组蛋白修饰酶Gcn5和Hda1对高浓发酵中啤酒酵母絮凝性的影响
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ＤＯ １ Ｇ Ｎ ， Ｐ ３ ＨＤ 或 Ｈ Ｔ 。此 外 ， Ｉ ２ Ｔ ， Ｃ ５ Ｒ Ｄ ， Ａ１ Ｓ２ ＳＲ ，
不 ｈ。 基化 ， 在缺失 Ｄ ｔ蛋 白时 ， ｏｌ 端粒部位 的基因沉 默 马上 进 行 分 析 或 储 存 在 冰 中备 用 （ 超 过 １ ） 也 降低 。 另 外 ， 报 导 称 基 因沉 默 调节 蛋 白 Ｓｒ 絮凝 情 况根据 搅 拌后 絮凝 物溶人 酵母 悬 浮液 中 的 有 ｉ ２ 吸光率计算 ， 絮凝程度根据下面的公式计算 ： 和 Ｓｒ ｉ ３的移 位是 Ｄ Ｔ 缺失 的结 果 。 Ｏ １
絮 凝 。 在 此 菌 株 中 ， Ｏ Ａ Ｓ 分 Ｓｐ ， ｗ ３ Ｃ ＭＰ Ｓ 组 ｐ ｌ Ｓ ｄ 室 温 下 ， 体 在 含 ２ ％麦 芽 糖 的培 养基 中发 菌 ０ 酵 ， 发 酵产 物 ４ｍＬ 为 Ｐ Ｒ的模 板 。Ｒ Ａ样 品 取 作 Ｃ Ｎ
Ｎ Ｎ 取 ０ｇ Ｎ ｓ 或 Ｓｔ的缺 失导 致 酵母 的絮 凝发 生在 麦芽 糖发 酵 用 不 含 Ｒ Ａ酶 的 Ｄ Ａ酶 处 理 ， ５ｎ 用 Ｄ ａｅ ｅ１
构建的 ， 一个非 絮凝菌种 。菌种 １２ 是 ９ 包含一个 尾部的赖氨酸残基去乙酰化也有类似的作用。本 单拷 贝 ＭＡ ４基 因启 动 子 区 ， Ｌ 只在 缺 少 Ｃ ＯＭＰ Ｓ 研 究想 要 确证 是 否 ＨＤ ，Ｐ ３ ＳＲ ＡＳ Ａ１Ｒ Ｄ 或 Ｉ２的缺失 也 时絮凝 。菌种 ９ Ｒ是一个可发酵麦芽糖 ， ９ 同时可 会影 响菌种 １２ ９ 的絮凝特性 以及菌种 Ｙ ５ 利用 ５ａ 以产生絮凝 的菌种。使用 Ｐ Ｒ方法从 菌种 Ｙ ５ 麦 芽糖 的能力 。 Ｃ ５ａ 和菌种 １２ ９ 中分别 敲除 ＳＲ ，Ｉ ３ ＳＲ ， Ａ １ Ｉ ２ ＳＲ ，Ｉ４ Ｈ Ｔ ，
德圆径 页贝 隆 ＾ 司 中国总代理 、
颐 贝隆 电子 科 技
基 因沉 默 。另一 个组 蛋 白乙酰 转 移酶 Ｇ ｎ ， 一 进行微好 氧发酵 。发酵培养基密度 由密度计测 ｅ５ 是
个三聚体的亚基 ， 该复合物包括 ＳｔＡ ａ Ｇ ｎ 乙 定 ， ｐ ｄ— ｃ５ — 表示为与蔗糖 比重百分 比相应的柏拉图单位 。 好 氧条件 下 ， 菌种接 人 Ｙ Ｄ培养基 中 ， ３ Ｐ 于 ０ 酰 转移 酶 （Ａ Ａ） Ａ Ａ和 Ｓ Ｉ／Ａ Ｓ ＳＧ ，Ｄ ＬＫＳ Ｌ Ａ。 目前 已
其发酵高浓度麦芽糖 的能力 。高浓发酵时Ｈ Ａ ６℃ ２ ｎ三 个 阶段 。 Ｐ Ｒ产 物 用 １ 缓 冲 液 稀 ＤＣ ８ ｍｉ Ｃ 倍
中 的 Ｈｄ ｌ Ｈ Ｔ中 的 Ｇ ｎ 有 调 节 Ｆ Ｏ基 因 表 释 ， １ ａ和 Ａ ｃ５ Ｌ 于 ％的琼脂 糖凝 胶上 进行 电泳 分析 。
『 达 ， 迟酵母絮凝 的作用 。缺失 Ｈ Ｔ中的 Ｇ ｎ 延 Ａ ｃ５ 也可以改善高浓度麦芽糖 的利用。 ・ 组 蛋 白去 乙酰 转 移 酶 Ｈ ａ ，Ｒｐ ３和 Ｓｉ ｄｌ ｄ ｒ ２对 材料与方法Ｉ
・ 酵 母菌 种
高浓 发酵 中酵 母 絮凝及 发酵 情 况的 影响 与 由 Ｃ ＭＰ Ｓ 调 控 的组 蛋 白 Ｈ 赖 氨酸 ４的 Ｏ ＡＳ ３ 甲基 化会 导 致端 粒 基 因沉 默相 似 ，由啤酒 酵母 中
菌 种 Ｙ ５ 包 含 一 个 单 拷 贝 ＭＡ ｌ 因启 动 ５ａ Ｌ基
子 区 ， 基 于 原 养 型 酿酒 酵 母 Ｙ５ 是 ５系列 Ｊ ２ １９ ＨＤ Ｃ ａ ， ｐ ３ Ｓｒ 引起 的组 蛋 白 Ｈ 或 Ｈ４ Ｔ ０４ Ａｓ Ｈｄ ｌＲ ｄ 或 ｉ ２ ３
本研究中， 在高浓发酵条件下 ， 采用三株不 同
酶对 酵母 絮凝 和麦 芽糖 利用 能 （ ＝ ０ ｘ Ａ ０ （ ％） １０ ［ ６ ０ 实验 ） Ａ ０ （ － ６０ 样
・ 半定 量 Ｒ — ＣＲ ＴＰ
的可发酵麦芽糖 的酵母菌株 ， 对上述组蛋 白修饰 品 ）／６０ 实验 ） ］ ０（ Ａ 。 析， 菌株 １２ ９ 被用作研究高浓发酵条件下酵母 的
Ｎ ，０ Ｍ顺序和倒序引物（ 表略） 同 ， 开始 的 ５ 左 右 。菌 株 ９Ｒ是 在 培养 基 中含低 浓 处理过的 Ｒ Ａ １ ０ｈ ９
度 糖 的情 况 下发 生 酵 母 絮凝 的 ， 因此 被 用来 研 究 包含 有 反转 录酶 的 Ｆｄｌ ａ ｉ于 ４ ℃扩增 ３ 分 ｉｅｉ ｇｍｘ ２ Ｔ ０ 产 Ｄ Ａ进 行 线 性 Ｐ Ｒ扩 增 。线 性 Ｐ Ｒ Ｃ Ｃ １％葡萄糖或 ５ 酒精引起的絮凝 。菌株 Ｙ ５ 用 钟 ， 生 的 ｃ Ｎ ０ ％ ５ａ 来 研究 麦 芽糖 发 酵 ，Ｏ Ａ Ｓ的缺 失 明显 改善 了 共 ２ 个 循 环 ， 个 循 环包 含 ９ ％ ３ ｓ５ ｏ ０ 和 Ｃ ＭＰ Ｓ ０ 每 ５ ０ ，５Ｃ３ｓ
经 证 明许 多 基 因是 由这些 复 合 体 进 行 转 录调 控 预 培 养 ７ 。取 ６ Ｌ 培 养 物 ， 种 于 含 ４ｍＬ ２ｈ ０ 该 接 的。值 得 注 意 的是据 报 导 Ｇ Ｎ Ｃ ５的缺 失可 以增 强 培养基的试管中， 于室温下进行微好氧发酵。
Ｕ３ Ｒ 感受基 因在染色体端粒末 端的基 因沉默作 ・ 絮 凝试 验 在 发 酵 的起 止 阶 段 ， 试 管 中部 取 样 。样 品 在 用 。Ｄ ｔ 蛋 白， ｏ ｌ 其组蛋 白Ｈ 赖氨酸 ７ 发生 了甲 ３ ９
乏
１ ．７ １０
Ｘ
鲍 贝摩
西 １８０６ 。０ ； 。。 １ ４ １；４ ０ ｏ ６３ Ｆ 。 ３ － ６ 机 。４
Ｅｍ ｉｉｇ ｂ ． ｉ ｏ －ａ ：ｎ＠ｅ ｒｃ ｎ ｃｒ ｌｉ ｏ ｈａ ｎ
薪 巴 杀 监 仪 型 氏 菌 测
（ 匕 ）有 限 公 司 ｔ －京 ・ ３ ６ ・
不 ｈ。 基化 ， 在缺失 Ｄ ｔ蛋 白时 ， ｏｌ 端粒部位 的基因沉 默 马上 进 行 分 析 或 储 存 在 冰 中备 用 （ 超 过 １ ） 也 降低 。 另 外 ， 报 导 称 基 因沉 默 调节 蛋 白 Ｓｒ 絮凝 情 况根据 搅 拌后 絮凝 物溶人 酵母 悬 浮液 中 的 有 ｉ ２ 吸光率计算 ， 絮凝程度根据下面的公式计算 ： 和 Ｓｒ ｉ ３的移 位是 Ｄ Ｔ 缺失 的结 果 。 Ｏ １
絮 凝 。 在 此 菌 株 中 ， Ｏ Ａ Ｓ 分 Ｓｐ ， ｗ ３ Ｃ ＭＰ Ｓ 组 ｐ ｌ Ｓ ｄ 室 温 下 ， 体 在 含 ２ ％麦 芽 糖 的培 养基 中发 菌 ０ 酵 ， 发 酵产 物 ４ｍＬ 为 Ｐ Ｒ的模 板 。Ｒ Ａ样 品 取 作 Ｃ Ｎ
Ｎ Ｎ 取 ０ｇ Ｎ ｓ 或 Ｓｔ的缺 失导 致 酵母 的絮 凝发 生在 麦芽 糖发 酵 用 不 含 Ｒ Ａ酶 的 Ｄ Ａ酶 处 理 ， ５ｎ 用 Ｄ ａｅ ｅ１
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其发酵高浓度麦芽糖 的能力 。高浓发酵时Ｈ Ａ ６℃ ２ ｎ三 个 阶段 。 Ｐ Ｒ产 物 用 １ 缓 冲 液 稀 ＤＣ ８ ｍｉ Ｃ 倍
中 的 Ｈｄ ｌ Ｈ Ｔ中 的 Ｇ ｎ 有 调 节 Ｆ Ｏ基 因 表 释 ， １ ａ和 Ａ ｃ５ Ｌ 于 ％的琼脂 糖凝 胶上 进行 电泳 分析 。
『 达 ， 迟酵母絮凝 的作用 。缺失 Ｈ Ｔ中的 Ｇ ｎ 延 Ａ ｃ５ 也可以改善高浓度麦芽糖 的利用。 ・ 组 蛋 白去 乙酰 转 移 酶 Ｈ ａ ，Ｒｐ ３和 Ｓｉ ｄｌ ｄ ｒ ２对 材料与方法Ｉ
・ 酵 母菌 种
高浓 发酵 中酵 母 絮凝及 发酵 情 况的 影响 与 由 Ｃ ＭＰ Ｓ 调 控 的组 蛋 白 Ｈ 赖 氨酸 ４的 Ｏ ＡＳ ３ 甲基 化会 导 致端 粒 基 因沉 默相 似 ，由啤酒 酵母 中
菌 种 Ｙ ５ 包 含 一 个 单 拷 贝 ＭＡ ｌ 因启 动 ５ａ Ｌ基
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的可发酵麦芽糖 的酵母菌株 ， 对上述组蛋 白修饰 品 ）／６０ 实验 ） ］ ０（ Ａ 。 析， 菌株 １２ ９ 被用作研究高浓发酵条件下酵母 的
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经 证 明许 多 基 因是 由这些 复 合 体 进 行 转 录调 控 预 培 养 ７ 。取 ６ Ｌ 培 养 物 ， 种 于 含 ４ｍＬ ２ｈ ０ 该 接 的。值 得 注 意 的是据 报 导 Ｇ Ｎ Ｃ ５的缺 失可 以增 强 培养基的试管中， 于室温下进行微好氧发酵。
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