《食品安全快速检测技术》教学课件—04兽药残留快速检测
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其中2,3 是免疫学方法建立的关键和技术难点
二、免疫学方法快速检测兽药残留
检测方法的确立包括以下： （1）胶体金免疫色谱实验测定法 （2）酶联免疫吸附测定法 （3）放射免疫及荧光免疫测定法 （4）生物感应器
项目二兽药残留检测卡和试剂盒
一、盐酸克伦特罗检测卡
1 适用范围
此方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中盐 酸克伦特罗含量的检测。
一、微生物法快速检测兽药残留 微生物法检测动物性食品中抗菌药物残留的原理是根据抗菌药物
对微生物生理功能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中药物残 留。
一般选用不同的菌株和培养基，并在培养基中加入某些成分，利 用抗菌药物对不同菌株敏感性的差异，以及影响药物活性的特定成分和 培养条件来推断受检药物的化学结构。 优点：单个试剂盒分析样品数量大，操作便捷，灵敏度高以及对调价要 求低，适用于养殖场和食品加工车间使用。
指给畜禽使用兽药 或添加剂后，药物 以其原形及其代谢 产物的形式蓄积或 储存在动物的细胞 、组织、器官或可 食性产品（如蛋、 奶）中。
兽药的分类
• 抗生素、磺胺药类、呋喃药类、抗球 虫药、激素药类和驱虫药
兽药残留带来的食品安全问题
Text in here
多宝鱼
瘦肉精
项目一 兽药残留快速检测原理
2 检测原理
本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技 术进行样品中克伦特罗分子的快速定性检测。
用BSA(牛血清白蛋白)偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒 结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦 特罗抗体和BSA抗体分别包被在检测区（T）和质控区（C） 。当样本加到加样孔后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗 体结合，剩余的克伦特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗 体结合。因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶 体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现 紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没 有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而 在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有克 伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
1、设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml ┅┅微量移液器：单道 20l～200l、 100l～1000l
试剂： ┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯) ┅┅浓盐酸 ┅┅蒸馏水
5 操作步骤
（1）从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1小时内应尽 快地使用；
（2）将肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工 机中用一字刀粉碎，秤取5g粉碎样本置于试管中， 加入5毫升检测试剂A。盖上盖，摇匀，浸泡约10分 钟；
（3）用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2分钟（ 3000rpm），用移液枪移取250μl上清液转移入2ml 检测管中，加入极少量检测试剂B，调整pH值至7 左右；
8 注意事项
（1）肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果 ，取样时请剔除肉眼可见的脂肪；
（2）盐酸克伦特罗检测卡应在常温下使 用，不用对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉 直接进行检测；
二、克伦特罗ELISA试剂盒检测 1 适用范围
此方法应用于猪肉、内脏、猪尿 液及饲料中盐酸克伦特罗含量的检测 。
二、使用单位需自备的设备及试剂
1、平皿法 2、生化检测法
二、免疫学方法快速检测兽药残留
基于抗原抗体特异性反应的检测原理。
分为：
1.放射免疫分析 2.荧光免疫分析 3.酶免疫分析 4.发光免疫分析 5.胶体金免疫分析 6.仪器免疫分析 7.无标记免疫分析
二、免疫学方法快速检测兽药残留 内容主要包括：
1.检测对象的选择 2.检测对象结构分析和免疫半抗原的合成 3.人工结合抗原的制备与鉴定 4.抗体的制备 5.检测方法的确立与方法评价
三、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块 2、标准品×6瓶： (1ml/瓶）
0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb,0.9ppb, 2.7ppb,8.1ppb 3、高浓度标准品：100ppb （1ml/瓶） 4、克伦特罗酶标物…………………………………………6ml 5、克伦特罗抗试剂………………………………………… 9ml 6、底物液 A液 ……………………………………… 6ml 7、底物液 B液 ………………………………………6ml 8、终 止 液 …………………………………………6ml 9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml 10、克伦特罗浓缩样品稀释液 (2×)…………………………40ml
模块三 兽药残留快速检测
学习目标Hale Waihona Puke Baidu
了解兽药残留所 带来的食品安全 问题、获得关于 兽药残留的有关 标准依据和检测 试剂制造商信息 等；
理解常见的兽 药残留快速检 测的基本原理；
掌握常见的兽 药残留快速检 测基本方法和 基本操作技能 。
兽药和兽药残留的定义
兽药
指用于预防和治 疗畜禽疾病的药 物。
兽药残留
• 无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正 确的操作过程或检测卡已变质损坏，应重新测试1 次，如仍为此现象，应更换检测卡或联系供应厂家 ；
• 阳性结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以上，阴性 结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以下。
7 灵敏度
灵敏度（阈值）：根据每种检测 卡控制浓度而定，盐酸克伦特罗有 3ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、15ng/ml 、20ng/ml、30ng/ml和50ng/ml等控 制规格，判断前请向供应厂家咨询控 制阈值。
3 主要仪器
食品加工机，低速离心机，电子秤（精 度0.1克），250ul单道微量移液器（移液枪 ）。
4 材料与试剂
克伦特罗胶体金法检测卡，检测试剂A（ 3%三氯乙酸溶液），检测试剂B（0.1N氢氧 化钠溶液），pH试纸（1-14），剪刀， 10ml试管（或离心管），一次性塑料吸管、 一次性手套等。
（4）将盐酸克伦特罗检测卡片置于干净平坦的台面上 ，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加 样孔内；
（5）等待紫红色条带的出现，测试结果应在5分钟时 读取。
6 结果判定
• 阳性（+）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带， 在测试区（T）内无紫红色条带出现；
• 阴性（-）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区 （T）内，另一条位于质控区（C）内；
二、免疫学方法快速检测兽药残留
检测方法的确立包括以下： （1）胶体金免疫色谱实验测定法 （2）酶联免疫吸附测定法 （3）放射免疫及荧光免疫测定法 （4）生物感应器
项目二兽药残留检测卡和试剂盒
一、盐酸克伦特罗检测卡
1 适用范围
此方法应用于猪肉、内脏和猪尿液中盐 酸克伦特罗含量的检测。
一、微生物法快速检测兽药残留 微生物法检测动物性食品中抗菌药物残留的原理是根据抗菌药物
对微生物生理功能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中药物残 留。
一般选用不同的菌株和培养基，并在培养基中加入某些成分，利 用抗菌药物对不同菌株敏感性的差异，以及影响药物活性的特定成分和 培养条件来推断受检药物的化学结构。 优点：单个试剂盒分析样品数量大，操作便捷，灵敏度高以及对调价要 求低，适用于养殖场和食品加工车间使用。
指给畜禽使用兽药 或添加剂后，药物 以其原形及其代谢 产物的形式蓄积或 储存在动物的细胞 、组织、器官或可 食性产品（如蛋、 奶）中。
兽药的分类
• 抗生素、磺胺药类、呋喃药类、抗球 虫药、激素药类和驱虫药
兽药残留带来的食品安全问题
Text in here
多宝鱼
瘦肉精
项目一 兽药残留快速检测原理
2 检测原理
本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技 术进行样品中克伦特罗分子的快速定性检测。
用BSA(牛血清白蛋白)偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒 结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦 特罗抗体和BSA抗体分别包被在检测区（T）和质控区（C） 。当样本加到加样孔后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗 体结合，剩余的克伦特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗 体结合。因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶 体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现 紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没 有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而 在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有克 伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
1、设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml ┅┅微量移液器：单道 20l～200l、 100l～1000l
试剂： ┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯) ┅┅浓盐酸 ┅┅蒸馏水
5 操作步骤
（1）从原包装铝箔袋中取出检测卡，在1小时内应尽 快地使用；
（2）将肉或内脏样本用剪刀剪成碎条后放入食品加工 机中用一字刀粉碎，秤取5g粉碎样本置于试管中， 加入5毫升检测试剂A。盖上盖，摇匀，浸泡约10分 钟；
（3）用离心机离心装有浸泡液和样本的试管2分钟（ 3000rpm），用移液枪移取250μl上清液转移入2ml 检测管中，加入极少量检测试剂B，调整pH值至7 左右；
8 注意事项
（1）肉及内脏中脂肪会导致假阳性结果 ，取样时请剔除肉眼可见的脂肪；
（2）盐酸克伦特罗检测卡应在常温下使 用，不用对刚屠宰的猪肉或冷冻猪肉 直接进行检测；
二、克伦特罗ELISA试剂盒检测 1 适用范围
此方法应用于猪肉、内脏、猪尿 液及饲料中盐酸克伦特罗含量的检测 。
二、使用单位需自备的设备及试剂
1、平皿法 2、生化检测法
二、免疫学方法快速检测兽药残留
基于抗原抗体特异性反应的检测原理。
分为：
1.放射免疫分析 2.荧光免疫分析 3.酶免疫分析 4.发光免疫分析 5.胶体金免疫分析 6.仪器免疫分析 7.无标记免疫分析
二、免疫学方法快速检测兽药残留 内容主要包括：
1.检测对象的选择 2.检测对象结构分析和免疫半抗原的合成 3.人工结合抗原的制备与鉴定 4.抗体的制备 5.检测方法的确立与方法评价
三、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块 2、标准品×6瓶： (1ml/瓶）
0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb,0.9ppb, 2.7ppb,8.1ppb 3、高浓度标准品：100ppb （1ml/瓶） 4、克伦特罗酶标物…………………………………………6ml 5、克伦特罗抗试剂………………………………………… 9ml 6、底物液 A液 ……………………………………… 6ml 7、底物液 B液 ………………………………………6ml 8、终 止 液 …………………………………………6ml 9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml 10、克伦特罗浓缩样品稀释液 (2×)…………………………40ml
模块三 兽药残留快速检测
学习目标Hale Waihona Puke Baidu
了解兽药残留所 带来的食品安全 问题、获得关于 兽药残留的有关 标准依据和检测 试剂制造商信息 等；
理解常见的兽 药残留快速检 测的基本原理；
掌握常见的兽 药残留快速检 测基本方法和 基本操作技能 。
兽药和兽药残留的定义
兽药
指用于预防和治 疗畜禽疾病的药 物。
兽药残留
• 无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正 确的操作过程或检测卡已变质损坏，应重新测试1 次，如仍为此现象，应更换检测卡或联系供应厂家 ；
• 阳性结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以上，阴性 结果表明盐酸克伦特罗含量在阈值以下。
7 灵敏度
灵敏度（阈值）：根据每种检测 卡控制浓度而定，盐酸克伦特罗有 3ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、15ng/ml 、20ng/ml、30ng/ml和50ng/ml等控 制规格，判断前请向供应厂家咨询控 制阈值。
3 主要仪器
食品加工机，低速离心机，电子秤（精 度0.1克），250ul单道微量移液器（移液枪 ）。
4 材料与试剂
克伦特罗胶体金法检测卡，检测试剂A（ 3%三氯乙酸溶液），检测试剂B（0.1N氢氧 化钠溶液），pH试纸（1-14），剪刀， 10ml试管（或离心管），一次性塑料吸管、 一次性手套等。
（4）将盐酸克伦特罗检测卡片置于干净平坦的台面上 ，用塑料吸管垂直滴加3滴无空气样品处理液于加 样孔内；
（5）等待紫红色条带的出现，测试结果应在5分钟时 读取。
6 结果判定
• 阳性（+）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带， 在测试区（T）内无紫红色条带出现；
• 阴性（-）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区 （T）内，另一条位于质控区（C）内；