波生坦对大鼠颈动脉再狭窄的影响及其病理机制

波生坦对大鼠颈动脉再狭窄的影响及其

病理机制

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

作者：吴桂平张彦红付鑫李颖曲晓婷王涤非

【摘要】目的探讨波生坦对大鼠颈动脉再狭窄的影响及其病理机制。方法选取Wistar大鼠65只，随机分为假手术组、损伤组及波生坦组。损伤组及波生坦组模拟临床经皮冠状动脉形成术（PTCA）过程行左颈总动脉球囊损伤致内膜剥落，波生坦组给予波生坦100 mg·kg-1·d-1灌胃（术前1 d直至处死）。观测术后不同时相点的内膜，中膜动态增殖情况，并采用免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和抗增殖细胞核抗原（PCNA）。结果损伤组术后28 d新生内膜增生达峰值，波生坦组术后14 d内膜增生达峰值。术后14、28、45 d波生坦组内膜面积较损伤组明显减小（P0.001）。术后14 d的波生坦组内膜PCNA的阳性率与损伤组比较显著降低（P0.01）。术后14 d αactin的阳性表达率较损伤组明显增加（P0.01）。结论波生坦组可通过抑制血管内膜过度增殖及减少血管平滑肌细胞的增殖，转型和迁移而有效预防PTCA术后再狭窄的发

生。

【关键词】波生坦；再狭窄；动脉成形术；血管平滑肌细胞；大鼠【Abstract】Objective To investigate the effect and pathogenetic study of Bosentan on carotid artery restenosis in rat. Methods 65 Wistar rats were divided randomly into 3 groups: sham, injury and Bosentan groups. The balloon catheter injury was performed on left common carotid artery of rat by imitating the process of percutaneous transcoronary angioplasty (PTCA) in injury and Bosentan groups. 100 mg·kg-1·d-1 Bosentan was administrated intragastricly to rats of Bosentan group (from 1 day to being killed). The process of neointimal and media hyperplasia was observed and αactin and proliferation cell nuclear antigen (PCNA) expressions were determined. Results Arterial neointima hyperplasia reached summit at 28 days in injury group and at 14 days in Bosentan group. Neointimal and media area of Bostentan at different time (14th ,28th ,45th day) were significantly decreased compared with injury group (P＜0.001). The positive rate of PCNA increased statistically in Bosentan group than that of injury group at 14th day (P＜0.01). The positive rat of αactin cell increased significantly in Bosentan group compared with injured group (P＜0.01) at 14th day. Conclusions Bosentan can effectively prevent artery restenosis by inhibiting neointimal hyperplasia and reducing

the proliferation, migration, transconformation of vascular smooth muscle cells.

【Key words】Bosentan; Restenosis; Angioplasty; Vascular smooth muscle cell; Rat

经皮冠状动脉介入治疗冠心病血管重建治疗的术后再狭窄发生率仍较高，从而影响了治疗效果，因而探寻再狭窄的防治成为当前冠心病防治研究的热点。再狭窄的形成是一个复杂的病理生理过程，其主要的机制为扩张动脉血管腔炎症反应，血管内皮损伤诱发的血管重构和血管平滑肌细胞的过度增殖与迁移〔1〕。内皮素（ET）是由内皮细胞合成，具有强大的缩血管和促进血管平滑肌细胞的作用。波生坦是一种非肽类非选择性内皮素受体阻断剂。关于波生坦对大鼠颈动脉再狭窄的影响的研究国内外尚无报道。本试验通过观察波生坦对大鼠颈动脉再狭窄的影响并研究其病理机制，为冠状动脉成形术术后再狭窄的防治提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康雄性Wistar大鼠65只，体重330～460 g，购自中国医科大学实验动物室。

1.2 实验试剂、药品与器材

①波生坦(商品名：全可利片）：购自爱克泰隆药品公司。②2F 经皮冠状动脉成形术（PTCA）球囊导管（1.5 mm×20 mm），购自Cordis 公司。③抗增殖细胞核抗原（PCNA）单抗（福建迈新）。④

抗α平滑肌肌动蛋白（αSMA）单抗（上海长岛生物公司）。⑤免疫组化SP试剂盒（福建迈新）。⑥伊文氏蓝。⑦DAB显色试剂盒（北京中科生物技术有限公司）。

1.3 分组、药物干预与模型制备

健康雄性Wistar大鼠65只，随机分为假手术组15只，损伤组25只，波生坦组25只，波生坦组大鼠自术前1天直至处死予波生坦100 mg·kg-1·d-1灌胃，假手术组和损伤组给予等量蒸馏水灌胃直至处死。参照Clowes〔2〕方法将损伤组与波生坦组实验大鼠禁食8 h 后，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，尾静脉注射肝素100 U/kg，沿中线切开颈部皮肤，在颈前三角区暴露左颈总动脉、颈内及颈外动脉，轻轻分离颈外动脉，结扎颈外动脉远段，用丝线暂时阻断颈总动脉近心端血流，自颈外动脉血管壁剪一“V”形小切口，置入导丝并插至近膈肌水平，沿导丝送入PTCA球囊导管至颈总动脉约3 cm，肝素盐水充盈球囊，予152 kPa压力扩张30 s，缓慢回抽球囊至颈动脉分叉处，重复3次剥脱内膜，结扎颈外动脉近段，查看颈总动脉及颈内动脉搏动良好后缝合皮下组织与皮肤。术后常规肌注青霉素40万U/d，共3 d，预防感染。假手术组仅暴露分离左颈总，颈内，颈外动脉，随即缝合皮下组织及皮肤，喂食普通饲料，自由饮水。

1.4 取材

术后1、7、14、28、45 d分批取材，首先经尾静脉注射5%伊文氏蓝生理盐水标记无内膜覆盖血管。30 min后用4%多聚甲醛以13.3 kPa进行灌注固定，解剖并游离左右侧颈总动脉，切取左侧颈