干细胞移植在糖尿病治疗上的应用
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肌 椎 脑 肉（对改善微循环/肌张力有明确疗效） 管 室
三：经脉管介入（疗效有待于进一步研究）
28
细胞治疗的回输时间
1. 炎性因子在梗死坏死组织的表达会显著上调, 参与组织的修复、促进梗死部位的新血管生 成与干细胞的归巢和转分化。 2. 强烈的炎症微环境影响MSCs的生存； 3. 结果表明,组织梗死后1周可能是较有利于 MSCs归巢和存活的合适的植入时间。
细胞治疗的原理
细胞治疗的作用机制可能是多方面的：
① MSC可产生细胞因子，或通过减少细胞凋亡起 到保护作用，对组织功能恢复发挥积极作用； 例如MSC分泌的特异性神经递质及神经营养因 子，如神经生长因子、脑源性神经生长因子等
神经营养因子，可使轴索实现跨胶质瘢痕屏障
的生长，促进脊髓损伤的修复；
21
细胞治疗的原理
病变广泛
多部位、多节段 病变更远端，小血管病变 并有微血管病变 手术难度大，效果相对差
外周动脉疾病患者的评估和治疗流程
外周动脉疾病 评估跛行的严重性 平板实验 MWD 和 PFWD SF-36 和 WIQ 问卷 跛行的治疗 监督下运动疗法
评估心血管危险因素
严重的腿部缺血
危险因素修正 停止吸烟 LDL-C <100 mg/dL 糖化血红蛋白 <7.0% 血压 <130/85 mmHg 血管紧张素转换酶抑制剂 抗血小板治疗 阿司匹林或氯比格雷
其中富含间质干细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、树
突状细胞和内皮细胞。还残留少量单个核细胞。对实
验室操作人员要求较高。
15
目前细胞治疗的适应症
脑外伤、脊髓外伤性瘫痪后遗症、 脑发育 不全、癫痫 、脑瘫等； 帕金森病 、老年痴呆症、肌营养不良症 、 多系统萎缩症 、肌萎缩侧索硬化症、脊髓 性肌萎缩、脑梗塞等；
动脉硬化概念
任何原因引起的动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小。
内皮细胞 内皮下层
内弹力板
内膜
(止血、血栓形成、血管张力、 通透性，动脉粥样硬化形成部位）
中膜（平滑肌构成,血管张力） 外膜（动脉供血和神经分布）
上皮细胞
动脉结构
病理性动脉硬化
动脉中层钙化：Monckeberg氏动脉硬化
病理所示在动脉中膜可见紫蓝色的钙化灶，而管 腔没有受累。X线可以发现中膜钙化结节，但中膜的病灶 并不影响血管腔。看不到明显临床表现，临床意义不大。
IL-2, IL-4等不同刺激引起的B细胞增殖，然而MSC并不会诱导B细胞 凋亡，反而会更好的维持B细胞的存活。
24
细胞治疗的原理
④ MSC可向内皮细胞分化；EPC可向心肌
梗死区归巢,参与构建毛细血管网并分泌血管
形成因子,并且本身可以分化为血管内皮细胞
和平滑肌细胞；具有多分化潜能的MSCs 可增
下肢动脉粥样硬化
间歇性跛行 坏疽
主要累及大型弹力型动脉（如主动脉）和中型弹力型动脉（冠状动脉和脑动脉最多）
顾东风, Jiang He, 吴锡桂, 等. 中国成人主要死亡原因及其危险因素. 中国慢性病预防与控制 2006; 14(3):149-154.
动脉粥样硬化的形成
损伤－反应学说认为
LDL是致动脉粥样硬化的基本因素 内皮损伤是关键因素 炎症反应贯穿始终
12
目前细胞治疗常用的细胞种类
二：单个核细胞（MNC） 从自体骨髓或异体脐血中获得，去除绝大部分红 细胞、血小板、巨核细胞和多核细胞，剩下的单 个核细胞。 其中富含胚胎样多能干细胞、造血干细胞、造 血各系祖细胞和血管内皮祖细胞。
13
目前细胞治疗常用的细胞种类
三：CD34+细胞 （HSC & EPC）
什么是干细胞?
“人体干细胞”是指来源于人体的 一群具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞。
成人 囊胚 胚胎
人体是由200多种不同组 织约1000万亿个细胞组成的有 机体,所有的细胞均起源于一 个干细胞——受精卵。
受精卵 全能细胞
内群细胞
原生殖细胞
干细胞技术最显著的作用： 能再造一种全新的、正常的甚至更年轻 的细胞、组织或器官。
从骨髓或脐血单个核细胞中经免疫磁珠法分
选的表达CD34糖蛋白的细胞。
其中造血干细胞和血管内皮祖细胞的纯度极
高，对实验室人员操作要求较高。
14
目前细胞治疗常用的细胞种类
四：间充质干细胞（MSC） 首先分离骨髓、脐带或脂肪组织的单个核细胞，经 过培养获得贴壁细胞群，呈梭形，体型较大，能分化
为多种细胞。
殖并增补EPC，MSC中的EPC可直接参与受损局 部血管的形成及损伤修复过程；
26
细胞治疗的原理
⑤干细胞移植后向病变部位组织渗透融 合，一些移植的干细胞在新的环境下分化 成功能细胞，替代损伤细胞，达到恢复组 织细胞功能的目的。
27
目前细胞治疗常用的回输方式
一：静脉回输（简单，损伤小） 二：局部注射
可能的副作用
其主要副作用为自限性低热。其它所观察到的副作用 均为1或2级并且具有自限性(包括头痛、头晕、恶心、皮 疹、搔痒、心动过速)，未有患者出现肺或肾部的症状、
任何迹象的感染、肝功能衰退或自身免疫失调反应。
潜在的生成肿瘤的风险性 椎管和脑室注射应考虑到脑压变化可能引起的副作用。
干细胞与糖尿病
发生下肢血管病变 35.36%
王爱红，许樟荣，等. 老年医学与保健 2005；11：147－149 王爱红，许樟荣，等. 第四军医大学学报 2005；26：1137－1139
下肢血管病变是 死亡及严重血管事件的风险因子
6880名老年人（>65）随访5年显示：PAD对死亡及严重血管事件的风险比是2.17， 高于严重心脑血管病史、性别、糖尿病、吸烟等其他风险因素
这些旁分泌信号分子可通过刺激血管 形成、防止移植基质降解和局部细胞凋亡, 并可促使内源性修复细胞迁移和归巢至受 损部位，协同改善组织重塑过程。
22
细胞治疗的原理
②此外受损的细胞的恢复生长还需要周围的一些
正常细胞成为生长信号的生产工厂供其使用，即
其必须招募一些保姆细胞，移植入的成纤维细胞
和内皮细胞即可完成这个任务，帮助内源性残存
17
目前细胞治疗的适应症
股骨头坏死 多发性硬化、 系统性硬皮病 、红斑狼疮、关 节炎（风湿和类风湿） 心肌梗塞
肝硬化、慢性胃炎
糖尿病
18
目前细胞治疗的适应症
肾内科：肾病、尿毒症
妇科：卵巢早衰 眼科：视神经炎 、视神经发育不良和萎缩、 视网膜色素变性 新生儿科：缺氧性脑病、新生儿发育不良、 脑瘫；
多能干细胞
干细胞的分类
胚胎干细胞（ESC） 经诱导的多能干细胞（iPS） 成体干细胞 (ASC)
造血干细胞（HSC） 内皮祖细胞 (EPC) 间充质干细胞（MSC） 神经干细胞 肝脏干细胞 脂肪干细胞 肌肉干细胞 ………
6
干细胞技术原理
体外人工培养干细胞，利用干细胞 构建细胞、组织、器官来修复组织 器官将是未来生物医学工程研究应 用的主要方向。
动脉粥样硬化引起的全身疾病表 现
脑动脉粥样硬化 颈动脉粥样硬化
急性脑血管病 急性脑血管病 血管性痴呆
主动脉粥样硬化
主动脉瘤 夹层动脉瘤
冠状动脉粥样硬化 冠状动脉粥样硬化是动脉 粥样硬化的最常见类型， 心绞痛 心肌梗死 是造成我国成年人死亡的
缺血性心肌病 头号杀手！
内脏动脉粥样硬化
顽固性高血压 肠系膜动脉血栓
下肢血管病变引起糖尿病变患者肢体远端与足 部缺血，最终可导致缺血坏疽
Peripheral Arterial Disease in People With Diabetes. 2003 Dec;26(12):3333-41.
糖尿病足临床表现
湿性坏疽
干性坏疽
混合坏疽
溃疡和感染
坏死和截肢
糖尿病下肢PAD的特点
组织细胞生长分化。
细胞治疗的原理
③ MSC具有免疫调节能力，MSC可以降低过度免
疫对机体的损坏：
A. 抑制DC的抗原递呈能力； B. 抑制NK细胞毒活性； C. 减轻中性粒细胞的呼吸爆发； D. 抑制抗原特异性T细胞增殖、CTL细胞毒性和促进调控性T细胞生成的 方式调控免疫反应的强度；
E. 能够将B细胞停滞在细胞周期的G0/G1期，抑制由抗免疫球蛋白抗体，
血管病变
右侧腓动脉全段闭塞
血管病变
左侧腘动脉全段闭塞
血管病变
右侧髂动脉自起 始部闭塞 左髂 动脉 管壁 虫蚀 状
我国糖尿病患者1/4发生下肢血管病变 老年人群高达1/3强
4675例2型糖尿病患者的足背动 脉、胫后动脉进行触诊检查， 以搏动明显减弱或消失为异常
发生下肢血管病变 24.5%
181例老年糖尿病 患者接受ABI检测
2型糖尿病自然病程与血管病变结局
β细胞功能
胰岛素抵抗
血糖
结 局
心脑血管疾病 肾病 视网膜病变
启 动
尚在代谢正常状态 基因？ 环境？
进 展
代谢综合征 胰岛素抵抗
中国膳食文化渊源流长
“五谷为养，五果为助， 五禽为益，五菜为充”
民以食为天 吃出来的血缘
仓禀实而知礼节 一饭定终身
— —《黄帝内经· 素问篇》
内皮功能 受损
LDL进入内 皮下被氧化
炎症反应增加
巨噬细胞 吞噬ox－LDL 形成泡沫细胞
平滑肌细胞 增殖和迁移 形成纤维帽
斑块破裂局部 血小板聚集 血栓形成
血管摄影
血管造影—诊断下肢PAD的金标准
计算机断层扫描血管成像（CTA） 磁共振血管显像。
彩超
核磁
血管造影
正常血管
糖尿病患者的下肢血管造影
29
目前细胞治疗常用的回输方式
干细胞治疗疾病根据方式方法的不同每个 疗程治疗1-4次，每次治疗间隔5-10天，原 则上每个疗程间隔的时间是3－6个月，如 疗效明显，可视病情连续做2－3个疗程。
（每次疗程治疗可应用不同干细胞组合）
30
干细胞注射之后的示踪研究
许多研究表明移植MSCs疗法的疗效有限,主 要的原因之一是它难以确保足够数量的细胞归 巢至病变组织； MSC回输体内的第一步就是向血管内皮粘附; MSC具有跨内皮细胞游出并进入组织的能力 实验室动物研究表明，回输后48小时内，肺毛 细血管网、肾毛细血管网是MSC粘附最多的部位， 肝、脾也有少量细胞发现。
小动脉硬化
病理所示中层增厚,血管变硬,管腔狭窄。小动脉弥
漫性增生病变，其发生与高血压和糖尿病有关。全身细 小动脉硬化使许多脏器缺血， 并发生结构和功能损害， 其中对心、肾、脑的影响最为显著。
动脉粥样硬化：
最常见、最重要的一种。主要病理学标志是泡沫细 胞的形成，损伤从内膜开始，血管壁中有富含脂质的斑 块形成，外观呈黄色粥样，可造成血管的狭窄，血管中 层和外膜也可受累。
干细胞治疗糖尿病的
原理与现状
干细胞技术是医学发展的未来
《Science》于1999年和2000年连续 两次将干细胞技术评为世界十大科学 成就之一。
干细胞技术是医学发展的未来
干细胞治疗的原理及应用
干细胞的分类 干细胞治疗原理 干细胞治疗常用细胞种类 干细胞治疗的适应症 干细胞治疗的常用治疗方案
各种组织细胞
复制
干细胞 前体细胞
目前细胞治疗常用的细胞来源
骨 脐
脐
髓：自体，异体 血：自体，异体
带： 异体
外周血：自体
脂
其
源自文库
肪： 自体
它： 胎脑、胎胰腺 等等
11
目前细胞治疗常用的细胞种类
一：骨髓总有核细胞（NC） 从自体骨髓获得，去除大部分红细胞， 剩下的全部具核细胞。 其中富含各系血细胞、造血干细胞、造 血各系祖细胞、血管内皮祖细胞和内皮细 胞。
Curt Diehm,et al. Circulation. 2009;120:2053-2061
下肢血管病变越严重 无事件生存率越低
结果显示ABI越低则无事件生存率越低
Curt Diehm,et al. Circulation. 2009;120:2053-2061
糖尿病足是糖尿病下肢血管病变的 终末阶段
19
必须经过多种检测确保细胞质量和安全
1.
细胞染色形态观察（瑞氏染色…） 2. 活细胞计数（台盼蓝法…） 3. 生长曲线的测定（MTT法…） 4. 克隆形成率（colony forming assay） 5. 细胞表型（CD34、CD45、CD90、CD105、CD44、CD146、Stro-1、 CD200、CD271、SH-2、 SH-3、 SH-4等）分析（流式细胞仪法、免 疫组织化学法） 6. 内毒素检测 7. 细胞凋亡检测 8. 细胞周期分析 9. 核型分析 10. 端粒酶活性检测 11. 相关常见检测基因（BETA-LAC） 12. 裸鼠致瘤性实验 13. 软琼脂侵袭实验 14. 体外分化检测实验：骨细胞方向、神经细胞方向、脂肪细胞方向.
三：经脉管介入（疗效有待于进一步研究）
28
细胞治疗的回输时间
1. 炎性因子在梗死坏死组织的表达会显著上调, 参与组织的修复、促进梗死部位的新血管生 成与干细胞的归巢和转分化。 2. 强烈的炎症微环境影响MSCs的生存； 3. 结果表明,组织梗死后1周可能是较有利于 MSCs归巢和存活的合适的植入时间。
细胞治疗的原理
细胞治疗的作用机制可能是多方面的：
① MSC可产生细胞因子，或通过减少细胞凋亡起 到保护作用，对组织功能恢复发挥积极作用； 例如MSC分泌的特异性神经递质及神经营养因 子，如神经生长因子、脑源性神经生长因子等
神经营养因子，可使轴索实现跨胶质瘢痕屏障
的生长，促进脊髓损伤的修复；
21
细胞治疗的原理
病变广泛
多部位、多节段 病变更远端，小血管病变 并有微血管病变 手术难度大，效果相对差
外周动脉疾病患者的评估和治疗流程
外周动脉疾病 评估跛行的严重性 平板实验 MWD 和 PFWD SF-36 和 WIQ 问卷 跛行的治疗 监督下运动疗法
评估心血管危险因素
严重的腿部缺血
危险因素修正 停止吸烟 LDL-C <100 mg/dL 糖化血红蛋白 <7.0% 血压 <130/85 mmHg 血管紧张素转换酶抑制剂 抗血小板治疗 阿司匹林或氯比格雷
其中富含间质干细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、树
突状细胞和内皮细胞。还残留少量单个核细胞。对实
验室操作人员要求较高。
15
目前细胞治疗的适应症
脑外伤、脊髓外伤性瘫痪后遗症、 脑发育 不全、癫痫 、脑瘫等； 帕金森病 、老年痴呆症、肌营养不良症 、 多系统萎缩症 、肌萎缩侧索硬化症、脊髓 性肌萎缩、脑梗塞等；
动脉硬化概念
任何原因引起的动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小。
内皮细胞 内皮下层
内弹力板
内膜
(止血、血栓形成、血管张力、 通透性，动脉粥样硬化形成部位）
中膜（平滑肌构成,血管张力） 外膜（动脉供血和神经分布）
上皮细胞
动脉结构
病理性动脉硬化
动脉中层钙化：Monckeberg氏动脉硬化
病理所示在动脉中膜可见紫蓝色的钙化灶，而管 腔没有受累。X线可以发现中膜钙化结节，但中膜的病灶 并不影响血管腔。看不到明显临床表现，临床意义不大。
IL-2, IL-4等不同刺激引起的B细胞增殖，然而MSC并不会诱导B细胞 凋亡，反而会更好的维持B细胞的存活。
24
细胞治疗的原理
④ MSC可向内皮细胞分化；EPC可向心肌
梗死区归巢,参与构建毛细血管网并分泌血管
形成因子,并且本身可以分化为血管内皮细胞
和平滑肌细胞；具有多分化潜能的MSCs 可增
下肢动脉粥样硬化
间歇性跛行 坏疽
主要累及大型弹力型动脉（如主动脉）和中型弹力型动脉（冠状动脉和脑动脉最多）
顾东风, Jiang He, 吴锡桂, 等. 中国成人主要死亡原因及其危险因素. 中国慢性病预防与控制 2006; 14(3):149-154.
动脉粥样硬化的形成
损伤－反应学说认为
LDL是致动脉粥样硬化的基本因素 内皮损伤是关键因素 炎症反应贯穿始终
12
目前细胞治疗常用的细胞种类
二：单个核细胞（MNC） 从自体骨髓或异体脐血中获得，去除绝大部分红 细胞、血小板、巨核细胞和多核细胞，剩下的单 个核细胞。 其中富含胚胎样多能干细胞、造血干细胞、造 血各系祖细胞和血管内皮祖细胞。
13
目前细胞治疗常用的细胞种类
三：CD34+细胞 （HSC & EPC）
什么是干细胞?
“人体干细胞”是指来源于人体的 一群具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞。
成人 囊胚 胚胎
人体是由200多种不同组 织约1000万亿个细胞组成的有 机体,所有的细胞均起源于一 个干细胞——受精卵。
受精卵 全能细胞
内群细胞
原生殖细胞
干细胞技术最显著的作用： 能再造一种全新的、正常的甚至更年轻 的细胞、组织或器官。
从骨髓或脐血单个核细胞中经免疫磁珠法分
选的表达CD34糖蛋白的细胞。
其中造血干细胞和血管内皮祖细胞的纯度极
高，对实验室人员操作要求较高。
14
目前细胞治疗常用的细胞种类
四：间充质干细胞（MSC） 首先分离骨髓、脐带或脂肪组织的单个核细胞，经 过培养获得贴壁细胞群，呈梭形，体型较大，能分化
为多种细胞。
殖并增补EPC，MSC中的EPC可直接参与受损局 部血管的形成及损伤修复过程；
26
细胞治疗的原理
⑤干细胞移植后向病变部位组织渗透融 合，一些移植的干细胞在新的环境下分化 成功能细胞，替代损伤细胞，达到恢复组 织细胞功能的目的。
27
目前细胞治疗常用的回输方式
一：静脉回输（简单，损伤小） 二：局部注射
可能的副作用
其主要副作用为自限性低热。其它所观察到的副作用 均为1或2级并且具有自限性(包括头痛、头晕、恶心、皮 疹、搔痒、心动过速)，未有患者出现肺或肾部的症状、
任何迹象的感染、肝功能衰退或自身免疫失调反应。
潜在的生成肿瘤的风险性 椎管和脑室注射应考虑到脑压变化可能引起的副作用。
干细胞与糖尿病
发生下肢血管病变 35.36%
王爱红，许樟荣，等. 老年医学与保健 2005；11：147－149 王爱红，许樟荣，等. 第四军医大学学报 2005；26：1137－1139
下肢血管病变是 死亡及严重血管事件的风险因子
6880名老年人（>65）随访5年显示：PAD对死亡及严重血管事件的风险比是2.17， 高于严重心脑血管病史、性别、糖尿病、吸烟等其他风险因素
这些旁分泌信号分子可通过刺激血管 形成、防止移植基质降解和局部细胞凋亡, 并可促使内源性修复细胞迁移和归巢至受 损部位，协同改善组织重塑过程。
22
细胞治疗的原理
②此外受损的细胞的恢复生长还需要周围的一些
正常细胞成为生长信号的生产工厂供其使用，即
其必须招募一些保姆细胞，移植入的成纤维细胞
和内皮细胞即可完成这个任务，帮助内源性残存
17
目前细胞治疗的适应症
股骨头坏死 多发性硬化、 系统性硬皮病 、红斑狼疮、关 节炎（风湿和类风湿） 心肌梗塞
肝硬化、慢性胃炎
糖尿病
18
目前细胞治疗的适应症
肾内科：肾病、尿毒症
妇科：卵巢早衰 眼科：视神经炎 、视神经发育不良和萎缩、 视网膜色素变性 新生儿科：缺氧性脑病、新生儿发育不良、 脑瘫；
多能干细胞
干细胞的分类
胚胎干细胞（ESC） 经诱导的多能干细胞（iPS） 成体干细胞 (ASC)
造血干细胞（HSC） 内皮祖细胞 (EPC) 间充质干细胞（MSC） 神经干细胞 肝脏干细胞 脂肪干细胞 肌肉干细胞 ………
6
干细胞技术原理
体外人工培养干细胞，利用干细胞 构建细胞、组织、器官来修复组织 器官将是未来生物医学工程研究应 用的主要方向。
动脉粥样硬化引起的全身疾病表 现
脑动脉粥样硬化 颈动脉粥样硬化
急性脑血管病 急性脑血管病 血管性痴呆
主动脉粥样硬化
主动脉瘤 夹层动脉瘤
冠状动脉粥样硬化 冠状动脉粥样硬化是动脉 粥样硬化的最常见类型， 心绞痛 心肌梗死 是造成我国成年人死亡的
缺血性心肌病 头号杀手！
内脏动脉粥样硬化
顽固性高血压 肠系膜动脉血栓
下肢血管病变引起糖尿病变患者肢体远端与足 部缺血，最终可导致缺血坏疽
Peripheral Arterial Disease in People With Diabetes. 2003 Dec;26(12):3333-41.
糖尿病足临床表现
湿性坏疽
干性坏疽
混合坏疽
溃疡和感染
坏死和截肢
糖尿病下肢PAD的特点
组织细胞生长分化。
细胞治疗的原理
③ MSC具有免疫调节能力，MSC可以降低过度免
疫对机体的损坏：
A. 抑制DC的抗原递呈能力； B. 抑制NK细胞毒活性； C. 减轻中性粒细胞的呼吸爆发； D. 抑制抗原特异性T细胞增殖、CTL细胞毒性和促进调控性T细胞生成的 方式调控免疫反应的强度；
E. 能够将B细胞停滞在细胞周期的G0/G1期，抑制由抗免疫球蛋白抗体，
血管病变
右侧腓动脉全段闭塞
血管病变
左侧腘动脉全段闭塞
血管病变
右侧髂动脉自起 始部闭塞 左髂 动脉 管壁 虫蚀 状
我国糖尿病患者1/4发生下肢血管病变 老年人群高达1/3强
4675例2型糖尿病患者的足背动 脉、胫后动脉进行触诊检查， 以搏动明显减弱或消失为异常
发生下肢血管病变 24.5%
181例老年糖尿病 患者接受ABI检测
2型糖尿病自然病程与血管病变结局
β细胞功能
胰岛素抵抗
血糖
结 局
心脑血管疾病 肾病 视网膜病变
启 动
尚在代谢正常状态 基因？ 环境？
进 展
代谢综合征 胰岛素抵抗
中国膳食文化渊源流长
“五谷为养，五果为助， 五禽为益，五菜为充”
民以食为天 吃出来的血缘
仓禀实而知礼节 一饭定终身
— —《黄帝内经· 素问篇》
内皮功能 受损
LDL进入内 皮下被氧化
炎症反应增加
巨噬细胞 吞噬ox－LDL 形成泡沫细胞
平滑肌细胞 增殖和迁移 形成纤维帽
斑块破裂局部 血小板聚集 血栓形成
血管摄影
血管造影—诊断下肢PAD的金标准
计算机断层扫描血管成像（CTA） 磁共振血管显像。
彩超
核磁
血管造影
正常血管
糖尿病患者的下肢血管造影
29
目前细胞治疗常用的回输方式
干细胞治疗疾病根据方式方法的不同每个 疗程治疗1-4次，每次治疗间隔5-10天，原 则上每个疗程间隔的时间是3－6个月，如 疗效明显，可视病情连续做2－3个疗程。
（每次疗程治疗可应用不同干细胞组合）
30
干细胞注射之后的示踪研究
许多研究表明移植MSCs疗法的疗效有限,主 要的原因之一是它难以确保足够数量的细胞归 巢至病变组织； MSC回输体内的第一步就是向血管内皮粘附; MSC具有跨内皮细胞游出并进入组织的能力 实验室动物研究表明，回输后48小时内，肺毛 细血管网、肾毛细血管网是MSC粘附最多的部位， 肝、脾也有少量细胞发现。
小动脉硬化
病理所示中层增厚,血管变硬,管腔狭窄。小动脉弥
漫性增生病变，其发生与高血压和糖尿病有关。全身细 小动脉硬化使许多脏器缺血， 并发生结构和功能损害， 其中对心、肾、脑的影响最为显著。
动脉粥样硬化：
最常见、最重要的一种。主要病理学标志是泡沫细 胞的形成，损伤从内膜开始，血管壁中有富含脂质的斑 块形成，外观呈黄色粥样，可造成血管的狭窄，血管中 层和外膜也可受累。
干细胞治疗糖尿病的
原理与现状
干细胞技术是医学发展的未来
《Science》于1999年和2000年连续 两次将干细胞技术评为世界十大科学 成就之一。
干细胞技术是医学发展的未来
干细胞治疗的原理及应用
干细胞的分类 干细胞治疗原理 干细胞治疗常用细胞种类 干细胞治疗的适应症 干细胞治疗的常用治疗方案
各种组织细胞
复制
干细胞 前体细胞
目前细胞治疗常用的细胞来源
骨 脐
脐
髓：自体，异体 血：自体，异体
带： 异体
外周血：自体
脂
其
源自文库
肪： 自体
它： 胎脑、胎胰腺 等等
11
目前细胞治疗常用的细胞种类
一：骨髓总有核细胞（NC） 从自体骨髓获得，去除大部分红细胞， 剩下的全部具核细胞。 其中富含各系血细胞、造血干细胞、造 血各系祖细胞、血管内皮祖细胞和内皮细 胞。
Curt Diehm,et al. Circulation. 2009;120:2053-2061
下肢血管病变越严重 无事件生存率越低
结果显示ABI越低则无事件生存率越低
Curt Diehm,et al. Circulation. 2009;120:2053-2061
糖尿病足是糖尿病下肢血管病变的 终末阶段
19
必须经过多种检测确保细胞质量和安全
1.
细胞染色形态观察（瑞氏染色…） 2. 活细胞计数（台盼蓝法…） 3. 生长曲线的测定（MTT法…） 4. 克隆形成率（colony forming assay） 5. 细胞表型（CD34、CD45、CD90、CD105、CD44、CD146、Stro-1、 CD200、CD271、SH-2、 SH-3、 SH-4等）分析（流式细胞仪法、免 疫组织化学法） 6. 内毒素检测 7. 细胞凋亡检测 8. 细胞周期分析 9. 核型分析 10. 端粒酶活性检测 11. 相关常见检测基因（BETA-LAC） 12. 裸鼠致瘤性实验 13. 软琼脂侵袭实验 14. 体外分化检测实验：骨细胞方向、神经细胞方向、脂肪细胞方向.