咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究
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试验仪器： ＨＨ－Ｓ 恒温水浴锅：江苏国胜实验仪器厂；７２１ 可见分光光度计：上海成光仪器有限公司；ＦＡ２００４ 型电子天平：上海良平仪器有限公司； 试剂： 咔唑：ＡＲ，合肥博美生物科技有限责任公司；
浓硫酸：ＡＲ，淮南市化学试剂厂；无水乙醇：ＡＲ，上 海振企化学试剂有限公司；果胶：课题组从皖南山 区采集豆腐柴叶自制． １．２ 试验方法 １．２．１ 测量方法依据
关键词：咔 唑 硫 酸 比 色 法 ；豆 腐 柴 果 胶 ；含 量 测 定 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－ ２６０Ｘ（２０１２）１１－ ０１０８－ ０３
果胶是一种植物胶体，是从植物中提取的一种 复杂的天然高分子聚合物，存在于植物的细胞壁和 细胞内层，是细胞壁的组成成分．果胶分子主要是 由 α－１，４－ 糖苷键联接而成的半乳糖醛酸（Ｇ．Ａ．） 与鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等中性糖联结而成［１］． 果胶安全无毒，被广泛应用于食品、医药、纺织、化 妆品、冶金、烟草等行业［２－３］．目前国内对其含量的测 定方法主要有重量法［４］、容量法［４］、比色法［５］和滴定法 ［５］等．其中重量法中果胶经皂化生成果胶酸钠，再经 乙酸酸化使之生成果胶酸，加入钙盐则生成果胶酸 钙沉淀，烘干后称量［６］．此法稳定可靠，但操作较烦 琐费时，分析时间较长，不宜普遍推广．比色法是通 过测定半乳糖醛酸的含量来获得果胶的含量，准确 性好，且操作简单，在用于剑麻、苎麻［７］、甜菜［８］、向日 葵［９］、柑橘［１０］等中果胶的含量测定时，都取得了满意 的结果．本实验用咔唑比色法测定豆腐柴中果胶的 含量，并且对果胶的水解条件和半乳糖醛酸的测定 条件做了详细的实验，获得了满意的结果． 1 试验部分 １．１ 试验仪器与主要试剂
０．１５％咔唑无水乙醇溶液：称取 ０．１５ｇ 的咔唑 置烧杯中，加入乙醇溶解后定容于 １００ｍｌ 容量瓶中 备用．
标准曲线的绘制：取上述标准溶液各 １ｍｌ 于 ６ 个试管中，加入浓硫酸 １０ｍｌ， 边加边冷却，放于 ８５℃水浴 锅 中 加 热 ２５ｍｉｎ 后 冷 却 至 室 温 ， 加 入 ０．１５％咔唑无水乙醇溶液 ０．８ｍｌ，摇匀，在 ５３０ｎｍ 处 依次测定吸光度，空白试剂为参比，以吸光度为纵 坐标，半乳糖醛酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，
称取样品果胶 ６．０ｇ 置于 ２５０ｍｌ 烧杯中，加入 １．０ｍｏｌ／Ｌ 的硫酸溶液 １０．０ｍｌ，边加边冷却，冷却至 室温后，置于 ８５℃水浴中加热 ２５ｍｉｎ 进行水解，水 解后冷却至室温，转入 ５０ｍｌ 容量瓶中，稀释定容， 得到样品溶液．移取样品溶液 １０ｍｌ，置于 ５０ｍｌ 容量 瓶中并定容，移取稀释后的样品溶液 １．０ｍｌ 放于试 管中，加入 ０．１５％的咔唑无水乙醇溶液 ０．８ｍｌ，充分 摇匀后于暗处放置 ２５ｍｉｎ 后，以试剂空白为参比， 放于 ７２１ 分光光度计 ５３０ｎｍ 处测定其吸光度．
第 ２８ 卷 第 １１ 期（上） ２０１２ 年 １１ 月
赤 峰 学 院 学 报（ 自 然 科 学 版 ） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｆｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ． ２８ Ｎｏ． １１ Ｎｏｖ． ２０１２
咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究
以半乳糖醛酸为对照品测定豆腐柴中果胶含 量，利用半乳糖醛酸与咔唑反应生成有颜色的配合 物，在可见光区 ５３０ｎｍ［１１］处有最大吸收，以测得的 半乳糖醛酸的浓度来计算果胶的含量． １．２．２ 半乳糖醛酸标准曲线的绘制
半乳糖醛酸标准溶液：精确称取 ０．１０００ｇ 半乳 糖醛酸于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后转移至 １００ｍｌ 容量瓶中，用 ｐＨ 为 ３．０ 的盐酸稀释并定容． 用移液管分移取上述 稀 释 液 １．０ｍｌ、２．０ｍｌ、３．０ｍｌ、 ４．０ｍｌ、５．０ｍｌ、６．０ｍｌ 于 ６ 个 １００ｍｌ 容量瓶中，用 ＰＨ 为 ３．０ 的盐酸稀释至刻度，得到浓度分别为 １０、２０、 ３０、４０、５０、６０ｕｇ／ｍｌ 的半乳糖醛酸标准溶液，备用．
陶阿丽，张国升
（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 ２３００８８）
摘 要：使用咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶的含量，得到符合试验方法的最佳测定条件：测定果胶含量 所需的浓硫酸用量为 １０．０ｍｌ，水解温度为 ８５℃，水解时间为 ２５ｍｉｎ，０．１５％咔唑无水乙醇溶液用量为 ０．８ｍｌ，提取的果胶含量为 ３７．８％，半乳糖醛酸的标准曲线方程为 Ａ＝０．００４３Ｃ＋０．１０４，回收率在 ９８．６％－ １０３．４％，相对标准偏差为 １．５２９％．本法操作简单，稳 定性好，用于实际样品测定时，效果较为满意．
计算公式 １．１：果胶含量（％）＝Ｃ×５０×（５０／１０）× ｆ／Ｗ×１０３
其中，Ｃ 为半乳糖醛酸浓度（ｍｇ／ｍｌ），ｆ 为换算因 子，Ｗ 为样品重量
根据计算公式得出样品果胶含量为 ３７．８％ 2 ຫໍສະໝຸດ Baidu果与讨论 ２．１ ０．１５％的咔唑无水乙醇溶液用量的选择
其他条件不变，分别测定显色剂的用量为 ０．４ｍｌ、０．５ｍｌ、０．６ｍｌ、０．７ｍｌ、０．８、０．９ｍｌ、１．０ｍｌ 时 的 吸 光度，结果表明（见图 ２），当显色剂的用量为 ０．８ｍｌ 时，吸光度最大，因此咔唑无水乙醇溶液的用量宜 为 ０．８ｍｌ． ２．２ 浓硫酸用量的选择
基 金 项 目 ：安 徽 省 教 育 厅 自 然 研 究 项 目 （KJ2011Z159） － １０８ －
得曲线方程为 Ａ＝０．００４３Ｃ＋０．１０４，ｒ＝０．９９９６ 曲线见 图 １．
图 １ 标准曲线
１．２．３ 换算因子的测定 称取样品果胶 ２０ｍｇ，至 １００ｍｌ 容量瓶中，用
ｐＨ 为 ３．０ 的盐酸定容，移取 １ｍｌ 该溶液于 １００ｍｌ 容量瓶中并用盐酸定容，按 １．２．２ 的测定方法测定 其吸光度（Ａ＝０．１１２），根据标准曲线得到其半乳糖醛 酸 的 浓 度（Ｃ），根 据 换 算 因 子 ｆ＝Ｗ／ （Ｃ ×Ｄ） 得 ｆ＝１． ２６５１． １．２．４ 样品果胶的含量测定
浓硫酸：ＡＲ，淮南市化学试剂厂；无水乙醇：ＡＲ，上 海振企化学试剂有限公司；果胶：课题组从皖南山 区采集豆腐柴叶自制． １．２ 试验方法 １．２．１ 测量方法依据
关键词：咔 唑 硫 酸 比 色 法 ；豆 腐 柴 果 胶 ；含 量 测 定 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－ ２６０Ｘ（２０１２）１１－ ０１０８－ ０３
果胶是一种植物胶体，是从植物中提取的一种 复杂的天然高分子聚合物，存在于植物的细胞壁和 细胞内层，是细胞壁的组成成分．果胶分子主要是 由 α－１，４－ 糖苷键联接而成的半乳糖醛酸（Ｇ．Ａ．） 与鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖等中性糖联结而成［１］． 果胶安全无毒，被广泛应用于食品、医药、纺织、化 妆品、冶金、烟草等行业［２－３］．目前国内对其含量的测 定方法主要有重量法［４］、容量法［４］、比色法［５］和滴定法 ［５］等．其中重量法中果胶经皂化生成果胶酸钠，再经 乙酸酸化使之生成果胶酸，加入钙盐则生成果胶酸 钙沉淀，烘干后称量［６］．此法稳定可靠，但操作较烦 琐费时，分析时间较长，不宜普遍推广．比色法是通 过测定半乳糖醛酸的含量来获得果胶的含量，准确 性好，且操作简单，在用于剑麻、苎麻［７］、甜菜［８］、向日 葵［９］、柑橘［１０］等中果胶的含量测定时，都取得了满意 的结果．本实验用咔唑比色法测定豆腐柴中果胶的 含量，并且对果胶的水解条件和半乳糖醛酸的测定 条件做了详细的实验，获得了满意的结果． 1 试验部分 １．１ 试验仪器与主要试剂
０．１５％咔唑无水乙醇溶液：称取 ０．１５ｇ 的咔唑 置烧杯中，加入乙醇溶解后定容于 １００ｍｌ 容量瓶中 备用．
标准曲线的绘制：取上述标准溶液各 １ｍｌ 于 ６ 个试管中，加入浓硫酸 １０ｍｌ， 边加边冷却，放于 ８５℃水浴 锅 中 加 热 ２５ｍｉｎ 后 冷 却 至 室 温 ， 加 入 ０．１５％咔唑无水乙醇溶液 ０．８ｍｌ，摇匀，在 ５３０ｎｍ 处 依次测定吸光度，空白试剂为参比，以吸光度为纵 坐标，半乳糖醛酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，
称取样品果胶 ６．０ｇ 置于 ２５０ｍｌ 烧杯中，加入 １．０ｍｏｌ／Ｌ 的硫酸溶液 １０．０ｍｌ，边加边冷却，冷却至 室温后，置于 ８５℃水浴中加热 ２５ｍｉｎ 进行水解，水 解后冷却至室温，转入 ５０ｍｌ 容量瓶中，稀释定容， 得到样品溶液．移取样品溶液 １０ｍｌ，置于 ５０ｍｌ 容量 瓶中并定容，移取稀释后的样品溶液 １．０ｍｌ 放于试 管中，加入 ０．１５％的咔唑无水乙醇溶液 ０．８ｍｌ，充分 摇匀后于暗处放置 ２５ｍｉｎ 后，以试剂空白为参比， 放于 ７２１ 分光光度计 ５３０ｎｍ 处测定其吸光度．
第 ２８ 卷 第 １１ 期（上） ２０１２ 年 １１ 月
赤 峰 学 院 学 报（ 自 然 科 学 版 ） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｆｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ． ２８ Ｎｏ． １１ Ｎｏｖ． ２０１２
咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶含量的研究
以半乳糖醛酸为对照品测定豆腐柴中果胶含 量，利用半乳糖醛酸与咔唑反应生成有颜色的配合 物，在可见光区 ５３０ｎｍ［１１］处有最大吸收，以测得的 半乳糖醛酸的浓度来计算果胶的含量． １．２．２ 半乳糖醛酸标准曲线的绘制
半乳糖醛酸标准溶液：精确称取 ０．１０００ｇ 半乳 糖醛酸于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后转移至 １００ｍｌ 容量瓶中，用 ｐＨ 为 ３．０ 的盐酸稀释并定容． 用移液管分移取上述 稀 释 液 １．０ｍｌ、２．０ｍｌ、３．０ｍｌ、 ４．０ｍｌ、５．０ｍｌ、６．０ｍｌ 于 ６ 个 １００ｍｌ 容量瓶中，用 ＰＨ 为 ３．０ 的盐酸稀释至刻度，得到浓度分别为 １０、２０、 ３０、４０、５０、６０ｕｇ／ｍｌ 的半乳糖醛酸标准溶液，备用．
陶阿丽，张国升
（安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 ２３００８８）
摘 要：使用咔唑硫酸比色法测定皖南山区豆腐柴叶中果胶的含量，得到符合试验方法的最佳测定条件：测定果胶含量 所需的浓硫酸用量为 １０．０ｍｌ，水解温度为 ８５℃，水解时间为 ２５ｍｉｎ，０．１５％咔唑无水乙醇溶液用量为 ０．８ｍｌ，提取的果胶含量为 ３７．８％，半乳糖醛酸的标准曲线方程为 Ａ＝０．００４３Ｃ＋０．１０４，回收率在 ９８．６％－ １０３．４％，相对标准偏差为 １．５２９％．本法操作简单，稳 定性好，用于实际样品测定时，效果较为满意．
计算公式 １．１：果胶含量（％）＝Ｃ×５０×（５０／１０）× ｆ／Ｗ×１０３
其中，Ｃ 为半乳糖醛酸浓度（ｍｇ／ｍｌ），ｆ 为换算因 子，Ｗ 为样品重量
根据计算公式得出样品果胶含量为 ３７．８％ 2 ຫໍສະໝຸດ Baidu果与讨论 ２．１ ０．１５％的咔唑无水乙醇溶液用量的选择
其他条件不变，分别测定显色剂的用量为 ０．４ｍｌ、０．５ｍｌ、０．６ｍｌ、０．７ｍｌ、０．８、０．９ｍｌ、１．０ｍｌ 时 的 吸 光度，结果表明（见图 ２），当显色剂的用量为 ０．８ｍｌ 时，吸光度最大，因此咔唑无水乙醇溶液的用量宜 为 ０．８ｍｌ． ２．２ 浓硫酸用量的选择
基 金 项 目 ：安 徽 省 教 育 厅 自 然 研 究 项 目 （KJ2011Z159） － １０８ －
得曲线方程为 Ａ＝０．００４３Ｃ＋０．１０４，ｒ＝０．９９９６ 曲线见 图 １．
图 １ 标准曲线
１．２．３ 换算因子的测定 称取样品果胶 ２０ｍｇ，至 １００ｍｌ 容量瓶中，用
ｐＨ 为 ３．０ 的盐酸定容，移取 １ｍｌ 该溶液于 １００ｍｌ 容量瓶中并用盐酸定容，按 １．２．２ 的测定方法测定 其吸光度（Ａ＝０．１１２），根据标准曲线得到其半乳糖醛 酸 的 浓 度（Ｃ），根 据 换 算 因 子 ｆ＝Ｗ／ （Ｃ ×Ｄ） 得 ｆ＝１． ２６５１． １．２．４ 样品果胶的含量测定