血液相容性试验方案

HPA25树脂血液相溶性试验方案

1．试验目的

通过溶血试验，凝血试验以及血小板黏附试验考察HPA25树脂的血液相容性，并与用包膜后的HPA25的树脂比较，考察包膜对生物相容性的影响。

2. 试验依据

根据GB/T16886.4：2003/ISO 10993-4:2002：医疗器械生物学评价，第四部分：与血液相互作用试验选择，为基础进行试验。

3．试验项目

3.1溶血试验

3.1.1试验原理：检验样品、阴性对照品和阳性对照品与新鲜的稀释后兔子抗凝血接触，通过岛津紫外可见分光光度计来测定在545nm波长的吸光率。检验样品的溶血程度可根据下式计算：

溶血程度（%）= （X1-X3）／(X2-X3) ×100%

其中X1为试样的吸光度，X2为阳性对照品吸光度，X3为阴性对照品吸光度。在此项研究的条件下，检验样品的溶血程度不得大于5%，阴性对照品和阳性对照品如预期表现。

3.1.2具体试验步骤：

(1)检验样品准备：按照0.2g:5ml比率[检验样品的重量比0.9%的氯化钠溶液]

阴性对照品：0.9%的氯化钠溶液

阳性对照品：蒸馏水

(2)新鲜的稀释后兔子抗凝血的制备：

8ml新鲜的兔子血液加入0.4ml20g/L的草酸钾试剂，外加10ml 0.9%的氯化钠溶液。

(3)实验过程：

将第一份2根试管中各加入0.2g包膜HPA25，然后再分别加入5ml容量0.9%的氯化钠溶液，将第二份2根试管中各加入0.2g未包膜HPA25，然后再分别加入5ml容量0.9%的氯化钠溶液；将第三份2根试管中分别加入5.2ml氯化钠溶液，用于阴性对照品。第四份2根试管中分别加入5.2ml蒸馏水，用于阳性对照品。把所有试管放入37℃的水浴中30分钟。

30分钟后，在所有试管中加入2ml新鲜的稀释后兔子抗凝血后，慢慢将其混合，并再次将所有试管放入37℃的水浴中60分钟。将所有试管内的溶液分别移到离心管内。所有试管进行离心800r ×5分钟，将上清液测定在545nm 波长下的吸光度，计算平均值，根据公式计算溶血程度。

3.2 凝血试验

3.2.1凝血四项

凝血四项包括凝血酶原时间，凝血酶原时间、凝血酶原时间和凝血酶原时间。

样本：1.8 ml 静脉血+ 0.2 ml 109mmol/L 枸橼酸钠，颠倒5～8次充分混匀，分别缓慢加入0.2g包膜及未包膜HPA25树脂（各三份），轻轻混匀，4-8℃放置30分钟，3000r/min×10min分离血浆，冰浴下保存送检，未加树脂的血浆样品做对照。

3.2.2 动态凝血试验

（1）ACD全血制备

ACD保养液配方：每100ml中含枸橼酸钠1.33g，枸橼酸0.47g，葡萄糖3g。每10ml 全血中加入ACD保养液2.5ml，可保存3～4周。

(2) 动态凝血试验[1]：将0.25g树脂置于小三角瓶底部的中心，烧杯在37 ℃下恒温5 min 后，用针筒向树脂中心注入2.5mL ACD 全血，恒温5min后，向血液中注入2.5mL氯化钙(浓度为0.2 mol/ L) 水溶液，开始计时。摇晃小烧杯1 min，使氯化钙与血液混合均匀，盖好烧杯再恒温5 min，取出烧杯加入50mL 生理盐水，摇晃烧杯10 min，取上层清液，用分光光度计测定血水在540 nm 处的相对吸光度。以2.5 mL全血与50 mL 生理盐水混合液相对吸光度为100，作为参考值。每个试样品做3次平行试验，取平均值。材料的凝血指数(blood clotting index，BCI) 可由下；式求出：

式中I s 为血液与氯化钙的混合液与样品接触一定时间后，血液的相对吸光度；

I w 为血液与一定量的生理盐水混合后的相对吸光度。

参考文献：

1．TU X，HU X，LI X，et al. Synthetic studies on the compatible biomaterials [J]。J Functional Polymer (Chinese), 1995, 8 (2) : 209 - 212。

（3）试验结果记录

3.3血小板粘附

1.取静脉血4.5ml，置于含109mmol/L 枸橼酸钠溶液0.5 ml的试管中，混匀。

2.立即用微量加样器取抗凝血1.5ml放入已加0.15g包膜HPA25树脂（或未

包膜HPA25树脂，各3份）的球形玻璃瓶中，以3r/min速度转动球形玻璃瓶15min，未加树脂的抗凝血按相同方法做对照。

3.分别取接触树脂前后抗凝血各1ml，置2个大试管中，均加入

19ml109mmol/L 枸橼酸钠溶液，颠倒混匀三次后静置2小时，取上清夜送检（血小板计数）。

计算血小板黏附率：

接触前血小板数－接触后血小板数

血小板黏附率（%）=———————————————×100%

接触前血小板数

4．结果评价

4.1 溶血：溶血率应不大于5%，并与包膜后的HPA进行比较。

4.2 凝血：

4.2.1 动态凝血试验：阴性对照相比应无显著差异，并与包膜后的HPA进行比较；

4.2.2 凝血酶原时间：阴性对照相比应无显著差异，并与包膜后的HPA进行比较；

4.2 血小板：阴性对照相比应无显著差异，并与包膜后的HPA进行比较。