药物定量分析与方法验证
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可见： 400 ～760nm 灵敏度高，可达 10-4g/ml ～ 10-7g/ml
1. 特点 准确度高， RE （% ）为2% ～5%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛
2. 朗伯-比耳定律 A = ECL
吸收系数：摩尔吸收系数 ε —— 研究分子结构 百分吸收系数 Ｅ11%cm—— 含量测定
第四章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析方法 第二节 分析样品的前处理方法 第三节 药品分析方法验证
练习与思考
基本要求
一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。 二、熟悉定量分析方法的特点 三、熟悉样品的前处理方法。 四、了解定量分析样品的前处理方法的进展
及在药物分析中的应用。
第一节 定量分析方法
3）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：VA的三点校正法
4）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定 影响显色因素很多，故需注意平行操作 空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理
（二）荧光分析法
灵敏度高 ，可达 10-10g/ml ～ 10-12g/ml 在低浓度 进行测定，防止自熄灭作用 1. 特点 用基准溶液 校正仪器灵敏度 制备荧光 衍生物，可提高灵敏度和选择性 干扰因素多 ，需做空白实验 样品用 量少，操作 简单，应用 范围较广
含量％＝（V0－V）FT ? 100％ W
（3）以相当于标示量% 表示
三、光谱分析法
? 光谱 ? 光谱分析法 ? 分光光度法 ? 分类 紫外-可见分光光度法
红外分光光度法 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法
三、光谱分析法
（一）紫外 -可见分光光度法 吸收光谱范围：紫外： 200～400nm
重复性： 对照液连续进样 5次，峰面积 RSD≤2.0％
拖尾因子 ：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05
流动相
四元泵 自动进样器 紫外检测器 荧光检测器
真空脱气机 蒸发光散射检测器
质谱检测器 液质联用仪
流动相：对于以C18为固定相的反相色谱系统， 常用甲醇-水，间或加以乙腈、缓冲液等为流动 相，有机溶剂比例通常不低于5％
四元泵
自动进样器
色谱柱 填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶
检测器
3. 测定方法 1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
峰面积 含量
对照液（ R）： AR 内标液（ S）： AS
供试液（ X）： AX
C R f= —A—S/C—S—
CS
AR /CR
f= —A'—S /—C'—S Ax /Cx
2.含量测定
原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度 等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧 光强度R与该物质浓度C成正比
方法：对照品比较法
计算：
C供＝
R R
供－R 对－R
供空白 对空白
?
C对
四、色谱分析法
根据混合物中各组分的色谱行为差异，先 行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析 的方法，是分离分析混合物的最有力手段。
3. 测定方法
要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7
1）对照品比较法：A供／A对＝C供／C对
AX／AR＝WX／WR
原料药：含量％＝
实测药物质量 供试品取样量
＝ C 供 ?D W
?
100％
制剂：标示量％＝
实测含量 标示含量
/ /
片 片
＝
C供?D? W W ? 标示量
?
100％
片数＝ W W
2）吸收系数法：
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度 （T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量 (mg)
2. 滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
W A=T×VB
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
则药物实测质量为V·T
浓度校正因数 F＝ C实际
C 规定
含量＝
实测药物质量 供试品取样量
?
100％＝
V ?F ?T W
? 100％
W：供试品取样量
（2）间接滴定法 1）生成物滴定法（略）
药物 + A → B 滴定剂 滴定 2）剩余滴定法（回滴法）
药物 + A（定、过量） →················ 剩余的 A + B →·······（回滴）······V 空白试 验···········································V0
? 重量分析法 ? 容量分析法 ? 光谱分析法 ? 色谱分析法
一、重量分析法
生成的沉淀而进行分析的方法
生成沉淀→滤过→洗涤→灼烧→恒重。
特点：
?1、操作繁琐
很少用
?2、结果准确
二、容量分析法
（一）容量分析法的 特点 操作简单、快速； 比较准确（相对误差＜ 0.2%）； 仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm ，长10～100m，
一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或 交联固定液
检测器：氢火焰离子化检测器wk.baidu.com色谱图：30分钟内记录完毕
2. 色谱适用性实验：同HPLC 3.测定法：同HPLC
E CX ?
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E11％cm 作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert －Beer 定律。
按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 分类
按分离方法： PC ；TLC ；柱色谱； GC ；HPLC
特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛
（一）HPLC 法
1. 对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变 色谱图 20分钟 内记录完毕
2. 系统适用性试验 色谱柱的 理论板数 ：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度 ：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于 1.5
CX
Cx=f·—A' S—A/x—C'—S
例
2)外标法测定供试品中主成分含量
对照液（ R）： AR 供试液（ X）： AX
CR
—CA—XX＝—CAR—R
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
（二）GC 法 1. 对GC 仪器一般要求 载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm ，长1～10m，内装吸附剂
1. 特点 准确度高， RE （% ）为2% ～5%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛
2. 朗伯-比耳定律 A = ECL
吸收系数：摩尔吸收系数 ε —— 研究分子结构 百分吸收系数 Ｅ11%cm—— 含量测定
第四章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析方法 第二节 分析样品的前处理方法 第三节 药品分析方法验证
练习与思考
基本要求
一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。 二、熟悉定量分析方法的特点 三、熟悉样品的前处理方法。 四、了解定量分析样品的前处理方法的进展
及在药物分析中的应用。
第一节 定量分析方法
3）计算分光光度法： 多种，具体按每种药物规定的方法进行 如：VA的三点校正法
4）比色法 加入显色剂后，按照对照品比较法测定 影响显色因素很多，故需注意平行操作 空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理
（二）荧光分析法
灵敏度高 ，可达 10-10g/ml ～ 10-12g/ml 在低浓度 进行测定，防止自熄灭作用 1. 特点 用基准溶液 校正仪器灵敏度 制备荧光 衍生物，可提高灵敏度和选择性 干扰因素多 ，需做空白实验 样品用 量少，操作 简单，应用 范围较广
含量％＝（V0－V）FT ? 100％ W
（3）以相当于标示量% 表示
三、光谱分析法
? 光谱 ? 光谱分析法 ? 分光光度法 ? 分类 紫外-可见分光光度法
红外分光光度法 原子吸收分光光度法 荧光分光光度法
三、光谱分析法
（一）紫外 -可见分光光度法 吸收光谱范围：紫外： 200～400nm
重复性： 对照液连续进样 5次，峰面积 RSD≤2.0％
拖尾因子 ：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05
流动相
四元泵 自动进样器 紫外检测器 荧光检测器
真空脱气机 蒸发光散射检测器
质谱检测器 液质联用仪
流动相：对于以C18为固定相的反相色谱系统， 常用甲醇-水，间或加以乙腈、缓冲液等为流动 相，有机溶剂比例通常不低于5％
四元泵
自动进样器
色谱柱 填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶
检测器
3. 测定方法 1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
峰面积 含量
对照液（ R）： AR 内标液（ S）： AS
供试液（ X）： AX
C R f= —A—S/C—S—
CS
AR /CR
f= —A'—S /—C'—S Ax /Cx
2.含量测定
原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度 等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧 光强度R与该物质浓度C成正比
方法：对照品比较法
计算：
C供＝
R R
供－R 对－R
供空白 对空白
?
C对
四、色谱分析法
根据混合物中各组分的色谱行为差异，先 行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析 的方法，是分离分析混合物的最有力手段。
3. 测定方法
要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7
1）对照品比较法：A供／A对＝C供／C对
AX／AR＝WX／WR
原料药：含量％＝
实测药物质量 供试品取样量
＝ C 供 ?D W
?
100％
制剂：标示量％＝
实测含量 标示含量
/ /
片 片
＝
C供?D? W W ? 标示量
?
100％
片数＝ W W
2）吸收系数法：
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度 （T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量 (mg)
2. 滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
W A=T×VB
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
则药物实测质量为V·T
浓度校正因数 F＝ C实际
C 规定
含量＝
实测药物质量 供试品取样量
?
100％＝
V ?F ?T W
? 100％
W：供试品取样量
（2）间接滴定法 1）生成物滴定法（略）
药物 + A → B 滴定剂 滴定 2）剩余滴定法（回滴法）
药物 + A（定、过量） →················ 剩余的 A + B →·······（回滴）······V 空白试 验···········································V0
? 重量分析法 ? 容量分析法 ? 光谱分析法 ? 色谱分析法
一、重量分析法
生成的沉淀而进行分析的方法
生成沉淀→滤过→洗涤→灼烧→恒重。
特点：
?1、操作繁琐
很少用
?2、结果准确
二、容量分析法
（一）容量分析法的 特点 操作简单、快速； 比较准确（相对误差＜ 0.2%）； 仪器普通易得 常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm ，长10～100m，
一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或 交联固定液
检测器：氢火焰离子化检测器wk.baidu.com色谱图：30分钟内记录完毕
2. 色谱适用性实验：同HPLC 3.测定法：同HPLC
E CX ?
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E11％cm 作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert －Beer 定律。
按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 分类
按分离方法： PC ；TLC ；柱色谱； GC ；HPLC
特点：高灵敏度、 高效能、高速度、应用广泛
（一）HPLC 法
1. 对仪器一般要求 固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变 其他均可适当改变 色谱图 20分钟 内记录完毕
2. 系统适用性试验 色谱柱的 理论板数 ：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度 ：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于 1.5
CX
Cx=f·—A' S—A/x—C'—S
例
2)外标法测定供试品中主成分含量
对照液（ R）： AR 供试液（ X）： AX
CR
—CA—XX＝—CAR—R
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
（二）GC 法 1. 对GC 仪器一般要求 载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm ，长1～10m，内装吸附剂