实验7-皮肤刺激实验-20121129
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、剪毛剪、记号笔、 医用胶带、称量纸、洗瓶、大烧杯、 棉签、静脉注射针头（5号或7号）、 一次性静脉注射器、麻醉剂（戊巴比 妥钠或其他）、兔子保定器等。
实验方法：
◆
实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适量Vc。
◆ 多次皮肤刺激试验步骤：
试验前将豚鼠背部两侧去毛，去毛范围 3cm×3cm；将受试物约0.5mL（g）涂在实验 动物去毛区皮肤上；当受试物使用无刺激性 溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天 涂抹1次，连续涂抹14d。从第二天开始，每 次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除 残留受试物。一小时后观察结果，按表1评分 ，对照区和试验区同样处理。
实验八 皮肤刺激实验
皮肤毒作用的类型： 接触性皮炎、光毒性、光敏作用、皮肤 肿瘤、荨麻疹、异常色素、痤疮等。 皮肤毒性检测方法： 皮肤黏膜刺激试验、皮肤致敏和光敏试 验、皮肤接触性荨麻疹试验、皮肤致癌 试验等。
皮肤刺激性： 皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎 性变化。刺激是不涉及免疫学机制的一次、 多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎 症反应。 皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎）： 皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反 应。在人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘 疹、水疱、融合水疱为特征。动物的反应不 同，可能只见到皮肤红斑和水肿。
化妆品卫生规范
中华人民共和国卫生部 2007.01
规定化妆品原料的检测一般需进行下列毒理学试验： （1）急性经口和急性经皮毒性试验； （2）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验； （3）皮肤变态反应试验； （4）皮肤光毒性和光敏感试验（原料具有紫外线吸收特性需做）； （5）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试 验）； （6）亚慢性经口和经皮毒性试验； （7）致畸试验； （8）慢性毒性/致癌性结合试验； （9）毒物代谢及动力学试验*； （10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。
表1：皮肤刺激反应评分
皮肤反应 红斑和焦痂形成 无红斑 轻微红斑（勉强可见） 明显红斑 中度~重度红斑 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 水肿形成 无水肿 轻微水肿（勉强可见） 轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 中度水肿（皮肤隆起约） 重度水肿（皮肤隆起超过，范围扩大） 最高积分 积分 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 8
◆
受试物
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液；
固体试物，应将其研磨成细粉状，并用水或其它 无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有 良好的接触；使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对 受试物皮肤刺激性的影响；需稀释后使用的产品 ，先进行产品原型的皮肤刺激性试验，如果试验 结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试 物再进行皮肤刺激性试验。
表2：皮肤刺激强度分级
积分均值 0 ～＜ 0.5 0.5 ～＜ 2.0 2.0 ～＜ 6.0 6.0 ～ 8.0 强度 无刺激性 轻刺激性 中刺激性 强刺激性
试验结果的解释
急性皮肤刺激试验结果从动物外推到 人的可靠性很有限。白色家兔在大多数情 况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏 感。若用其它品系动物进行试验时也得到 类似结果，则会增加从动物外推到人的可 靠性。试验中使用封闭式接触是一种超常 的实验室条件下的试验，在人类实际使用 化妆品过程中很少存在这种接触方式。
◆急性皮肤刺激性试验步骤： ① 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧 毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各 约3cm×3cm。
② 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上， 然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻 璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷 带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封 闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言, 可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩 短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅 采用2h敷用试验。试验结束后用温水或无刺 激性溶剂清除残留受试物。
实验目的：
1.确定和评价化学物对哺乳动物皮 肤局部是否有刺激作用及其程度。 2.了解化妆品原料及其产品安全性 毒理学检测方法。 3.确定重复接触化妆品及其原料对 哺乳动物是否可引起变态反应及其 程度。
实验原理：
1.将受试物一次（或多次）涂敷于受试动物 的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物 皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 2.采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺 激作用。 3.急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价 该作用的可逆性或不可逆性。
结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均 积分，以表2判定皮肤刺激强度。 每天每只动物平均积分＝ ∑红斑和水肿积分/受试动物数×14
试验报告
应包括如下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。 必要时说明受试物的 pH值； （2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来 源（注明合格证号和动物级别） ； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、 相对湿度、实验动物房合格证号； （4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应 积分； （5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用； （6）结论。
注意：如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
③ 于清除受试物后的1、24、48和72h 观察 涂抹部位皮肤反应,按表1进行皮肤反应评分, 以受试动物积分的平均值进行综合评价，根 据24、48和72h 各观察时点最高积分均值， 按表2判定皮肤刺激强度。 ④ 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可 逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。
实验方法：
◆
实验动物和饲养环境
多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适量Vc。
◆ 多次皮肤刺激试验步骤：
试验前将豚鼠背部两侧去毛，去毛范围 3cm×3cm；将受试物约0.5mL（g）涂在实验 动物去毛区皮肤上；当受试物使用无刺激性 溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天 涂抹1次，连续涂抹14d。从第二天开始，每 次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除 残留受试物。一小时后观察结果，按表1评分 ，对照区和试验区同样处理。
实验八 皮肤刺激实验
皮肤毒作用的类型： 接触性皮炎、光毒性、光敏作用、皮肤 肿瘤、荨麻疹、异常色素、痤疮等。 皮肤毒性检测方法： 皮肤黏膜刺激试验、皮肤致敏和光敏试 验、皮肤接触性荨麻疹试验、皮肤致癌 试验等。
皮肤刺激性： 皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎 性变化。刺激是不涉及免疫学机制的一次、 多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎 症反应。 皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎）： 皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反 应。在人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘 疹、水疱、融合水疱为特征。动物的反应不 同，可能只见到皮肤红斑和水肿。
化妆品卫生规范
中华人民共和国卫生部 2007.01
规定化妆品原料的检测一般需进行下列毒理学试验： （1）急性经口和急性经皮毒性试验； （2）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验； （3）皮肤变态反应试验； （4）皮肤光毒性和光敏感试验（原料具有紫外线吸收特性需做）； （5）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试 验）； （6）亚慢性经口和经皮毒性试验； （7）致畸试验； （8）慢性毒性/致癌性结合试验； （9）毒物代谢及动力学试验*； （10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。
表1：皮肤刺激反应评分
皮肤反应 红斑和焦痂形成 无红斑 轻微红斑（勉强可见） 明显红斑 中度~重度红斑 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 水肿形成 无水肿 轻微水肿（勉强可见） 轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 中度水肿（皮肤隆起约） 重度水肿（皮肤隆起超过，范围扩大） 最高积分 积分 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 8
◆
受试物
液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液；
固体试物，应将其研磨成细粉状，并用水或其它 无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有 良好的接触；使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对 受试物皮肤刺激性的影响；需稀释后使用的产品 ，先进行产品原型的皮肤刺激性试验，如果试验 结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试 物再进行皮肤刺激性试验。
表2：皮肤刺激强度分级
积分均值 0 ～＜ 0.5 0.5 ～＜ 2.0 2.0 ～＜ 6.0 6.0 ～ 8.0 强度 无刺激性 轻刺激性 中刺激性 强刺激性
试验结果的解释
急性皮肤刺激试验结果从动物外推到 人的可靠性很有限。白色家兔在大多数情 况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏 感。若用其它品系动物进行试验时也得到 类似结果，则会增加从动物外推到人的可 靠性。试验中使用封闭式接触是一种超常 的实验室条件下的试验，在人类实际使用 化妆品过程中很少存在这种接触方式。
◆急性皮肤刺激性试验步骤： ① 试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧 毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各 约3cm×3cm。
② 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上， 然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻 璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷 带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封 闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言, 可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩 短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅 采用2h敷用试验。试验结束后用温水或无刺 激性溶剂清除残留受试物。
实验目的：
1.确定和评价化学物对哺乳动物皮 肤局部是否有刺激作用及其程度。 2.了解化妆品原料及其产品安全性 毒理学检测方法。 3.确定重复接触化妆品及其原料对 哺乳动物是否可引起变态反应及其 程度。
实验原理：
1.将受试物一次（或多次）涂敷于受试动物 的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物 皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 2.采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺 激作用。 3.急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价 该作用的可逆性或不可逆性。
结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均 积分，以表2判定皮肤刺激强度。 每天每只动物平均积分＝ ∑红斑和水肿积分/受试动物数×14
试验报告
应包括如下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法和用量。 必要时说明受试物的 pH值； （2）实验动物的种属、品系、性别、体重和来 源（注明合格证号和动物级别） ； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、 相对湿度、实验动物房合格证号； （4）每个动物在每一观察时点的皮肤刺激反应 积分； （5）具体描述除刺激性以外的其它毒性作用； （6）结论。
注意：如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h 取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。
③ 于清除受试物后的1、24、48和72h 观察 涂抹部位皮肤反应,按表1进行皮肤反应评分, 以受试动物积分的平均值进行综合评价，根 据24、48和72h 各观察时点最高积分均值， 按表2判定皮肤刺激强度。 ④ 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可 逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。