微生物检测习题及答案

土壤微生物有细菌、放线菌、真菌、藻类、病毒、原生动物。土壤微生物的数量和分布主要受到营养物的种类和浓度、含水量、氧气分压、温度、pH 、抗菌因子等因子的影响（土壤类型、土层的深度、受季节和土壤中的其它生物的影响）1g土壤中大概有108个细菌,107个放线菌,106个真菌;含N量较高的中性土壤中细菌和放线菌较多;真菌在土壤表层分布较多，细菌和放线菌则相对可以分布更深一些。

淡水水质检测中如果发现细菌很多，可能出现水华：微囊藻、鱼腥藻、囊丝藻；水变成蓝色或蓝绿色。海洋赤潮：单细胞鞭毛藻、沟藻、硅藻（真核单细胞）；细菌主要有芽孢杆菌类。

海洋微生物的特点：嗜盐性：2.4～4.0％；嗜压性：耐100大气压；嗜冷性：0～4℃能生长，最适生长温度为18℃左右；耐贫瘠、广食性；增殖很慢，代时很长（几十～100多小时）；趋化性与附着生长；多形性；发光性。空气微生物的特点：具有各种孢子和孢囊及其他处于非营养生长状态；具有抗性结构；致病性强（细菌、病毒、衣原体、支原体）；可变性（种类和浓度的变化大）；可控性（环境小，消毒措施效果好）；一般不繁殖，生存能力强（耐干燥）。

植物与微生物的关系？有益的关系如何？有害的关系如何?

植物对微生物——根圈效应；植物茎叶果实上——附生微生物保护作用；共生——菌根、根瘤菌共生固氮、弗兰克氏菌；真菌细菌病毒病害ti质粒

在正常情况下，人和动物的体表及与外界相通的体腔(如口腔、呼吸道、消化道和泌尿生殖道等)中都有特定种类和数量的微生物生活，它们以动物皮肤或腺体的分泌物、粘液、脱落的细胞及食物消化物或残渣等作为养料，人和动物同时还为微生物提供了具有适宜温度、水分、O2和pH等条件的良好生态环境，并对微生物的生活提供了适应的保护作用。通常将这些微生物称为人或动物的正常微生物区系或正常菌群。

正常菌群的作用：1拮抗作用：正常菌群在生物体的特定部位生长后，对其他的菌群有生物拮抗的作用。产生这种生物屏障的往往是一些厌氧菌。正常菌群通过紧密与黏膜上皮细胞结出来占领位置，由于在这些部位数量很大，在营养竞争中处于优势，并通过自身代谢来改变环境的pH值或释放抗生素，来抑制外来菌的生长。2营养作用：正常菌群的存在影响着生物体的物质代谢与转化。如蛋白质、碳水化合物、脂肪及维生素的合成，胆汁的代谢、胆固醇的代谢及激素转化都有正常菌群的参与。3免疫作用：正常菌群的抗原刺激可以使宿主产生免疫，从而减少了本身的危害。已有实验表明，某些诱发的自身免疫过程具有抑癌作用。

瘤胃微生物主要为细菌、原生动物（主要包括鞭毛虫、纤毛虫）、真菌、细菌噬菌体，但在消化中以厌氧性纤毛虫和细菌为主。瘤胃细菌可分为消化纤维素的细菌、消化半纤维素的细菌、分解淀粉的细菌、利用糖的细菌、利用酸的细菌、分解蛋白质的细菌、产氨的细菌、产甲烷的细菌、分解脂肪的细菌、分解果胶的细菌及分解尿素的细菌。作用：瘤胃内多种细菌之间和细菌与纤毛虫之间，彼此存在着相互共生，共同作用，组成微生物区系。在各类微生物协同作用下，完成饲料营养物的分解和利用。1纤维素的分解与合成：反刍动物饲料中的纤维素，主要依靠瘤胃内的细菌、纤毛虫和真菌来分解，在瘤胃微生物协同作用下，纤维素逐段被分解，最终产生挥发性脂肪酸，被反刍动物所吸收利用。瘤胃微生物能合成维生素B族和维生素K等，所以日粮中缺乏此类维生素并不

和影响反刍动物的健康。2糖的分解和合成：瘤胃微生物分解淀粉、葡萄糖和其他糖类，产生低级脂肪酸、CO

2

甲烷等，同时利用饲料分解产生的单糖和双糖合成糖元，储存于微生物体内，待微生物随食糜进入小肠被消化后，这种糖元又可被利用作为反刍动物体的葡萄糖来源之一。3蛋白质的分解与合成：瘤胃微生物能利用简单的含氮物合成微生物蛋白质，细菌能够用氨基酸或尿素作为氮源来合成氨基酸，因此，在反刍动物中可以用尿素或铵盐来代替日粮中一部分蛋白质饲料。没有细菌的这一转化过程，氨和尿素对反刍动物将是无用的。瘤胃中合成的细菌蛋白在小肠中被消化从而成为反刍动物所需氨基酸的主要来源。瘤胃中的细菌、纤毛虫等能将饲料中的蛋白质分解为氨基酸、氨和酸类等，因此将饲料蛋白经甲醛处理后，使其不易被瘤胃微生物分解，待排入小肠后再被消化，可提高饲料蛋白的利用率。5微生物对瘤胃内容物pH值的调节瘤胃菌群的代谢产物可调节瘤胃内容物的酸碱度，对防止产生酸中毒以及部分地缓解精料代替草料而引起的pH值下降导致纤维消化下降有重要意义。6瘤胃微生物的解毒功能：瘤胃纤毛虫和细菌具有降低硝酸盐、亚硝酸盐的致毒作用。

采样的随机处理或统计如何设计？如何保证样品均一性？

分析结果能否说明问题,关键在于样品的采集和处理1样品的代表性和采样误差的控制土壤的不均一性是造成采样误差的最主要原因土壤是固、气、液三相组成的分散体系,各种外来物进入土壤后流动、迁移、混合较难,所以采集的样品往往具有局限性一般情况下,采样误差要比分析误差高得多为保证样品的代表性,必须采取以下两点技术措施控制采样误差:1)采样前要进行现场勘察和有关资料的收集,根据土壤类型、肥力等级和地形等因素将研究范围划分为若干个采样单元,每个采样单元的土壤要尽可能均匀一致2)要保证有足够多的采样点,使之能充分代表采样单元的土壤特性采样点的多少,取决于研究范围的大小,研究对象的复杂程度和试验研究所要求的精密度等因素采样点设置过少,所采样品的偶然性增加,缺乏足够的代表性;采样点设置过多,则增大了采样的工作量,浪费了人力、物力和财力

（保存

土壤采样：包括采样的布设和取样技术。采剖面土样，应在剖面观察记载结束后进行。在采样前应先将剖面整修、清理，削去最表层的浮土，然后再按层次自上而下逐层从中心典型部位取样。若要分析土壤中金属含量，则应避免使用金属器具取样。在田间采样时，由于土壤本身存在着空间分布的不均一性，因此应以地块为单位，多点取样，再混合成一个混合样品，这样才能更好地代表取样区域的土壤性状。采样方法一般有以下几种。对角线采样法：适宜于污水灌溉地块，在对角线各等分中央点采样。梅花形采样法：适宜于面积不大、地形平坦、土壤均匀的地块。棋盘式采样法：适宜于中等面积、地势平坦、地形基本完整、土壤不太均匀的地块。蛇形采样法：适应于面积较小地形不太平坦、土壤不够均匀须取采样点较多的地块。如果田块不大、形状规则，可用对角线法和梅花形法；如田块形状不规则，地形有变化,或面积较大,可用棋盘式法或蛇形法。力求采样点的情况能代表主要的土壤类型及其污染程度；同时要采集未受污染的土壤作为对照。

重复，随机排列，局部控制，有对照，随机设计？

植物根际细菌的分离筛选；植物内生细菌的分离筛选（纯化；繁殖；保存）

选取附着在植物根上的土壤；系列稀释涂布平板培养法；选择性培养基；选择性培养条件

先用自来水将植物表面清洗干净，然后用无菌水清洗一遍；接着用75％乙醇浸泡消毒5 min，无菌水冲洗后再浸入2.5％次氯酸钠溶液中消毒5 min，无菌水冲洗数遍；将表面消毒的叶片置于研钵内研磨至匀浆，取0.1 ml匀浆液涂布于LB平板，28℃培养3 d，挑取单菌落在LB平板上划线纯化后保存。

植物病原微生物的分离筛选

植物病原细菌一般用稀释分离方法。因为在病组织中病原细菌数量巨大，分离材料中所带的杂菌又大多是细菌，用稀释培养的方法就可以使病原细菌与杂菌分开，形成分散的菌落，从而较容易获得植物病原细菌的纯培养。

真菌用组织分离和稀释分离法。切取小块病健交界处的病组织，经表面消毒和灭菌水洗过以后，移在琼胶培养基平板上培养，待真菌长出后挑取菌丝进行纯化，得到植物病原真菌的分离方法。囊菌和半知菌等大多数真菌用常规组织分离法分离；适用于分离细菌和酵母,一般很少用于分离真菌，但大量产孢的病原真菌和霉菌也用•将孢子悬浮液与熔化并冷却到45℃的培养基混匀，倒平板，但难于掌握温度，也可平板涂布。

水体微生物的富集分离

必要时可采用适当的方法进行浓缩，如：离心法，自然沉降法，过滤法等；沉降剂；使用过滤法浓缩时，可根据目的采用各种过滤基质，如脱脂棉，

空气采集器

微孔滤膜吸附技术;多价金属氢氧化物或盐沉淀;玻璃粉或不溶多聚电解质吸附;透吸袋浸泡于高分子吸水剂中脱水;超速离心，冷冻，超滤，电泳；撞击式；沉降式；过滤式；静电吸附式；旋风式；离心撞击式

比较重要的有：Andersen采样器；Bourdillon采样器；各种改良式Andersen采样器等

Andersen采样器（六级空气生物采样器）

撞击式；高约20cm，直径约11cm，重量约5Kg；6节带有400个小孔的筛版，下面各设一层平板培养基；流量1 in3 /min.,(约28L/min.)；可将1-8.2um的粒子中的绝大部分采集，但是总会有逃逸。

大容量Andersen分级采样器采用经典的Andersen 多级冲击式分级系统，多级分离，通过内置的冲击器有效分离和采集不同粒径的的粒子。AH-600 有五级冲击器和大流量采样泵组成，颗粒物分离粒径从11μm 到7.0 μm。分离纯化技术，如何保证做到菌落纯？

有时加入50-100 U的放线菌酮或制霉菌素抑制真菌或放线菌的生长；在培养基上反复划线纯化，分离单菌落。重复3次以上。

稀有放线菌的诱导捕获法

由于稀有放线菌在自然界中存在的数量比链霉菌少得多，所以常规的土壤分离方法往往较难分离得到它们。有目的的分离稀有放线菌的工作可以采取如下一些措施：一是采用选择性培养基，抑制链霉菌的生长；二是将土样作适当的处理，杀死土样中敏感的微生物。由此创造出让不敏感的稀有放线菌生长出来的条件；三是从某些具有特殊微生物区系的土样、水样、动植物残体或活体中分离其特殊的放线菌。

利用目的菌的某些特征，在土壤等样品中加入一些特殊物质，诱导目标菌大量富集，提高选择性分离效果。

1.多相分类技术：（Polyphasic taxonomy）Colwell1970年提出，指利用微生物多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育的信息，综合起来研究微生物分类和系统进化的过程。

表型信息来源于各种生物功能分子的效应，包括蛋白质及其功能，不同的化学标识，以及大量其它的表达特征；遗传信息来源于细菌中的遗传物质核酸，包括DNA和RNA。

2.观察微生物形态注意方面：在观察细菌的个体形态时，应注意有些细菌在生活周期中有多形性变化，要注意观察其幼龄菌体（６～８小时）、生长对数期的菌体及老龄菌体的形态变化及革兰氏染色反应的变化。