分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究(精)

随着科学技术的发展和社会的进步,过氧化氢酶的用途越来越广泛。目前纺织业应用强氧化剂过氧化氢漂白脱色,而多余的过氧化氢可用过氧化氢酶去掉,以符合于环保的要求。医学上也可用低浓度过氧化氢清除坏死组织,然后再用过氧化氢酶反应多余的过氧化氢。葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶复合制剂还可用于防治动物肠道、胃部由细菌引起的一些疾病。因此过氧化氢酶的酶活力测定对于研究和应用此酶显得十分重要。
分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究
李仕飞1刘世同2周建平2罗天雄2
(1泉州金桥食品有限公司,福建泉州362011;2襄樊学院化学与生物科学系,湖北襄樊441053
摘要:H
2O
2
在240n m波长下有强烈吸收峰,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A
240
随反应时间增加
而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。本试验是在其他反应条件相同的情况下,从相同质量的3种不同植物(小麦叶片、豌豆、黄瓜中提取的3种过氧化氢酶(A、B、C与同体积同浓度的过氧化氢作用,根据其反应速度的不同得出A、B、C的活性大小,从而得出了在质量相同的情况下从黄瓜中可以提取更多的过氧化氢酶。
K ey words:H ydrogen pero x i de;cata lase;spectrophoto me try
过氧化氢酶大量分布于动植物细胞内[1],同时需氧微生物代谢过程也会有大量的过氧化氢酶产生,其产生和存在是一动态过程。动物肝脏细胞代谢产生的过氧化氢量多,此酶大量积蓄,所以从动物肝脏提取过氧化氢酶是制备过氧化氢酶的一个重要途径;细菌和霉菌在发酵过程中也会有大量的过氧化氢酶释放于胞外,积蓄于发酵液中,通过生化制备方法得到纯度较高的过氧化氢酶可应用于工业生产和医学界。
240
to reduce a l ong with the reacti on ti m e1The var i a tio n rate was ab l e t o deter m i ne the ca talase vi gor1W ith the same co nditio ns,the cata lases extracted fro m3kinds of diff e rent p l ants(wheat leaf b l ade,pea,cu2 cu mberwere treated with sa m e density hy drogen pe roxi de1R esults s ho wed tha t cucumber had m ore density of cata l ase t han t he ot her t wo1
关键词:双氧水;过氧化氢酶;分光光度法
中图分类号S56512文献标识码A文章编号1007-7731(200702-72-02
M ea sura tion of Ca ta la se V igor in P lants w ith Spectrophoto m etry
L i Sh ife i1L i u Sh iton g2Zhou J i a nping2L uo T ianxiong2(1Quan Zhou Ji n Q i ao F oo d L i m ited Co mpany,Fu jian, 362011;2Depa rt m en t of Che m istry and B i osc ience,X iangfan Un i versity,H ube,i441053
1材料与方法
111试验仪器紫外分光光度计;离心机;研钵;容量瓶;吸管;试管;恒温水浴锅。
112试剂012mol/L p H718磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯吡咯烷酮;011mol/L H2O2(用011mol/L高锰酸钾标定。
113方法以从小麦叶片中提取的过氧化氢酶活性的测定为例(从豌豆、黄瓜中提取和测定过氯化氢酶活性参照小麦叶片的测定。
A
240=A
S0
-
A
s1
+A
s2
2
A S0加入煮死酶液的对照管吸光值;
A S1,A S2样品管吸光值;
V
T
粗酶提取液总体积(m l;
V
1ห้องสมุดไป่ตู้
测定用粗酶液体积(m l;
F W样品鲜重(g;
11311酶液提取称取新鲜小麦叶片015g置研钵中,加入2-3m l4e下预冷的p H=710磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25m l容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5e冰箱中静置10m i n,取上清液在4000r p m下离心15m i n,上清液即为过氧化氢酶粗提液。5e下保存备
11313结果计算以1m i n内A240减少011的酶量为1个酶活单位(U。
过氧化氢酶(A活性(U/g F W/m i n=
$A
240
@V
T
011@V
1
@t@F W
72安徽农学通报,Anhu iAgri1Sci1Bu ll12007,13(2:72-73
作者简介:李仕飞(1976-,男,泉州永春人,助理工程师,从事生物化学与分子生物学研究。收稿日期:2006-12-10
Ab str ac t:The hydrogen peroxide had the i ntense absorpti on at240wave length1The cata lase cou l d deco m pose t he hydrogen peroxi de,causi ng t he l u m i nosity(A
用[2]。
11312活力测定取10m l试管3支(S
1
、S
2
、S
3
,其中
(S
1
、S
2
为样品测定管,(S
3
为空白管,按表1顺序加入试剂,重复3次。
表1小麦叶片活力测定的试剂
S1S2S3粗酶液(m l012012012(加热p H718磷酸(m l115115115
蒸馏水(m l110110110
25e预热后,逐管加入013m l011mo l/L的H2O2,每加完一管立即记时,并迅速倒入石英比色杯中,240n m下测定吸光度,每隔1m i n读数1次,共测4m i n,待3支管全部测定完后,按下式计算酶活性[3-5]。