抗体药物偶联(ADC)新技术的研发 盲评版
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乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，我国乳腺癌发病率呈逐年上升趋 势，增长速度高出高发国家 1～2 个百分点，每年新增病例约 25 万。目前，市场 上的曲妥珠单抗可以显著提高占乳腺癌患者 20%的 HER2 阳性患者的存活率。有 研究报道指出，曲妥珠单抗对部分 HER2 阴性乳腺癌患者仍然有效，因为其能杀 伤肿瘤组织中表达 HER2 的少量肿瘤干细胞。
另一部分进一步处理检测 HER2 抗原内吞情况。 a)抗体内吞 细胞表面的抗体或者偶联物在 4 ℃用 FITC 标记的山羊抗人多抗孵育 30 min，
流式检测细胞表面荧光强度。％内吞=表面总 MFI (4 ℃)-表面总 MFI(37 ℃)/ 表 面总 MFI(4 ℃)×l00；
b) HER2 内吞 细胞在含 10%胎牛血清的培养基孵育 5 min，洗涤，重复 3 次，使细胞表面 的抗体或偶联物完全被洗脱下。然后细胞再用 HER2 抗体 (10 ng/mL)在 4℃孵育 30 min, PBS 洗两次，FITC-标记的山羊抗人抗体 4 ℃孵育 30 min。流式细胞仪 检测 MFI ％ HER2 内吞=表面总 MFI (不处理的阴性细胞表面总 MFI (mAb 或 ADC 处理的细胞)/表面总 MFI (不处理的阴性细胞) ×l00。 6）细胞调亡分析 5×104 个/mL MCF7 在培养基或者 5 ug/mL HER2 抗体或者偶联物作用下培养 72 h。细胞离心，去培养基，用 PBS 洗涤，取 2×l05 个细胞，加 500 uL 结合液， 5 uL AnnexinV，l0 uL PI,室温避光孵育 5 min。流式检测调亡细胞的百分比。 7）体内试验 体外培养的 MCF7 细胞处于对数生长期时,离心用培养液洗两次，再将细胞浓 度调整为 5×107/mL。每只裸鼠皮下注射 0.2 mL 肿瘤细胞。等平均肿瘤大小长到 260 mm3 以上时，将 18 只裸鼠随机分成 3 组。裸鼠经尾静脉分别给予 PBS、HER2 抗体(3 mg/kg)和偶联药物 (3mg/kg) , 3 天一次，共 3 次。脾瘤大小釆用公式 (L×W2)/2 计算，L 为肿瘤的长，W 为垂直于 L 的宽。停药一天后处死阴性组小 鼠，剥离瘤体，给药组继续养着检测肿瘤生长情况。
用点击化学，实现抗体-小分子或荧光标签的模块化偶联，可应用于治疗和示踪 检测。
2、应用前景及市场分析：市场趋势预测和市场机会，市场规模、市场结构与划 分、目标市场、产品所处市场发展阶段（空白/新开发/高成长/成熟/饱和）、品 牌状况
乳腺癌在中国是女性发病率第一的恶性肿瘤，我国每年大约新增乳腺癌患者 约 25 万。目前，紫杉醇系列细胞抑制剂类药物、抗代谢类药物、内分泌抗激素 治疗药物、芳香酶抑制剂和黄体生成激素释放激素类似物仍是临床中的主流品 种。针对乳腺癌的靶向治疗药物是近年来的研究热点和市场关注焦点，主要包括 以 HER2 受体为靶点的药物如单抗类药物曲妥珠单抗、小分子蛋白激酶抑制剂拉 帕替尼等，以及血管生成抑制剂贝伐单抗。
2、拟解决的关键问题 1. 提高抗体与小分子药物偶联效率： 当前抗体与药物偶技术，一般通过与抗体的侧链氨基反应偶联药物分子，或
者通过对抗体糖链进行氧化还原反应偶联药物小分子，但是这些反应是位点非特 异的，抗体和小分子药物结合比不均一，同时容易造成抗体失活。新的方法是在 抗体蛋白中引入新的半胱氨酸巯基位点，或者引入非天然氨基酸作为反应位点，
Bryostatins 是从海洋动物苔藓虫中提取出的 20 多种大环内酯的总称，具 有显著的抗癌抗炎等药理活性。最早被发现的 Bryostatin 1，能够结合并激活 PKC，促进细胞凋亡，具有抑癌功能。Bryostatin 1 已经用于治疗中风，糖尿病， 阿尔茨海默症和转移性结直肠癌（phase 2）的临床试验。Bryostatins 成员具 有相同或相似的大环核心结构，其中以 Bryostatin 19 效果最佳，但也最难获 得，而 Bryostatin 1, 4 和 5 等效果较好，且产量较多。Bryostatins 可以作为 很有潜力的 ADC 的候选药物。
但需要对抗体基因进行改造，容易导致抗体产率和稳定性降低。我们发明的技术， 不需要在抗体引入突变位点或非天然氨基酸位点，可以通过特殊的 linker 对抗 体 N-末端氨基进行药物偶联，确保抗体-小分子药物结合比均一，实现定点定量 偶联，并且是在温和的生理条件下反应，避免了抗体蛋白的失活。
2. 简化常规抗体药物偶联的工艺： 常规的 ADC 技术通常涉及众多步骤，对于不同的化学药物需要设计不同的实 验方法，技术普遍不具有兼容性和通用行。我们发明特殊的 linker 连接抗体和 小分子药物，采用点击化学技术，将反应拆分为 Azido-抗体和 DBCO-小分子药物 两大模块，可以实现不同抗体和小分子药物之间的组合偶联。这种模块化的反应， 广泛适用于各种化学药物，简化了整个偶联的工艺。 3．拟采取的技术路线（市场推广路线）及可行性分析（请附技术路线图） 在制备 HER2 mAb 的基础上，合成 HER2 mAb-DOX，PTX 和 Bry 4 等 ADC 药物 ， 对其各项兴致进行检测，以乳腺癌小鼠模型研究 ADCs 的在体内抑制癌细胞增殖 的能力。再进一步上海医院合作检测 HER2 mAb ADCs 对乳腺癌患者来源癌细胞的 治疗效果，做好临床前实验准备。本课题组和中心具备进行抗体基因克隆，表达 和纯化所需的实验仪器设备，以及各类细胞，动物水平的药理学实验设施和手段。 ADC 药物合成由合成中心提供合作和指导。
二、项目研Fra Baidu bibliotek内容 1、主要研究内容
1. HER2 人源化抗体的构建，表达和纯化； 从全人源的天然噬菌体 Fab 库中筛选分离到靶向 HER2 胞外区的抗体 scFv 基因，连接至 pET23a 载体中，转入感受态细胞中，挑取单克隆进行鉴定，鉴定 正确的克隆进行测序。之后进一步克隆全长的 HER2 抗体基因,连接至 B3.1 载体,
转染 293F 细胞表达全长抗体，分离纯化，并检测所表达的抗体的稳定性、聚集 性和亲和性。
2.抗体药物偶联 合成 Azido linker；ADC 的偶联方法包括常规的 EDC-NHS 催化肽键偶联和 Azido-DBCO 点击化学偶联；将 HER2 单抗与小分子药物 DOX, PTX 和 Bry 4 等偶 联；对合成，偶联反应过程中的各种产物进行色谱，质谱和核磁共振分析鉴定。 3.抗体偶联物活性检测 建立细胞水平和动物水平的乳腺癌试验模型，重点评估 HER2 mAb-Bry 4 的 效果； 1）抗体及偶联物与 HER2 阳性 MCF7 细胞的结合检测 1×106 MCF7 细胞和不同浓度抗体或对应的偶联物在 1% BSA 溶液里 4 ℃孵 育 30 min，PBS 洗两次后，用 FITC 标记的山羊抗人多抗 4℃孵育 30 min，PBS 洗后流式细胞仪检测 FITC 荧光强度。 2）CDC 活性检测 调整细胞浓度 4-6×105/mL, 0.1 mL/孔；加入不同浓度的抗体或偶联物，0.05 ml/孔，阴性对照孔加 0.05 mL 培养液，37℃ 5% C02 的孵箱中培养 20 min;取稀 释好的补体，50 uL /孔加样，室温震荡混句约 1 min，置 37 ℃培养箱中培养 120 min。CCK 检测活性，测定 OD450nm。 3）细胞毒性检测 细胞铺板，1x104/孔；加入不同浓度的抗体或抗体偶联药物 0.1ml/孔，阴性 对照孔加 0.1 ml 培养液，37℃ 5% CO2 孵箱中培养 4 天。每孔加 10 uL CCK, 37℃ 5% CO2 孵箱中培养 4 h，测定 OD450nm。 4）竞争性抑制 竞争性抑制试验是为了间接观察 ADCs 是否通过结合 HER2 抗原然后发挥活 性。细胞在 lug/mL 的偶联物作用下，添加 l00 ng/ mL 的 HER2 抗体，37℃ 5% CO2 孵箱中培养 72 h, CCK 检测活性，测定 OD450nm。 5）内吞检测 MCF7 在 10 ug/mL HER2 抗体或者 ADCs (10 ug/mL) 4℃下孵育 30 min。经 过洗涤之后，细胞在 4 ℃或者 37 ℃里继续培养 2 h。洗涤，流式检测抗体内吞。
避免长期反复用药造成肿瘤细胞的药物耐受。2013 年罗氏制药的 T-DM1，将曲妥 珠单抗与化疗药物 Emtansine 偶联，作为首个获批上市的 ADC 药物，用于治疗 HER2 阳性晚期转移性乳腺癌。ADC 药物从实验室走向临床是抗体药物发展的又一 个新趋势。
ADC 由抗体，小分子药物和连接臂构成。抗体必须具有高度的靶向特异性， 能有效诱导细胞内吞。小分子药物要求有很强的细胞毒性，高稳定性，如刺孢霉 素、类美登素等。连接臂应在人体血液中高度稳定，进入细胞后解离释放小分子 药物。影响 ADC 效果还包括抗体的连接位点，以及小分子药物与抗体的数量比。 抗体上可以用于偶联小分子药物的基团有氨基，羧基，巯基，以及糖链，偶联方 法为化学法和酶法。目前上市的 ADC 采用常规的偶联方法导致抗体-小分子药物 偶联位点非特异,偶联数目比和产品质量不均一，影响 ADC 的治疗效果。因此未 来 ADC 的研发集中在筛选更为有效的细胞毒性小分子和改进连接技术，增强 ADC 治疗效果。
申请人课题组已经克隆全人源化 HER2 单抗基因,计划制备 HER2 单抗 ADCs， 并建立乳腺癌模型验证这些 ADCs 的治疗效果。实验采用的小分子药物既包括传 统的阿霉素（Doxorubicin，DOX）和紫杉醇（Paclitaxel，PTX），也包括新型海 洋抗癌化合物 Bryostatins。在 ADC 偶联方面，探索新的定点定量偶联方法，采
项目名称：抗体药物偶联(ADC)新技术的研发 所属领域：生物医药 所属类别：应用创新类
正文 （全文不超过 5000 字） 一、项目立项依据 1、项目背景及研究意义 抗体是机体对外界抗原如细菌，病毒，毒素等刺激而产生的免疫球蛋白，与 抗原结合而发挥治疗疾病的功能。抗体药物具有高特异性，高效性和安全可靠等 特点,因而广泛用于疾病的诊断和治疗。 抗体药物经历了第一代动物多价抗血清，第二代杂交瘤技术制备的单克隆抗 体（monoclonal antibody，mAb）和第三代基因工程抗体三个阶段。基因工程抗 体,主要是利用 DNA 重组技术对抗体结构进行改造，消除不利性状或增加新的生 物学功能，或制备各种形式的重组抗体。 由于单抗药物靶向治疗，高效，低毒的特点，和化疗药物相比具有明显的优 势，单抗与化疗药物联合用药给肿瘤患者带来显著生存受益，逐步的成为部分肿 瘤领域一线治疗选择。1997 年 FDA 批准嵌合抗体美罗华上市，用于非霍奇金氏 淋巴瘤治疗。与它一起跻身 10 亿美元销售榜的还有次年上市的嵌合抗体英夫利 昔单抗以及人源化抗体帕利珠单抗和曲妥珠单抗（Trastuzumab，商品名赫赛汀， 用于乳腺癌治疗）。自此单抗产业进入高速发展期。2002 年全球第一个全人源化 的单抗阿达木单抗被 FDA 批准上市，成为最畅销的超级明星药物，2012 年的销 售额为 92.6 亿美元。2004 年贝伐单抗上市，2008 年销量达 29 亿美元。可见， 单抗药物的全人源化是发展趋势，降低对人体的异源刺激，提高安全性。 将抗体与放射性同位素，毒素，化疗药物等细胞毒性物质偶联，即抗体-药 物偶联物（antibody-drug conjugate，ADC），又称生物导弹，使小分子药物特 异性靶向肿瘤组织,从而杀伤肿瘤细胞。ADC 能改善小分子药物的代谢动力学， 减少小分子药物在体内的非特异性分布和治疗剂量，降低毒副作用。ADC 药物能 够在第一时间将其杀死，或至少导致细胞周期停滞，从而为患者赢得生存时间，
赫赛汀是第一个被 FDA 批准用于治疗 HER2 阳性的转移乳腺癌和早期乳腺癌 单抗药物，本世纪初进入中国市场。从上市到 2013 年总销售额已超过 500 亿瑞 士法郎，是全球前三位抗肿瘤单抗药物中增长率最高的品种。赫赛汀在我国的使 用逐年增长，2013 年 16 城市样本医院曲妥珠单抗销售额为 3.92 亿元。2013 年 FDA 批准罗氏旗下基因泰克公司的帕妥珠单抗（Pertuzumab）作为早期乳腺癌手 术前治疗用药，和治疗晚期转移性 HER2 阳性乳腺癌用药。同年，罗氏的 T-DM1 成为第一个获得 FDA 批准的上市 ADC 药物，提升治疗 HER2 阳性乳腺癌的效果。 以 HER2 为靶点治疗乳腺癌的三种上市单抗 Trastuzumab，Pertuzumab 和 T-DM1 均为罗氏拥有，但新研发的后两个单抗尚未在中国上市。可见，研发治疗乳腺癌 的高效单抗药物，是患者的迫切需求，具有重大的研究价值和经济效益。
另一部分进一步处理检测 HER2 抗原内吞情况。 a)抗体内吞 细胞表面的抗体或者偶联物在 4 ℃用 FITC 标记的山羊抗人多抗孵育 30 min，
流式检测细胞表面荧光强度。％内吞=表面总 MFI (4 ℃)-表面总 MFI(37 ℃)/ 表 面总 MFI(4 ℃)×l00；
b) HER2 内吞 细胞在含 10%胎牛血清的培养基孵育 5 min，洗涤，重复 3 次，使细胞表面 的抗体或偶联物完全被洗脱下。然后细胞再用 HER2 抗体 (10 ng/mL)在 4℃孵育 30 min, PBS 洗两次，FITC-标记的山羊抗人抗体 4 ℃孵育 30 min。流式细胞仪 检测 MFI ％ HER2 内吞=表面总 MFI (不处理的阴性细胞表面总 MFI (mAb 或 ADC 处理的细胞)/表面总 MFI (不处理的阴性细胞) ×l00。 6）细胞调亡分析 5×104 个/mL MCF7 在培养基或者 5 ug/mL HER2 抗体或者偶联物作用下培养 72 h。细胞离心，去培养基，用 PBS 洗涤，取 2×l05 个细胞，加 500 uL 结合液， 5 uL AnnexinV，l0 uL PI,室温避光孵育 5 min。流式检测调亡细胞的百分比。 7）体内试验 体外培养的 MCF7 细胞处于对数生长期时,离心用培养液洗两次，再将细胞浓 度调整为 5×107/mL。每只裸鼠皮下注射 0.2 mL 肿瘤细胞。等平均肿瘤大小长到 260 mm3 以上时，将 18 只裸鼠随机分成 3 组。裸鼠经尾静脉分别给予 PBS、HER2 抗体(3 mg/kg)和偶联药物 (3mg/kg) , 3 天一次，共 3 次。脾瘤大小釆用公式 (L×W2)/2 计算，L 为肿瘤的长，W 为垂直于 L 的宽。停药一天后处死阴性组小 鼠，剥离瘤体，给药组继续养着检测肿瘤生长情况。
用点击化学，实现抗体-小分子或荧光标签的模块化偶联，可应用于治疗和示踪 检测。
2、应用前景及市场分析：市场趋势预测和市场机会，市场规模、市场结构与划 分、目标市场、产品所处市场发展阶段（空白/新开发/高成长/成熟/饱和）、品 牌状况
乳腺癌在中国是女性发病率第一的恶性肿瘤，我国每年大约新增乳腺癌患者 约 25 万。目前，紫杉醇系列细胞抑制剂类药物、抗代谢类药物、内分泌抗激素 治疗药物、芳香酶抑制剂和黄体生成激素释放激素类似物仍是临床中的主流品 种。针对乳腺癌的靶向治疗药物是近年来的研究热点和市场关注焦点，主要包括 以 HER2 受体为靶点的药物如单抗类药物曲妥珠单抗、小分子蛋白激酶抑制剂拉 帕替尼等，以及血管生成抑制剂贝伐单抗。
2、拟解决的关键问题 1. 提高抗体与小分子药物偶联效率： 当前抗体与药物偶技术，一般通过与抗体的侧链氨基反应偶联药物分子，或
者通过对抗体糖链进行氧化还原反应偶联药物小分子，但是这些反应是位点非特 异的，抗体和小分子药物结合比不均一，同时容易造成抗体失活。新的方法是在 抗体蛋白中引入新的半胱氨酸巯基位点，或者引入非天然氨基酸作为反应位点，
Bryostatins 是从海洋动物苔藓虫中提取出的 20 多种大环内酯的总称，具 有显著的抗癌抗炎等药理活性。最早被发现的 Bryostatin 1，能够结合并激活 PKC，促进细胞凋亡，具有抑癌功能。Bryostatin 1 已经用于治疗中风，糖尿病， 阿尔茨海默症和转移性结直肠癌（phase 2）的临床试验。Bryostatins 成员具 有相同或相似的大环核心结构，其中以 Bryostatin 19 效果最佳，但也最难获 得，而 Bryostatin 1, 4 和 5 等效果较好，且产量较多。Bryostatins 可以作为 很有潜力的 ADC 的候选药物。
但需要对抗体基因进行改造，容易导致抗体产率和稳定性降低。我们发明的技术， 不需要在抗体引入突变位点或非天然氨基酸位点，可以通过特殊的 linker 对抗 体 N-末端氨基进行药物偶联，确保抗体-小分子药物结合比均一，实现定点定量 偶联，并且是在温和的生理条件下反应，避免了抗体蛋白的失活。
2. 简化常规抗体药物偶联的工艺： 常规的 ADC 技术通常涉及众多步骤，对于不同的化学药物需要设计不同的实 验方法，技术普遍不具有兼容性和通用行。我们发明特殊的 linker 连接抗体和 小分子药物，采用点击化学技术，将反应拆分为 Azido-抗体和 DBCO-小分子药物 两大模块，可以实现不同抗体和小分子药物之间的组合偶联。这种模块化的反应， 广泛适用于各种化学药物，简化了整个偶联的工艺。 3．拟采取的技术路线（市场推广路线）及可行性分析（请附技术路线图） 在制备 HER2 mAb 的基础上，合成 HER2 mAb-DOX，PTX 和 Bry 4 等 ADC 药物 ， 对其各项兴致进行检测，以乳腺癌小鼠模型研究 ADCs 的在体内抑制癌细胞增殖 的能力。再进一步上海医院合作检测 HER2 mAb ADCs 对乳腺癌患者来源癌细胞的 治疗效果，做好临床前实验准备。本课题组和中心具备进行抗体基因克隆，表达 和纯化所需的实验仪器设备，以及各类细胞，动物水平的药理学实验设施和手段。 ADC 药物合成由合成中心提供合作和指导。
二、项目研Fra Baidu bibliotek内容 1、主要研究内容
1. HER2 人源化抗体的构建，表达和纯化； 从全人源的天然噬菌体 Fab 库中筛选分离到靶向 HER2 胞外区的抗体 scFv 基因，连接至 pET23a 载体中，转入感受态细胞中，挑取单克隆进行鉴定，鉴定 正确的克隆进行测序。之后进一步克隆全长的 HER2 抗体基因,连接至 B3.1 载体,
转染 293F 细胞表达全长抗体，分离纯化，并检测所表达的抗体的稳定性、聚集 性和亲和性。
2.抗体药物偶联 合成 Azido linker；ADC 的偶联方法包括常规的 EDC-NHS 催化肽键偶联和 Azido-DBCO 点击化学偶联；将 HER2 单抗与小分子药物 DOX, PTX 和 Bry 4 等偶 联；对合成，偶联反应过程中的各种产物进行色谱，质谱和核磁共振分析鉴定。 3.抗体偶联物活性检测 建立细胞水平和动物水平的乳腺癌试验模型，重点评估 HER2 mAb-Bry 4 的 效果； 1）抗体及偶联物与 HER2 阳性 MCF7 细胞的结合检测 1×106 MCF7 细胞和不同浓度抗体或对应的偶联物在 1% BSA 溶液里 4 ℃孵 育 30 min，PBS 洗两次后，用 FITC 标记的山羊抗人多抗 4℃孵育 30 min，PBS 洗后流式细胞仪检测 FITC 荧光强度。 2）CDC 活性检测 调整细胞浓度 4-6×105/mL, 0.1 mL/孔；加入不同浓度的抗体或偶联物，0.05 ml/孔，阴性对照孔加 0.05 mL 培养液，37℃ 5% C02 的孵箱中培养 20 min;取稀 释好的补体，50 uL /孔加样，室温震荡混句约 1 min，置 37 ℃培养箱中培养 120 min。CCK 检测活性，测定 OD450nm。 3）细胞毒性检测 细胞铺板，1x104/孔；加入不同浓度的抗体或抗体偶联药物 0.1ml/孔，阴性 对照孔加 0.1 ml 培养液，37℃ 5% CO2 孵箱中培养 4 天。每孔加 10 uL CCK, 37℃ 5% CO2 孵箱中培养 4 h，测定 OD450nm。 4）竞争性抑制 竞争性抑制试验是为了间接观察 ADCs 是否通过结合 HER2 抗原然后发挥活 性。细胞在 lug/mL 的偶联物作用下，添加 l00 ng/ mL 的 HER2 抗体，37℃ 5% CO2 孵箱中培养 72 h, CCK 检测活性，测定 OD450nm。 5）内吞检测 MCF7 在 10 ug/mL HER2 抗体或者 ADCs (10 ug/mL) 4℃下孵育 30 min。经 过洗涤之后，细胞在 4 ℃或者 37 ℃里继续培养 2 h。洗涤，流式检测抗体内吞。
避免长期反复用药造成肿瘤细胞的药物耐受。2013 年罗氏制药的 T-DM1，将曲妥 珠单抗与化疗药物 Emtansine 偶联，作为首个获批上市的 ADC 药物，用于治疗 HER2 阳性晚期转移性乳腺癌。ADC 药物从实验室走向临床是抗体药物发展的又一 个新趋势。
ADC 由抗体，小分子药物和连接臂构成。抗体必须具有高度的靶向特异性， 能有效诱导细胞内吞。小分子药物要求有很强的细胞毒性，高稳定性，如刺孢霉 素、类美登素等。连接臂应在人体血液中高度稳定，进入细胞后解离释放小分子 药物。影响 ADC 效果还包括抗体的连接位点，以及小分子药物与抗体的数量比。 抗体上可以用于偶联小分子药物的基团有氨基，羧基，巯基，以及糖链，偶联方 法为化学法和酶法。目前上市的 ADC 采用常规的偶联方法导致抗体-小分子药物 偶联位点非特异,偶联数目比和产品质量不均一，影响 ADC 的治疗效果。因此未 来 ADC 的研发集中在筛选更为有效的细胞毒性小分子和改进连接技术，增强 ADC 治疗效果。
申请人课题组已经克隆全人源化 HER2 单抗基因,计划制备 HER2 单抗 ADCs， 并建立乳腺癌模型验证这些 ADCs 的治疗效果。实验采用的小分子药物既包括传 统的阿霉素（Doxorubicin，DOX）和紫杉醇（Paclitaxel，PTX），也包括新型海 洋抗癌化合物 Bryostatins。在 ADC 偶联方面，探索新的定点定量偶联方法，采
项目名称：抗体药物偶联(ADC)新技术的研发 所属领域：生物医药 所属类别：应用创新类
正文 （全文不超过 5000 字） 一、项目立项依据 1、项目背景及研究意义 抗体是机体对外界抗原如细菌，病毒，毒素等刺激而产生的免疫球蛋白，与 抗原结合而发挥治疗疾病的功能。抗体药物具有高特异性，高效性和安全可靠等 特点,因而广泛用于疾病的诊断和治疗。 抗体药物经历了第一代动物多价抗血清，第二代杂交瘤技术制备的单克隆抗 体（monoclonal antibody，mAb）和第三代基因工程抗体三个阶段。基因工程抗 体,主要是利用 DNA 重组技术对抗体结构进行改造，消除不利性状或增加新的生 物学功能，或制备各种形式的重组抗体。 由于单抗药物靶向治疗，高效，低毒的特点，和化疗药物相比具有明显的优 势，单抗与化疗药物联合用药给肿瘤患者带来显著生存受益，逐步的成为部分肿 瘤领域一线治疗选择。1997 年 FDA 批准嵌合抗体美罗华上市，用于非霍奇金氏 淋巴瘤治疗。与它一起跻身 10 亿美元销售榜的还有次年上市的嵌合抗体英夫利 昔单抗以及人源化抗体帕利珠单抗和曲妥珠单抗（Trastuzumab，商品名赫赛汀， 用于乳腺癌治疗）。自此单抗产业进入高速发展期。2002 年全球第一个全人源化 的单抗阿达木单抗被 FDA 批准上市，成为最畅销的超级明星药物，2012 年的销 售额为 92.6 亿美元。2004 年贝伐单抗上市，2008 年销量达 29 亿美元。可见， 单抗药物的全人源化是发展趋势，降低对人体的异源刺激，提高安全性。 将抗体与放射性同位素，毒素，化疗药物等细胞毒性物质偶联，即抗体-药 物偶联物（antibody-drug conjugate，ADC），又称生物导弹，使小分子药物特 异性靶向肿瘤组织,从而杀伤肿瘤细胞。ADC 能改善小分子药物的代谢动力学， 减少小分子药物在体内的非特异性分布和治疗剂量，降低毒副作用。ADC 药物能 够在第一时间将其杀死，或至少导致细胞周期停滞，从而为患者赢得生存时间，
赫赛汀是第一个被 FDA 批准用于治疗 HER2 阳性的转移乳腺癌和早期乳腺癌 单抗药物，本世纪初进入中国市场。从上市到 2013 年总销售额已超过 500 亿瑞 士法郎，是全球前三位抗肿瘤单抗药物中增长率最高的品种。赫赛汀在我国的使 用逐年增长，2013 年 16 城市样本医院曲妥珠单抗销售额为 3.92 亿元。2013 年 FDA 批准罗氏旗下基因泰克公司的帕妥珠单抗（Pertuzumab）作为早期乳腺癌手 术前治疗用药，和治疗晚期转移性 HER2 阳性乳腺癌用药。同年，罗氏的 T-DM1 成为第一个获得 FDA 批准的上市 ADC 药物，提升治疗 HER2 阳性乳腺癌的效果。 以 HER2 为靶点治疗乳腺癌的三种上市单抗 Trastuzumab，Pertuzumab 和 T-DM1 均为罗氏拥有，但新研发的后两个单抗尚未在中国上市。可见，研发治疗乳腺癌 的高效单抗药物，是患者的迫切需求，具有重大的研究价值和经济效益。