食用菌实验-菌种分离

实验四菌种分离——组织分离法

•一实验目的

•学习并掌握菌种的组织分离技术。

•二实验原理

•食用菌的子实体是由菌丝扭结、组织化形成的，其菌丝从子实体上分离下来以后，给予适当的条件，又可以萌发生长，形成菌丝体。由子实体分离得到的菌丝体，其菌丝细胞为双核的，经过出菇试验,可以直接作母种使用。

•组织分离是常用的食用菌菌种分离技术，也是常用的菌种复壮方法。

•不同食用菌的最佳组织分离部位不尽相同，双孢蘑菇、香菇、平菇以菌盖与菌柄相连结处的组织较好，金针菇以菌柄上部为佳，猴头以心部菌肉为好，木耳、银耳以耳基为好。有菌幕的菇类，可以在菌幕破裂之前取材，其菌幕包被的内部菌丝组织是无菌的，可以取其菌柄、菌盖或菌褶进行培养。

•三、实验用具与材料

•超净工作台，酒精灯，尖头镊，消毒用酒精棉球，解剖刀，接种针，斜面培养基，香菇、平菇子实体,培养箱等。

•四、实验步骤

• 1.准备斜面培养基。

• 2.选择种菇，选取已长到特征明显，生长健壮，朵形好,接近子实体成熟期的子实体

• 3.切取组织接种

•撕裂法：蘑菇、香菇、平菇等子实体较大的菌类，用菌肉组织进行分离时，可以采用撕裂法暴露内部菌肉。左手持试管，用小指夹住菌盖的一部分，右手持接种针尖头，在酒精灯火焰上灼烧灭菌，右手小指与环指夹住菌盖的另一部分，从菌柄中央撕开菌盖，露出菌肉，右手小指夹住试管的棉塞拔出棉塞，试管口在酒精灯火焰上烧灼灭菌。在香菇、平菇子实体的菌盖与菌柄相连结处取材，尖头插到菌肉中，切割菌肉，注意不要碰触子实体的任何一个外向面，以免沾上杂菌或杂菌孢子，将菌肉用力钳断，取黄豆粒大小的菌肉块，放到试管的斜面培养基上，烧灼管口与棉塞，塞好棉塞，烧灼镊子，操作完毕。

•4．培养

•将接好组织块的试管放入25℃的恒温培养箱中培养，3天后可见组织块产生绒毛状菌丝，10天至15天菌丝即可长满斜面。再转一次试管即成母种。

•培养过程中要经常检查有无杂菌污染，出现污染的及时捡出。