及其它内源性 分子作为新药成为可能。
蛋白质类内源性活性物质的 分析
Western Blot
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它 是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用 的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗 体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进 行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得 特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情 况的信息。
荧光探针
荧光探针除应用于核酸和蛋白质的 定量分析外，在核酸染色、DNA电泳、 核酸分子杂交、定量PCR技术以及DNA 测序上都有着广泛的应用。
可以分为荧光素类探针、无机离子 荧光探针、荧光量子点、分子信标几类
与G蛋白偶联受体相关的内源性活性物 质对心肌细胞功能和形态的影响
免疫组织化学法
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色 剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体 反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、 定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特 异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显 微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作 用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白 质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫化 学技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫 荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感， 且更为实用的免疫酶技术。
测定时，受检标本与固相载体表面的抗原 或抗体起反应，洗涤加入酶标记抗原或抗 体，加入酶反应的底物后，底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与标本中受检物 质的量直接相关，由此进行定性或定量分 析。
免疫测定在临床检验中的应用的可行性
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均 可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体，利 用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原， 尤其采用基因工程方法制备包被抗原来检测样 本中的相应抗体，都大大提高了ELISA的特异性， 加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使 ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最 广泛应用的检测方法之一。
细胞因子的测定
ELISA系列的试剂盒
细胞因子绝大部分是蛋白质， 并且一般都用ELISA试剂盒测定。
ELISA法
酶联免疫吸附剂测定是主要的 测蛋白的方法
ELISA 的原理
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗 体的特异性反应与酶对底物的高效催化作 用相结合的一种 敏感性很高的实验技术。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的 酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗 体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或 抗体既保留其免疫学活性，又保留其酶的 活性。