抑制剂对土壤放线菌分离的影响

关键词： 土壤放线菌； 抑制剂； 出菌率； 出菌数
中图分类号： Ｓ４３２．４
文献标识码： Ｂ
文章编号： ０４３９－ ８１１４（ ２００８） ０４－ ０４３５－ ０３
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒ ｉｏｓｔａｔｉｃ ｏｎ ｔｈｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ
ＹＡＮＧ Ｈａｉ－ ｙｉｎｇ， ＤＵ Ｇａｎｇ， ＬＵ Ｋａｉ－ ｆｅｎｇ （ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏ－ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｙｕｎｎａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００３１， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｓｕｃｈ ａｓ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ， ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ， ｎａｌｉｄｉｘｉｃ ａｃｉｄ， ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｄｉｃｈｒｏｍａｔｅ ａｎｄ ｔａｔｉｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ． Ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ６．０ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓｅ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｄｉｃｈｒｏｍａｔｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ａｍｏｎｇ ｔｈｏｓｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃｅｓ． Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃｓ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｗａｓ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｄｉｃｈｒｏｍａｔｅ ５０ ｍｇ·Ｌ－１， ｎａｌｉｄｉｘｉｃ ａｃｉｄ １０ ｍｇ·Ｌ－１， ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ １０ ｍｇ·Ｌ－１． Ｍｏｒｅ ｏｖｅｒ ， ｎａｌｉｄｉｘｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ； ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ； ｐｌａｔｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ； ｃｏｌｏｎｙ ｎｕｍｂｅｒｓ
水平
１ ２ ３
重铬酸钾 ５０ １００ ２００
因 素／ｍｇ·Ｌ－ １ 萘啶酸 ３ １０ １５
制霉菌素 ５ １０ １５
分离有较好的影响， 出菌数高。其较好的活性浓度 为： 重铬酸钾 ２５、５０、１００ ｍｇ·Ｌ－１； 萘啶酸 １０ ｍｇ·Ｌ－１； 制霉菌素 ５０ ｍｇ·Ｌ－１。
２ 结果与分析
２．１ 单因子各种抑制剂对放线菌分离的影响 ２．１．１ 抑 制 剂 对 放 线 菌 出 菌 率 的 影 响 从 图 １ 可 以看出， 重铬酸钾对出菌率的影响是最好的， 其次 是制霉菌素， 萘啶酸的培养基里有少量真菌生长， 其出菌率比其他抑制剂高， 抑制效果仅次于重铬酸 钾和制霉菌素。青霉素的出菌率曲线不稳定， 且其 不仅抑制细菌的生长同时也抑制了放线菌的生长。 氟哌酸的出菌效果较差。单因子试验中抑制剂重铬 酸 钾 、制 霉 菌 素 和 萘 啶 酸 对 放 线 菌 的 分 离 有 较 好 的 影响， 出菌率较高。重铬酸钾活性较好的浓度为５０、 ２００、３００ ｍｇ·Ｌ－１； 萘啶酸为 １ ｍｇ·Ｌ－１、３ ｍｇ·Ｌ－１； 制霉菌 素为 ５０ ｍｇ·Ｌ－１。
１ 材料与方法
１．１ 材料 土样 ＮＬ－ ００７ 取自云南宁浪。高氏 １ 号培养基：
可 溶 性 淀 粉 ２％ ， ＫＮＯ３ ０．１％ ， Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０５％ ， Ｍｇ ＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．０５％ ， ＮａＣｌ ０．０５％ ， ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ
０．００１％， 琼脂 ２％， ｐＨ 值 ７．０￣７．２。青霉素、萘啶酸为 药品， 制霉菌素、重铬酸钾、氟哌酸为分析纯试剂。 １．２ 方法 １．２．１ 单因子试验 配制好的培养基在 １２１℃下灭 菌 ３０ ｍｉｎ， 冷至 ５０℃左右， 加抑制剂倒平板备用。在 分 离 培 养 基 中 分 别 加 入 青 霉 素 、萘 啶 酸 、制 霉 菌 素 、 重铬酸钾、氟哌酸 ５ 种 抑 制 剂 ， 设 定 ５ 个 初 选 浓 度 梯度（ 如表 １） 。平板稀释法分离土壤样品， 取 １０－５ 稀 释度， 分别涂 １０ 个平板， ２８℃培养 １ 周后， 观察统 计放线菌的分离情况。所得统计数据为 １０ 个平板 的算术平均数。 １．２．２ 正交试验 用 ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ６．０ 设计 ３ 因子 ３ 水平 ９ 种培养基如表 ２。
２．２ 正交试验 从表 ３ 所列数据可以看出， 在加有抑制剂的培
养基中， 放线菌的总体数量多， 细菌和真菌的菌落 很少， 可顺利进行放线菌的分离工作。表 ３ 显示， ３ 因子重铬酸钾、萘 啶 酸 、制 霉 菌 素 对 放 线 菌 的 出 菌 效果的影响明显， 均值都在 ７０％以 上 ， 且 ３ 因 子 中 重铬酸钾的最佳浓度为 ５０ ｍｇ·Ｌ－１， 制霉菌素的最佳 浓度为 １０ ｍｇ·Ｌ－１， 萘啶酸的最佳浓度为 １０ ｍｇ·Ｌ－１， 制霉菌素的极差值最大， 因此在 ３ 个因子中影响最 显著。
第 ４７ 卷第 ４ 期 ２０第０８ ４年期４ 月
湖北农业科学 Ｈｕｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
Ｖｏｌ． ４７ Ｎｏ．４ Ａｐｒ．， ２００８
抑制剂对土壤放线菌分离的影响
杨海英， 杜 刚， 鲁开凤 （ 云南民族大学化学与生物技术学院， 昆明 ６５００３１）
摘要： 研究了青霉素、萘啶酸、制霉菌素、重铬酸钾和氟哌酸 ５ 种抑制剂对分离土 壤 放 线 菌 的 影 响 ， 其 中
２．１．２ 抑 制 剂 对 放 线 菌 出 菌 数 的 影 响 从 图 ２ 可 以看出， 重铬酸钾对出菌数的影响是最好的， 其次 是制霉菌素， 萘啶酸培养基有少量真菌生长， 但其 出菌数比其他抑制剂高， 抑制效果仅次于重铬酸钾 和制霉菌素。青霉素的出菌数很低， 不但抑制细菌 的生长同时也抑制了放线菌的生长， 所以不适合用 来分离放线菌。氟哌酸的出菌效果较差。单因子试 验 中 抑 制 剂 重 铬 酸 钾 、制 霉 菌 素 和 萘 啶 酸 对 放 线 菌
以重铬酸钾的分离效果最好， 其次为制霉菌素； 通过正交试验研究了重铬酸钾、萘啶酸、制霉菌素 ３ 因子
组合对放线菌分离的影响； 最后用 ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ６．０ 进行分析。正交试验结果分析得到的最优抑制剂组合
为重铬酸钾 ０．６ ｍｇ·Ｌ－１， 制霉菌素 １０ ｍｇ·Ｌ－１， 萘啶酸 １０ ｍｇ·Ｌ－１， 其中制霉菌素在 ３ 个因子中起的作用最大。
ＷＡＮＧ Ｌｉ－ ｌｉ， ＳＩ Ｌｏｎｇ－ ｔｉｎｇ， ＺＯＵ Ｆａｎｇ－ ｂｉｎ （ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０１６１， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： ２ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ２ ｎｏｎ－ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｗｅｒｅ ｃｒｏｓｓｅｄ ｂｙ ｈａｌｆ ｍａｔｉｎｇ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ ｆｒｕｉｔ ｓｅｔ ｏｆ ｐａｒｅｎｔ ａｎｄ Ｆ１ ｗｅｒｅ ｃｈｅｃｋｅｄ ｂｅｆｏｒｅ ｆｌｏｗｅｒｅｄ ｂｙ ｃｌｕｔｃｈｉｎｇ ｆｌｏｗｅｒｓ． Ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍａｄｅ ｂｙ ＧｒｉｆｆｉｎｇⅡ． Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｄａｔｅ ｗａｓ ａｃｃｏｒｄｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｈａｙｍａｎ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓｅ． Ｍ３２ ｈａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｇｅｎｅｒａｌ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ａ－ ｂｉｌｉｔｙ． Ｍ３６×Ｍ３２ ｈａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ． Ｔｈｅ ｂｒｏａｄ－ ｓｅｎｓｅ ｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ９４．９３％．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｄｏｍｉｎａｎｃｅ ｉｓ ０．９８９ １．Ｔｈｅ ｈｅｒｅｄｉｔｙ ｏｆ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｙ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ－ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｍｏｄｅｌ， ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｍａｊｏｒ． Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｂｒｅｅｄ Ｆ１ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ ａｂｉｌｉｔｙ， ｔｈｅ ｐａｒｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｉｃ ａｂｉｌｉｔｙ ｗｅｒｅ ｎｅｅｄｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｃｕｃｕｍｂｅｒ； ｐａｒｔｈｅｎｏｃａｒｐｙ； ｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ
放 线 菌 是 抗 生 素 、酶 及 其 抑 制 剂 等 有 用 生 物 活 性物质的丰富产生菌。如利用放线菌的次生代谢产 物— ——抗生素制备的新农药， 已成为无公害农药的 主 体 和 未 来 农 药 的 发 展 方 向 ［ １］ 。 而 人 们 大 约 只 能 分 离到 １０％－ ２０％的土壤放线菌［２］。放线菌分离遇到的 最重要问题之一是既要抑制细菌、真菌的生长， 同 时又不影响放线菌的生长。因此就需要选择适宜的 抑制剂及合适的浓度。在这方面已有一些科研工作 者做过研究［３－６］。本文以单因子试验为基础， 通过正 交试验与分析， 较为系统地研究了 ５ 种抑制剂对土 壤放线菌分离的影响。
用平板稀释法分离土壤样品， 取 １０－５ 稀释度， 分别涂 １０ 个平板， ２８℃培养一周后， 观察统计放线 菌的分离情况。所得统计数据为 １０ 个平板的算术 平均数。
收稿日期： ２００７－ １２－ １２ 基金项目： 云南省教育厅科学基金资助项目（ ０７Ｙ４１４１９） ； 云南民族大学民族药资源化学重点实验室开放课题基金项目（ ＭＪＹ０７０１５） 作者简介： 杨海英（ １９７５－ ） ， 女， 云南保山人， 讲师， （ 电话） １３２１１７３００７３（ 电子信箱） ｄｕｇａｎｇ２００６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ； 通讯作者， 杜 刚， 副教授。
２００
３
１５
２９
１３
６９
８
２００ １０
３
４４
９
８３
９
２００ １５
１０
３６
１７
６８
均值 １ ７４．６６７ ７０．６６７ ７４．３３３
均值 ２ ７１．３３３ ７６．６６７ ７３．３３３
均值 ３ ７３．３３３ ７２．０００ ７１．６６７
极差 ３．３３４ ６．０００ ２．６６６
３ 讨论
在放线菌的分离培养基中加入抑制剂， 可以使 细菌及真菌的菌落减少或没有， 而对放线菌的生长 影响不大。单因子试验表明， 在所选的抑制剂中， 重 铬 酸 钾 、制 霉 菌 素 和 萘 啶 酸 的 效 果 较 好 。 尤 其 是 重
第 ４７ 卷第 ４ 期 ２０第０８ ４年期４ 月
湖北农业科学 Ｈｕｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
Ｖｏｌ． ４７ Ｎｏ．４ Ａｐｒ．， ２００８
黄瓜单性结实的遗传分析
王莉莉， 司龙亭， 邹芳斌 （ 沈阳农业大学园艺学院， 沈阳 １１０１６１）
摘要： 选取黄瓜单性结实性差异显著的 ４ 个材料， 采用完全双列杂交半轮配（ 含亲本） 试验设计配制杂交
加性效应为主。所以， 要想培育出具有单性结实性能力强的 Ｆ１ 代杂交组合， 双亲都需要具有较强的单性 结实性能力。
关键词： 黄瓜； 单性结实； 遗传
中图分类号： Ｓ６４２．２； Ｑ９４４．４７； Ｑ３４８
文献标识码： Ａ
文章编号： ０４３９－ ８１１４（ ２００８） ０４－ ０４３７－ ０３
Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐａｒ ｔｈｅｎｏｃａｒ ｐｙ ｉｎ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ
组合， 利用开花前掐花的方法测定亲本及 Ｆ１ 单性结实坐果率。试验按照 ＧｒｉｆｆｉｎｇⅡ方法配制杂交组合， 按照 Ｈａｙｍａｎ 方法分析数据。结果发现， Ｍ３２ 有较高的一般配合力， Ｍ３６×Ｍ３２ 具有较高的 特 殊 配 合 力 ；
广义遗传力达到 ９４．９３％， 平均显性度为 ０．９８９ １。黄瓜单性结实性状遗传符合“加性－ 显性”遗传模型， 以
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湖 北 农 业 科学
２００８ 年
表 １ 不同抑制剂的浓度梯度
抑 制 剂／ｍｇ·Ｌ－ １ 青霉素 萘啶酸 制霉菌素 重铬酸钾 氟哌酸
①
②
③
④
⑤
０．３
０．６
０．８
１．２
２．０
１
３
６
１０
１５
５
１０
１５
２５
５０
２５
５０ １００ ２００ ３００
５
１０
１５
２５
５０
表 ２ 土壤放线菌分离与抑制剂选择正交试验 Ｌ９（ ３４）
表 ３ 正交试验结果及因素指标直观分析
抑 制 剂／ｍｇ·Ｌ－ １
试验结果
培养基 重铬酸钾 萘啶酸 制霉菌素 放线菌／个 其他菌／个 出菌率／％
１
５０
３
５
４９
２２
６９
２
５０
１０
１０
２８
８
７８
３
５０
１５
１５
４６
１４
７７
４
１００
３
１０
４５
１６
７４
５
１００ １０
１５
２９
１３
６９
６
１００ １５
３
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பைடு நூலகம்
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