电位滴定法测定五味子提取物中总有机酸含量分析

电位滴定法测定五味子提取物中总有机酸含量分析
发表时间：2012-11-07T09:27:25.340Z 来源：《中外健康文摘》2012年第25期供稿作者：李晓峰
[导读] 五味子为多年生落叶藤本，属木兰科，五味子特指植物的干燥成熟果实，习称山花椒、秤砣子、药五味子等。

李晓峰 (江苏省常熟市中医院江苏常熟 215500)
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）25-0007-02
【摘要】目的利用电位滴定方法测定五味子提取物中总有机酸的含量及分析。

方法用水将五味子提取物溶解，经001×1阳离子交换树脂，将盐还原为酸。

以琥珀酸为参照，用电位滴定法测定五味子提取物中总有机酸的含量。

结果以琥珀酸来计，五味子提取物中总有机酸测定的精密度 RSD 0．82％，稳定性 RSD 0．85％，重复性试验 RSD 1．69％，平均回收率为101．75％、RSD 2．34％。

结论本研究所建立的电位滴定方法适合于五味子提取物中总有机酸的含量测定。

【关键词】中药标准五味子化学有机酸分析滴定分析法直流电位质量控制
五味子为多年生落叶藤本，属木兰科，五味子特指植物的干燥成熟果实，习称山花椒、秤砣子、药五味子等。

具有辛、甘、酸、苦、咸五种味道，其性温，能对人体五脏–心、肝、脾、肺及肾发挥平衡作用。

主要功效为益气生津，收敛固涩，补肾宁心。

用于久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、久嗽虚喘、梦遗滑精、遗尿尿频、短气脉虚、内热口渴[1]。

五味子含多种有效成分如有机酸、挥发油、木脂素、多糖，木脂素类成分可治疗肝炎，滋补肝肾[2]，苹果酸、琥珀酸等多种有机酸具有祛痰、镇咳作用[3]。

木脂素类成分检测方法较多，但有机酸测定的文献报道较少。

本实验将采用直接电位滴定的方法测定五味子提取物中总有机酸的含量，避免酸碱滴定法中有机酸提取液颜色较深对滴定终点的干扰。

1 仪器和试药
a.主要仪器 H19025 便携式PH 测试计，EMS-10型磁力搅拌器，碱式滴定管；AL 204 型电子分析天平，XS 105型电子分析天平(瑞士Mettler公司)；L550低速自动平衡离心机(金凤实验室仪器有限公司)。

b.试药及试剂分析纯(琥珀酸)；五味子提取物；NaOH、HCL、：C6H4(COOH)(COOK) 、酚酞、超纯水等。

2 方法和结果
a 溶液的制备
a.1对照品溶液的制备：准确称取琥珀酸76.12mg，置100 mL量瓶中，用水定容，摇匀，备用。

a.2供试品溶液的制备：取五味子提取物约0.3 g，精密称定，置离心管中，加20mL水溶解，离心(3000 rpm)5min，上清液过001×1阳离子交换树脂(经过酸→水→碱→水→酸→水预处理，水洗至中性)；再按上述方法提取两次，依次上样，流出液及水洗脱液定容至100 mL 容量瓶中，摇匀，即得。

b 电位滴定的可行性研究
b.1琥珀酸对照品突跃范围试验：准确称取琥珀酸0.6526g，置100mL量瓶中，用水定容，摇匀，精密吸取20mL，按照《中国药典》(2010年版)附录VⅢA电位滴定法进行滴定，并用空白校正。

采用ORIGIN软件绘制一阶导数曲线(△E／△V)一V。

一阶导数曲线最高点对应的体积即为滴定终点体积。

结果见图1。

由图可见，滴定终点突越明显，实际消耗0.1020 mol／L NaOH滴定液为25.6mL。

由公式(V碱=2C碱V碱／C碱)计算，理论消耗NaOH 滴定液为21.4mL，相对误差为1-84％，二者相吻合。

反应公式：HOOCH2C—CH2COOH + 2NaOH→NaOOCH2C—CH2C00Na+2H2O。

b.2五味子提取物突跃范围试验：精密称取五味子提取物约0.3g，制备供试品溶液，准确吸取供试品溶液25mL按前述测定方法测定，五味子提取物的一阶导数曲线见图2。

由图可见，五昧子提取物供试品滴定至NaOH消耗22.2 mL(E=151.5mV)时存在一个非常明显的滴定突跃，一阶导数曲线两边分布较为对称。

b.3精密度试验：精密吸取琥珀酸对照品溶液10mL6份，加水20mL，用0.0096mol／L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，RSD为0.82％(n一6)，表明该方法精密度良好。

b.4稳定性试验：精密称取五味子提取物(批号20081001)0.8171g，按“a.2”项下制备供试品溶液，定容至250 mL，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h精密吸取25mL 按前述测定方法测定，计算RSD为0.85％(n=6)，表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

b.5 重复性试验：精密称取五味子提取物(批号20081001)约0.3g，按“a.2”项下制备供试品溶液，平行6份。

分别精密吸取供试品溶液
25mL，用0.0097 mol／L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，计算RSD为1.69％(n=6)，表明该方法重复性良好。

b.6 加样回收试验：精密称取已知总有机酸含量的五味子提取物约0.15g，共6份，分别加入251.1mg／100mL的琥珀酸对照品溶液10mL，按“a.2”项下制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液25mL，用0.0097mol／L的氢氧化钠滴定液进行电位滴定，计算回收率，结果回收率分别为99.79％，103.63％，102.78％，104.87％，98.67％，100.75％，平均加样回收率为101.75％，RSD 2.36％。

结果表明该方法回收试验良好。

c.样品含量测定精密称取6个批次的五味子提取物各约0.3 g，按“a.2”项下制备供试品溶液。

分别精密吸取供试品溶液25 mL，测定，结果见表1。

表1 样品总有机酸含量测定结果
3 讨论
a.是利用电位的突越来确定滴定终点，由于中药提取液颜色较深,会导致酸碱滴定指示剂难以选择而酸碱电位滴定法克服了以上的障碍，同时也解决了不明显的滴定终点指示问题。

因此，利用酸碱电位滴定法，本实验对五味子提取物中总有机酸的含量测定进行了可行性研究。

b.本项研究用五味子提取物作为注射用的中间产品，工艺为：五味子药材经水提醇沉、NaOH调节pH、冻干等程序所得。

其中在用NaOH调节pH时五味子中的有机酸与碱反应生成盐，所以测定提取物中有机酸时首先需要将盐还原成酸。

c.本实验从该五味子提取物中分离得到以下几种物质：对羟基苯甲酸、琥珀酸、肉桂酸等有机酸，其中以琥珀酸比例最大，达1％以上，所以本实验利用琥珀酸为参照，测定五味子提取物中总有机酸的含量，而吴建兵等人[4]选择柠檬酸为参照测定五味子中总有机酸。

d.本实验用琥珀酸参照对001*1、D001、D152三种型号阳离子交换树脂进行了回收率考察，结果显示三种树脂的回收率均良好，分别为98.69％、100.86％、102.01％，但考虑成本和预处理时间原因，选择001×1型阳离子交换树脂。

e.本研究通过正交实验考察了树脂用量和供试品上样量，结果显示树脂用量为10mL、供试品取样量为0.3g时颜色干扰较小，实验结果最佳。

参考文献
[1] Ch.P 中国药典.中华人民共和国药典一部[S].北京：化学工业出版社.2010；61—62.
[2] 范美华.五味子的研究新进展[J].西北药学杂志，2007，22(5)：281.
[3] 秦国伟，陈业高.五味子科植物化学及药理研究概况。

见香港科技大学生物技术研究所，中药开发与研究综述。

北京：科技出版社，2000.280.
[4] 吴建兵，王誉洁，赵铁，等.电位滴定法测定五味子中总游离有机酸口].中草药，2007，38(2)：281—282.
[5] 李牧,高鹏,徐良梅,等.五味子提取物对断奶仔猪血液生化指标和抗氧化能力的影响[J].中国饲料,2007,20:17-19.。