HPLC法快速测定银杏叶中银杏总黄酮醇苷含量

论著
HPLC法快速测定银杏叶中银杏总黄酮醇苷含量
韩立路* 孙兴力龙红萍周金彩
【摘要】目的建立银杏叶中特征性成分总黄酮醇苷的快速含量分析方法，比较不同的采集地总黄酮醇苷含量差异。

方法采用Alltima C18色谱柱（5μm，4.6×150mm）；流动相为甲醇-0.4％磷酸（50∶50）；检测波长为360nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。

结果Q在0.06~0.60μg范围内线性关系良好（r = 0.9998）；K在0.06~0.06μg范围内线性关系良好（r = 0.9998）；I在0.04~0.40μg范围内线性关系良好（r = 0.9999 ）。

平均加样回收率为97.6%（n=6），RSD为1.22%，银杏总黄酮醇苷的含量为0.4857%~0.8869% 。

结论不同产地银杏叶中总黄酮醇苷含量差异较大，该方法准确、简便，重现性好，为银杏叶质量评价提供简便快捷的方法。

【关键词】银杏叶；银杏总黄酮醇苷；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1671-8194（2009）13-0005-02
HPLC Rapid Determination of the Total Flavonol Glycoside in Ginkgo Biloba
HAN Li-lu*, SUN Xing-li, LONG Hong-ping, ZHOU Jin-cai
(Department of Pharmacy, Hunan Yongzhou Vocational Technical College, Yongzhou 425006, China)
[Abstract] Objective To establish the rapid analysis methods of characteristic components of fl avonol glycoside conten in Ginkgo biloba, comparing the difference content of total fl avonoid glycosides in Ginkgo biloba collecting from different places. Methods An Alltima C18 column (5μm, 4.6 × 150mm) was used the mobile phase of methanol -0.4% phosphoric acid (50∶50); with 1.0mL/min of fl ow rate, detecting wavelength was 360nm; and the column temperature was 30℃. Results The linear range of Q was good within the range of 0.06~0.60μg (r = 0.9998); and the of K was good with in the range of 0.06~0.06μg (r = 0.9998); and that of I was good with in the range of 0.04~0.40μg (r = 0.9999); The average recovery rate was 97.6% (n = 6), RSD 1.22%, the content of total Ginkgo fl avonol glycosides was 0.4857%~0.8869%. Conclusion The content of total fl avonol glycoside in Ginkgo biloba collecting from different places is different, the method is accurate, simple and good reproducibility for the quality evaluation of Ginkgo biloba to provide an easy and fast-track method.
[Key words]Ginkgo biloba; Total of Ginkgo fl avonol glycosides; Determination; High performance liquid chromatography
银杏叶为银杏科植物银杏（Ginkgo biloba L）的干燥绿叶。

银杏叶主要含黄酮和内酯类有效成分。

有研究结果表明[1,2]，银杏叶有效成分的含量与不同生长气候和不同季节的树龄紧密相关。

为了建立银杏叶中特征性成分银杏总黄酮醇苷的快速含量分析方法，用高效液相色谱法，比较不同产地银杏叶中银杏总黄酮醇苷的含量分布，从而为银杏叶的质量控制提供理论依据。

1 仪器与材料
1.1 仪器
美国 Waters Alliance 高效液相色谱仪；PDA99b 检测器；410示差检测器；Millipore MILLIQ-2 超纯水；制备仪；Resolve C18（8mm×100mm）径向加压色谱柱。

1.2 材料
槲皮素（Q）、山柰素（K）、异鼠李素（I）标准品由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 银杏叶样品
于2007年9月分别采自湖南衡山、广西桂林、湖南永州、贵州正安2~10年生银杏树上的银杏叶样品。

2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
填充剂：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-0.4％磷酸（50∶50）；检测波长：360nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

2.2 对照品溶液的配制
分别精密称取Q、K、I对照品适量，加甲醇溶解配制成每1mL分别含0.1、0.08、0.04mg的混合溶液，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取滤液，作为对照品溶液。

2.3 样品制备
银杏总黄酮样品制备：样品处理采用酸水解法[2]。

即取银杏叶1g，精密称定，加70%甲醇溶液40mL/次，每次称重。

回流提取3次，每次60min，合并提取液，放冷加70% 甲醇至3次总重量，过滤。

精密量取续滤液40mL，加浓盐酸8mL，加热回流30min，迅速冷却，用甲醇定量转入50mL 容量瓶并稀释至刻度，用0.4μm 的滤膜过滤，作为总黄酮醇苷供试品溶液。

2.4 方法可行性考察
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件进样，记录色谱图，对照品、供试品色谱图见图1。

由图1可见，Q、K、I色谱峰分离良好（R＞1.5）。

2.5 线性关系
精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μL，按上述色谱条件分别湖南省永州职业技术学院药学系（425100）
湖南省教育厅科研资助项目（编号：07D084）*通讯作者：E-mail：yongzhouhanlilu@
进样测定峰面积，以峰面积（Y ）为纵坐标、进样量（X ）（μg ）为横坐标绘制标准曲线，得到对照品3组分的3条直线，其线性范围和相关系数为Q ：0.15~0.45μg ，r =0.9998；K ：0.12~0.45μg ，r =0.9998；I ：0.09~0.40μg ，r =0.9999。

2.6 精密度和回收率试验
吸取上述对照品溶液，依色谱条件进行分析，重复进样5 次，每次10μL ，测得Q 、K 、I 峰面积RSD 分别为1.2%、0.9%、0.7%。

称取加入一定量芦丁的银杏叶样品，按上述方法处理，计算芦丁的回收率为97.6%（n=6），RSD 为1.22%，表明该方法水解完全。

2.7 供试品含量测定[3,4]
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL ，按上述色谱条件进样测定，外标法计算含量，分别计算Q 、K 、I 的含量，银杏总黄酮醇苷含量=（Q 含量+K 含量+I 含量）×2.51，结果见表1。

3 讨 论3.1 提取方法选择
在提取方法的考察试验中，分别考察了超声与加热回流提取，提取2、3、4次，提取30、60、90min 。

结果表明，回流提取3次，每次
图1 高效液相色谱A 对照品； B 供试品
A
B
t/min
t/min
60min 可将银杏总黄酮醇苷提取完全。

3.2 检测波长和洗脱条件的选择
参照《中国药典》（2005版）[4]，达到较满意分离效果。

表 1 样品测定结果
采集地点样品个数银杏总黄酮醇苷平均含量(%)(χ—
)
(χ—
±s )
贵州正安50.88690.8869±0.224※广西桂林50.77230.7723±0.196湖南衡山50.69060.6906±0.164湖南永州
5
0.4857
0.4857±0.139
※
与其他地区比较有显著性差异P ＜0.05
3.3 由测定结果可以看出
不同地区间的银杏总黄酮醇苷的含量存在较大的差异，贵州高原
区银杏叶中总黄酮醇苷含量明显高于其他地区，与其他地区比较，银杏总黄酮醇苷有显著差异（P ＜0.05）
，这说明该地区的生态环境和栽培技术有利于银杏总黄酮醇苷的积累。

结果表明：该方法操作简单、快速、准确，敏感度高，重现性好，可为银杏叶的质量控制提供理论依据。

参考文献
[1] 刘叔倩,郑俊华,王弘,等.不同气候区银杏叶中黄酮和萜内酯含量
的变化[J].中草药杂志,2000,31(6):424-426.
[2] 范可武,孟宪惠,徐文豪.银杏叶中黄酮含量的季节性变化[J].中草
药杂志,1997,28(4): 211-212.
[3] 张蕾,陈骁鹏,董小平.高效液相色谱法测定银杏叶胶囊含量[J].江
苏药学与临床研究杂志,2004,12(1):29-32.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:北京工业出
版社,2005:281-282.
前白蛋白检测在新生儿静脉营养中的价值
权雪莉
【摘要】目的 探讨前白蛋白检测在新生儿静脉营养治疗中的价值。

方法 对皖南医学院附属弋矶山医院儿科2006年5月至2008年5月中的48例新生儿静脉营养病例的临床资料和前白蛋白检测以及其他营养指标白蛋白、体质量进行回顾性分析。

结果 前白蛋白检测在新生儿静脉营养中，相比较与其他营养指标，能早期、快速地反映营养摄入处于正平衡或负平衡。

结论 在新生儿静脉营养中前白蛋白能敏感地判断新生儿营养状况的改变，可作为临床诊断和治疗的有效指标，为新生儿营养支持治疗方案提供依据。

【关键词】前白蛋白；静脉营养；新生儿
中图分类号：R459.3 文献标识码：A 文章编号：1671-8194（2009）12-0006-03
The Value of Prealbumin in Neonate Parenteral Nutrition
QUAN Xue-li
(Department of Neonatology, Yijishan Hospital of Wannan Medical College, Wuhu 241000, China )
[Abstract] Objective To investigate the value of prealbumin in neonate parenteral nutrition. Methods 48 cases neonate parenteral nutrition of our department in May 2006 to May 2008. prealbumin, albumin and weight were retrospeetively studied. Results Prealbumin can show the positive and negative balance of nutrition intake more early and rapidly compared with albumin and weight in the treatment of neonate parenteral nutrition. Conclusion Prealbumin can be used to evaluate nutritional status of parenteral nutrition neonate sensitively and is therefore assistant to clinical therapy of nutritional support.[Key words] Prealbumin; Parenteral nutrition; Neonate
安徽省芜湖市皖南医学院附属弋矶山医院儿科（241000）自从静脉营养应用于儿科领域以来，实践已证明它对抢救较长时间不能经口喂养的危重新生儿起到了很重要的作用，可使高危儿度过难关，减少病死率，提高生存质量。

因此，及时、准确地判定患儿的
营养状态是治疗的关键措施。

前白蛋白是一种快速转换蛋白，能随着。