紫外分光光度法同时测定厚朴酚与和厚朴酚的含量及活性研究
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收稿日期 :2004201212 接受日期 :2004202213 基金项目 :国家自然科学基金 (30260014) ;云南省中青年学术和 技术带头人后备人才培养基金 ( YP0024)
3 通讯作者 Tel :86287125033726 ; E2mail :ztding @ynu. edu. cn
2 样品处理方法
参照文献 5 对药品进行处理 。准确称取香砂平 胃散 8. 0600 g ,加入 25 mL 无水乙醇回流 115 h ,冷 却至室温过滤 ,沉淀用少量无水乙醇洗涤后再过滤 , 滤液合并蒸干 。残渣用 7 mL NaO H ( 1 mol/ L ) 溶 解 ,用 20 mL 石油醚萃取两次 。水层用 HCl 调 p H = 2～3 ,用 30 ,30 ,20 ,20 ,20 mL CHCl3 萃取 ,用蒸 馏水 20 mL 清洗 CHCl3 萃取液至中性 ,水层再用 20 mL CHCl3 萃取 ,合并 CHCl3 层用无水 Na2 SO4 干燥 后蒸干 。残渣用无水乙醇溶解定容至 25 mL ,再精 密吸取 110 mL 该液用 50 %乙醇定容为 25 mL ,滤 膜过滤后作为无色待测液 。
p H = 8. 93
313 稳定性研究及乙醇用量影响 厚朴酚及和厚朴酚标液各取 215 mL ,加入 p H
= 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 5. 0 mL ,定容至 25 mL ,放置 5 ,10 ,30 min ,1 h ,2 h 测定最大吸收峰 的吸光度 。结果显示放置时间超过 2 h 后 ,吸光度 略有下降 ,在 1 h 内 ,样品稳定 ,吸光度几乎不变 。 由于在标样及试样溶液中 ,用到了无水乙醇 ,为此考 察了乙醇用量的影响 。从测定结果看 ,加入乙醇会 增加吸光度 ,但增加的量很小 ,考虑到乙醇的挥发 性 ,故不加入更多的乙醇 ,以防止测定误差增大 。 314 标准曲线
UV spect rop hotomet ry at 289. 4 nm and 316. 4 nm. The scavenger activities were assayed at 517 nm by UV spect rop hotomet ry. This met hod can determine magnolol and honokiol for some t radi2 tional Chinese medicine simply and quickly ,and t heir f ree radical scavenger activities can be deter2 mined by DPPH·met hod. Key words magnolol ;honokiol ;spect rop hotomet ry ;determination ;f ree radial scavenger activity
( Depart ment of Chem ist ry , Y unnan U niversity , Kunming 650091 ,China)
Abstract In order to establish a UV spect rop hotomet ric met hod for simultaneous determination of magnolol and honokiol , and st udy t heir f ree radical scavenger activity preliminarily. In t he KH2 PO42NaO H buffer ( 0. 025 mol/ L ,p H = 8. 93) , magnolol and honokiol were determined by
取 5 mL 相 同 浓 度 不 同 p H 值 的 KH2 PO42 NaO H 缓冲液 ,加入厚朴酚或和厚朴酚标液 215 mL 定容为 25 mL ,测定最大吸收峰 。结果显示在 p H 值 8108～9144 范围内 ,厚朴酚已经离解 ,其最大吸 收峰红移到 31614 nm ,而和厚朴酚还未离解 ,其最 大吸收峰还在 28914 nm 处 ,故我们选择 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 ,其吸收峰如图 1 。
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A289. 4 = 4221. 429C + 0. 103 ( R = 1. 000 , RSD = 0. 00362) 。和厚朴酚的标准曲线为 A316. 4 = 666. 071C
+ 0. 07589 ( R = 0. 998 , RSD = 0. 00155) , A289. 4 = 6939. 286C + 0. 106 ( R = 1. 000 , RSD = 0. 00536) 。 厚朴酚及和厚朴 酚 在 1. 00 ×10 - 5 ～ 3. 00 ×10 - 4 mol/ L (2. 66～79. 8μg/ mL) 范围内呈线性关系 。 315 样品测定方法和可行性
NaO H、N H4Cl2N H3·H2O 缓冲液 。分别取厚朴酚标 液 2. 5 mL ,加入上述缓冲液各 510 mL ,用蒸馏水定 容至 25 mL ,摇匀 ,以蒸馏水为参比进行 UV 测定 。 由于 KH2 PO42NaO H 体系的干扰小 ,且样品峰型好 , 故实验选择该缓冲体系 。其它条件不变 ,改变缓冲 液用量 ,结果表明用量在 410～8. 0 mL 间吸光度稳 定且峰形良好 ,故选择合适体积为 510 mL 。 312 测定 p H 值的选择
3 方法与结果
311 缓冲体系及用量选择 配 制 不 同 p H 值 的 Na2B4O72HCl 、KH2 PO42
图 1 厚朴酚 (1) 与和厚朴酚 (2) 的吸收曲线 (p H = 8. 93) Fig. 1 The absorption curve of magnolol and honokiol at
2004 Vol. 16 No. 5
天然产物研究与开发 NA TURAL PRODUCT RESEARCH AND DEV ELOPM EN T
Fra Baidu bibliotek
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紫外分光光度法同时测 定厚朴酚与和厚朴酚的 含量及活性研究
保志娟 杨雪琼 丁中涛 3 曹秋娥 邹永明
光度法同时分别测定厚朴酚及和厚朴酚尚未见报 道。
在中性溶液中 ,厚朴酚与和厚朴酚的紫外吸收 基本一致 。本文利用它们羟基质子离解性 (p Ka) 的 差异[7 ] ,在一定浓度的样品液中加入缓冲溶液 ,使 厚朴酚离解而和厚朴酚不离解 ,从而使厚朴酚的最 大吸收峰发生红移 ,这样二者的最大吸收峰不再重 合 。在含有多种吸光物质的溶液中 ,由于各吸光物 质对某一波长的单色光均有吸收作用 ,如果各吸光 物质的吸光质点之间相互不发生化学反应 ,当某一 波长的单色光通过这样一种含多种吸光物质的溶液 时 ,溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之 和 。据此 ,可以进行多组分的分析测定 。对于二元 组分混合物的分别测定 ,可解联立方程式[8 ] 。由此
1 仪器与试剂
UV2PC22401 型紫外分光光度仪 (日本岛津公 司) ,p HS22C 型精密 p H 计 。厚朴酚及和厚朴酚纯 品 (从长缘厚朴中分离得到[9 ] , HPL C 纯化) ,无水乙 醇 、KH2 PO4 、N H4Cl 、NaO H 、Na2B4O7 ·10 H2O 均 为 分析纯试剂 ,香砂平胃散 ( (昆明天紫红制药厂) 、藿 香正气水 (云南腾冲制药厂) 、保剂丸 (广州羊城药业 股份有限公司) 均为市售药品 。
© 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
2004 Vol. 16 No. 5
保志娟等 :紫外分光光度法同时测定厚朴酚与和厚朴酚的含量及活性研究
保剂丸 (粉末 210067 g) 和藿香正气水 (10 mL) 的处理方法与香砂平胃散类似 ,只是保剂丸残渣直 接用 50 %乙醇定容为 100 mL ,再精密吸取 1510 mL 定容为 25 mL 过滤待用 ; 藿香正气水则不需回流 , 加热先除去乙醇后 , 再按前述方法处理 , 直接用 50 %乙醇液定容至 25 mL 过滤待用 。
厚朴酚 ( magnolol) 与和厚朴酚 ( honokiol) 是木 兰科植物厚朴 、大叶木兰树皮及洋玉兰种子中的主 要活性成分 ,广泛地用于临床治疗 ,主要有肌肉松 弛 、抗菌 、抗炎 、抑制胃溃疡和防止应激性胃功能障 碍 、抑制血小板聚集 、中枢神经系统保护和降血压等 作用[123 ] ,最近的研究指出厚朴酚与和厚朴酚还具 有抑制癌细胞的作用[4 ] 。目前用于定量测定厚朴 酚与和厚朴酚的方法主要是薄层扫描法[5 ] 、高效液 相色谱法[2 ] 和毛细管区带电泳法[6 ] 。用紫外分光
(云南大学化学系 昆明 650091)
摘 要 使用 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaOH 缓冲液 (0. 025 mol/ L) ,根据混合物含量测定的原理 ,在 289. 4 nm 和 316. 4 nm 处测定溶液吸光度来测定厚朴酚与和厚朴酚的含量 ,在 517 nm 处考察厚朴酚与和厚朴酚清除 DPPH·的活性 ,建立了同时测定厚朴酚与和厚朴酚含量的紫外分光光度法 ,初步考察了二者的自由基清除活 性 。DPPH·可作为二者抗氧化活性的研究方法 。 关键词 厚朴酚 ;和厚朴酚 ;分光光度法 ;含量测定 ;自由基清除活性
标准溶液 :取厚朴酚与和厚朴酚纯品 ,50 %乙醇 及无水乙醇分别配制成 1100 ×10 - 3 mol/ L 的溶液 。
DPPH ·( 1 , 12Dip henyl222piclhydrazyl radical ) (日本东京化成工业株氏会社) ,用无水乙醇 (国产 A1R1 级试剂) 为溶剂 ,超声溶解后 ,将其配制成浓 度为 2100 ×10 - 4 mol/ L 的储备液 , 密封于冰箱存 放 ,用时将储备液稀释 。
精度取厚朴酚及和厚朴酚标液 0 , 0. 5 , 1. 0 , 1. 5 , 2. 0 , 2. 5 , 3. 0 mL 于 25 mL 比色管中 ,加入 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 510 mL ,蒸馏 水定容为 25 mL ,在 289. 4 nm ,31614 nm 的波长下 测定吸光度 。以吸光度值 A 对浓度 C 进行线性回 归 ( SPSS 软件计算) ,厚朴酚的标准曲线为 A316. 4 = 7500. 000C + 0. 08529 ( R = 0. 999 , RSD = 0. 00748) ,
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天然产物研究与开发
2004 Vol. 16 No. 5
建立了厚朴酚与和厚朴酚同时测定的紫外分光光度 法 ,并应用于三种中成药 :香砂平胃散 、藿香正气水 和保剂丸中厚朴酚及和厚朴酚的含量测定 。同时还 研究了厚朴酚与和厚朴酚清除 DPPH·的活性 。
SIM UL TANEOUS D ETERMINATION OF MAGNOLOL AND HONO KIOL BY UV SPECTROP HOTOMETRY AND STUDY ON FREE RAD ICAL SCAVENGER ACTIVITY
BAO Zhi2juan , YAN G Xue2qiong ,D IN G Zhong2tao 3 ,CAO Qiu2e ,ZOU Yong2ming
3 通讯作者 Tel :86287125033726 ; E2mail :ztding @ynu. edu. cn
2 样品处理方法
参照文献 5 对药品进行处理 。准确称取香砂平 胃散 8. 0600 g ,加入 25 mL 无水乙醇回流 115 h ,冷 却至室温过滤 ,沉淀用少量无水乙醇洗涤后再过滤 , 滤液合并蒸干 。残渣用 7 mL NaO H ( 1 mol/ L ) 溶 解 ,用 20 mL 石油醚萃取两次 。水层用 HCl 调 p H = 2～3 ,用 30 ,30 ,20 ,20 ,20 mL CHCl3 萃取 ,用蒸 馏水 20 mL 清洗 CHCl3 萃取液至中性 ,水层再用 20 mL CHCl3 萃取 ,合并 CHCl3 层用无水 Na2 SO4 干燥 后蒸干 。残渣用无水乙醇溶解定容至 25 mL ,再精 密吸取 110 mL 该液用 50 %乙醇定容为 25 mL ,滤 膜过滤后作为无色待测液 。
p H = 8. 93
313 稳定性研究及乙醇用量影响 厚朴酚及和厚朴酚标液各取 215 mL ,加入 p H
= 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 5. 0 mL ,定容至 25 mL ,放置 5 ,10 ,30 min ,1 h ,2 h 测定最大吸收峰 的吸光度 。结果显示放置时间超过 2 h 后 ,吸光度 略有下降 ,在 1 h 内 ,样品稳定 ,吸光度几乎不变 。 由于在标样及试样溶液中 ,用到了无水乙醇 ,为此考 察了乙醇用量的影响 。从测定结果看 ,加入乙醇会 增加吸光度 ,但增加的量很小 ,考虑到乙醇的挥发 性 ,故不加入更多的乙醇 ,以防止测定误差增大 。 314 标准曲线
UV spect rop hotomet ry at 289. 4 nm and 316. 4 nm. The scavenger activities were assayed at 517 nm by UV spect rop hotomet ry. This met hod can determine magnolol and honokiol for some t radi2 tional Chinese medicine simply and quickly ,and t heir f ree radical scavenger activities can be deter2 mined by DPPH·met hod. Key words magnolol ;honokiol ;spect rop hotomet ry ;determination ;f ree radial scavenger activity
( Depart ment of Chem ist ry , Y unnan U niversity , Kunming 650091 ,China)
Abstract In order to establish a UV spect rop hotomet ric met hod for simultaneous determination of magnolol and honokiol , and st udy t heir f ree radical scavenger activity preliminarily. In t he KH2 PO42NaO H buffer ( 0. 025 mol/ L ,p H = 8. 93) , magnolol and honokiol were determined by
取 5 mL 相 同 浓 度 不 同 p H 值 的 KH2 PO42 NaO H 缓冲液 ,加入厚朴酚或和厚朴酚标液 215 mL 定容为 25 mL ,测定最大吸收峰 。结果显示在 p H 值 8108～9144 范围内 ,厚朴酚已经离解 ,其最大吸 收峰红移到 31614 nm ,而和厚朴酚还未离解 ,其最 大吸收峰还在 28914 nm 处 ,故我们选择 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 ,其吸收峰如图 1 。
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A289. 4 = 4221. 429C + 0. 103 ( R = 1. 000 , RSD = 0. 00362) 。和厚朴酚的标准曲线为 A316. 4 = 666. 071C
+ 0. 07589 ( R = 0. 998 , RSD = 0. 00155) , A289. 4 = 6939. 286C + 0. 106 ( R = 1. 000 , RSD = 0. 00536) 。 厚朴酚及和厚朴 酚 在 1. 00 ×10 - 5 ～ 3. 00 ×10 - 4 mol/ L (2. 66～79. 8μg/ mL) 范围内呈线性关系 。 315 样品测定方法和可行性
NaO H、N H4Cl2N H3·H2O 缓冲液 。分别取厚朴酚标 液 2. 5 mL ,加入上述缓冲液各 510 mL ,用蒸馏水定 容至 25 mL ,摇匀 ,以蒸馏水为参比进行 UV 测定 。 由于 KH2 PO42NaO H 体系的干扰小 ,且样品峰型好 , 故实验选择该缓冲体系 。其它条件不变 ,改变缓冲 液用量 ,结果表明用量在 410～8. 0 mL 间吸光度稳 定且峰形良好 ,故选择合适体积为 510 mL 。 312 测定 p H 值的选择
3 方法与结果
311 缓冲体系及用量选择 配 制 不 同 p H 值 的 Na2B4O72HCl 、KH2 PO42
图 1 厚朴酚 (1) 与和厚朴酚 (2) 的吸收曲线 (p H = 8. 93) Fig. 1 The absorption curve of magnolol and honokiol at
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天然产物研究与开发 NA TURAL PRODUCT RESEARCH AND DEV ELOPM EN T
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紫外分光光度法同时测 定厚朴酚与和厚朴酚的 含量及活性研究
保志娟 杨雪琼 丁中涛 3 曹秋娥 邹永明
光度法同时分别测定厚朴酚及和厚朴酚尚未见报 道。
在中性溶液中 ,厚朴酚与和厚朴酚的紫外吸收 基本一致 。本文利用它们羟基质子离解性 (p Ka) 的 差异[7 ] ,在一定浓度的样品液中加入缓冲溶液 ,使 厚朴酚离解而和厚朴酚不离解 ,从而使厚朴酚的最 大吸收峰发生红移 ,这样二者的最大吸收峰不再重 合 。在含有多种吸光物质的溶液中 ,由于各吸光物 质对某一波长的单色光均有吸收作用 ,如果各吸光 物质的吸光质点之间相互不发生化学反应 ,当某一 波长的单色光通过这样一种含多种吸光物质的溶液 时 ,溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之 和 。据此 ,可以进行多组分的分析测定 。对于二元 组分混合物的分别测定 ,可解联立方程式[8 ] 。由此
1 仪器与试剂
UV2PC22401 型紫外分光光度仪 (日本岛津公 司) ,p HS22C 型精密 p H 计 。厚朴酚及和厚朴酚纯 品 (从长缘厚朴中分离得到[9 ] , HPL C 纯化) ,无水乙 醇 、KH2 PO4 、N H4Cl 、NaO H 、Na2B4O7 ·10 H2O 均 为 分析纯试剂 ,香砂平胃散 ( (昆明天紫红制药厂) 、藿 香正气水 (云南腾冲制药厂) 、保剂丸 (广州羊城药业 股份有限公司) 均为市售药品 。
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保志娟等 :紫外分光光度法同时测定厚朴酚与和厚朴酚的含量及活性研究
保剂丸 (粉末 210067 g) 和藿香正气水 (10 mL) 的处理方法与香砂平胃散类似 ,只是保剂丸残渣直 接用 50 %乙醇定容为 100 mL ,再精密吸取 1510 mL 定容为 25 mL 过滤待用 ; 藿香正气水则不需回流 , 加热先除去乙醇后 , 再按前述方法处理 , 直接用 50 %乙醇液定容至 25 mL 过滤待用 。
厚朴酚 ( magnolol) 与和厚朴酚 ( honokiol) 是木 兰科植物厚朴 、大叶木兰树皮及洋玉兰种子中的主 要活性成分 ,广泛地用于临床治疗 ,主要有肌肉松 弛 、抗菌 、抗炎 、抑制胃溃疡和防止应激性胃功能障 碍 、抑制血小板聚集 、中枢神经系统保护和降血压等 作用[123 ] ,最近的研究指出厚朴酚与和厚朴酚还具 有抑制癌细胞的作用[4 ] 。目前用于定量测定厚朴 酚与和厚朴酚的方法主要是薄层扫描法[5 ] 、高效液 相色谱法[2 ] 和毛细管区带电泳法[6 ] 。用紫外分光
(云南大学化学系 昆明 650091)
摘 要 使用 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaOH 缓冲液 (0. 025 mol/ L) ,根据混合物含量测定的原理 ,在 289. 4 nm 和 316. 4 nm 处测定溶液吸光度来测定厚朴酚与和厚朴酚的含量 ,在 517 nm 处考察厚朴酚与和厚朴酚清除 DPPH·的活性 ,建立了同时测定厚朴酚与和厚朴酚含量的紫外分光光度法 ,初步考察了二者的自由基清除活 性 。DPPH·可作为二者抗氧化活性的研究方法 。 关键词 厚朴酚 ;和厚朴酚 ;分光光度法 ;含量测定 ;自由基清除活性
标准溶液 :取厚朴酚与和厚朴酚纯品 ,50 %乙醇 及无水乙醇分别配制成 1100 ×10 - 3 mol/ L 的溶液 。
DPPH ·( 1 , 12Dip henyl222piclhydrazyl radical ) (日本东京化成工业株氏会社) ,用无水乙醇 (国产 A1R1 级试剂) 为溶剂 ,超声溶解后 ,将其配制成浓 度为 2100 ×10 - 4 mol/ L 的储备液 , 密封于冰箱存 放 ,用时将储备液稀释 。
精度取厚朴酚及和厚朴酚标液 0 , 0. 5 , 1. 0 , 1. 5 , 2. 0 , 2. 5 , 3. 0 mL 于 25 mL 比色管中 ,加入 p H = 8. 93 的 KH2 PO42NaO H 缓冲液 510 mL ,蒸馏 水定容为 25 mL ,在 289. 4 nm ,31614 nm 的波长下 测定吸光度 。以吸光度值 A 对浓度 C 进行线性回 归 ( SPSS 软件计算) ,厚朴酚的标准曲线为 A316. 4 = 7500. 000C + 0. 08529 ( R = 0. 999 , RSD = 0. 00748) ,
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建立了厚朴酚与和厚朴酚同时测定的紫外分光光度 法 ,并应用于三种中成药 :香砂平胃散 、藿香正气水 和保剂丸中厚朴酚及和厚朴酚的含量测定 。同时还 研究了厚朴酚与和厚朴酚清除 DPPH·的活性 。
SIM UL TANEOUS D ETERMINATION OF MAGNOLOL AND HONO KIOL BY UV SPECTROP HOTOMETRY AND STUDY ON FREE RAD ICAL SCAVENGER ACTIVITY
BAO Zhi2juan , YAN G Xue2qiong ,D IN G Zhong2tao 3 ,CAO Qiu2e ,ZOU Yong2ming