大豆蛋白酶解物的抗癌活性研究

胰蛋白酶分离工艺

1、集落刺激因子（G-CSF ）组成结构：是一种含有二硫键的单链糖蛋白，由175个氨基酸残基组成的单链非糖基化多肽链理化性质：①性状：无色澄明液体 ②分子量：20000，等电点为5.8～6.6 ③溶解度： ④稳定性：生理作用与临床适应症：作用于造血祖细胞，促进其增殖和分化，其重要作用是刺激粒、单核巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放，并能促进巨噬细胞及噬酸性细胞的多种功能，主要用于预防和治疗肿瘤放疗或化疗后引起的白细胞减少症，分离纯化工艺： G-CSF 为无菌冻干粉剂，由含有10mM 醋酸钠pH 为4的蛋白溶液经0.2um 过滤后分装冻干。由含有高效表达人G-CSF 的原核表达系统（E.coli ）经发酵、分离和高度纯化后经冻干制成。纯化液聚乙二醇浓缩洗脱液柱层析透析液透析缓冲液溶解沉淀沉淀蛋白质盐析洗脱液纤维素柱层析透析液透析缓冲液溶解沉淀饱和度至加入硫酸铵透析液透析滤液超滤浓缩正常成人尿液150 ephadexG -%8020000 S DEAE 2、超氧化物歧化酶（SOD ）：组成结构：理化性质：①性状：淡蓝色冻干粉结晶体 ②分子量：32000左右 ③溶解度： ④稳定性：耐热性强，90℃ 环境120分钟酶活几乎没有损失，100℃环境60分钟酶活保持90%以上；稳定性高，在pH4.0—11.0范围内酶活稳定。生理作用与临床适应症：是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶，是一种重要的抗氧化剂，保护暴露于氧气中的细胞分离纯化工艺：血液预处理,洗涤红细胞和溶血;去除大部分杂蛋白得SOD 粗品;再经柱层析分离得到精品。猪血经血液预处理、洗涤红细胞、溶血、乙醇一氯仿混合液除去血红蛋白，然后用坟柳043HZO 萃取、丙酮沉淀、55一65℃热变性得到粗酶液。粗酶液上阴离子DEAE 一Cellulose52交换层析柱、分子筛SephadexG-75柱,最终获得了纯化的铜锌超氧化物歧化酶。

胰蛋白酶活性测定

实验一胰蛋白酶活性测定实验目的：掌握测定胰蛋白酶浓度、活性、比活的原理与方法。实验原理：胰蛋白酶相对分子量23.7 KD，主要水解肽链中碱性氨基酸与其它氨基酸相连接的肽键，此外还能水解碱性氨基酸形成的酯键，如把人工合成的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（N-benzuyl-L-argine ethyl ester, BAEE）水解为H-苯甲酰-L-精氨酸（BA）。胰蛋白酶所催化的上述反应中，产物BA对253 nm 的光吸收远大于BAEE，因此可以在实验起始点把253 nm 的消光值调为零，然后记录反应体系对253 nm 的消光值的增量，并把这个增量作为测定胰蛋白酶的活性指标。酶活单位定义：在底物BAEE浓度1m mol/L，光程1 cm，波长253nm，温度25 0C，测量体积3mL,.条件下吸光值每分钟递增0.001（A/min=0.001）为1个BAEE酶活单位。胰蛋白酶制剂中蛋白质浓度含义：胰蛋白酶含量一般E1%表达。这个值的含义是：浓度为1% 酶蛋白，在1cm光径下，对紫外280nm 的消光值。不同厂家、不同产品的E1%值有很大差别。E1% 值越高，表明酶制剂中酶蛋白含量越高。由于酶制剂中蛋白质含量各不相同，所以用酶制剂配制E1%的蛋白质溶液时，按照厂家对产品的E1% 的测定值配制溶液。在本实验中，胰蛋白酶酶蛋白样品采用SIGMA 公司生产的产品,生产公司对展品的描述是对280nm紫外吸收值15.3，配制胰蛋白酶标准溶液可根据厂家的这个说明。器材以试剂：器材，电子天平，紫外分光光度计，微量加样器。试剂：标准胰蛋白酶，N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯，HCI, Tris。 1．胰蛋白酶活性测定： 1）配制E1%的胰蛋白酶溶液

糜蛋白酶生产技术及市场行情研究报告

糜蛋白酶生产技术及市场行情研究报告出版日期：2013-9-5 目录第一部分：有机化工行业概述 (1) 第一节：有机化工行业范围、基本原料和用途介绍 (1) 第二节：化工市场跌宕起伏，有机化工产品表现上佳 (2)

第三节：生物基有机化工产业正在兴起 (3) 第二部分：糜蛋白酶生产技术及市场行情研究报告目录 (5) 第三部分：研究方法、数据来源和编写资质 (9) 第一部分：有机化工行业概述第一节：有机化工行业范围、基本原料和用途介绍有机化工是有机化学工业的简称，又称有机合成工业。是以石油、天然气、煤等为基础原料，主要生产各种有机原料的工业。基本有机化工的直接原料包括氢气、一氧化碳、甲烷、乙烯、乙炔、丙烯、碳四以上脂肪烃、苯、糜蛋白酶、糜蛋白酶、乙苯等。从原油、石油馏分或低碳烷烃的裂解气、炼厂气以及煤气，经过分离处理，可以制成用于不同目的的脂肪烃原料；从催化重整的重整汽油、烃类裂解的裂解汽油以及煤干馏的煤焦油中，可以分离出芳烃原料；适当的石油馏分也可直接用作某些产品的原料；由湿性天然气可以分离出甲烷以外的其他低碳烷烃；从煤气化和天然气、炼厂气、石油馏分或原油的蒸气转化或部分氧化可以制成合成气；由焦炭制得的碳化钙，或由天然气、石脑油裂解均能制得乙炔。此外，还可从农林副产品获得原料。基本有机化工产品的品种繁多，按化学组成可分类如表。这种划分具有一定的灵活性，因很多物质含有两种以上的特定元素或两种以上的基团，它们常又按其主要特点划入某一类。基本有机化工产品也可按所用原料分类： ①合成气系产品（见合成气）。 ②甲烷系产品（见甲烷）。 ③乙烯系产品（见乙烯）。 ④丙烯系产品（见丙烯）。 ⑤C4以上脂肪烃系产品（见碳四馏分；碳五馏分）。 ⑥乙炔系产品（见乙炔）。

胰蛋白酶-CaCl2溶液(0.1%)

北京雷根生物技术有限公司 https://www.360docs.net/doc/f116029733.html, 胰蛋白酶-CaCl 2溶液(0.1%) 简介：胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶，能够继续活化更多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水解为肽，进而分解为氨基酸，其最适温度约为37℃。Trypsin-CaCl 2 solution 主要由0.25%胰酶、0.1%氯化钙等组成，经过滤除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化，通常室温下1min 左右就可以消化下大多数贴壁细胞。组成：操作步骤(仅供参考)： 1、贴壁细胞的消化 ①吸除培养液，用无菌PBS 、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。 ②加入少量Trypsin-CaCl 2 solution ，略盖过细胞即可，室温放置，不同的细胞消化时间有所不同。 ③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。 ④如果发现消化不足，则加入Trypsin-CaCl 2 solution 重新消化。 ⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。 2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。注意事项： 1、尽量减少反复冻融的次数，以免失效。 2、在使用胰酶细胞消化液的过程中，要特别注意避免消化液被细菌污染。 3、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。编号名称 IH0330 Storage Trypsin-CaCl 2 solution 100ml -20℃ 使用说明书 1份

重组人胰蛋白酶

重组人胰蛋白酶 Cat. No.: RHT03 CAS: 9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1. 重组生产，无动物源性重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2. 优势安全性高重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等；特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染；冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失；不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。

?纯度高 HPLC纯化；活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高比活性不低于2500 USP u/mg。 3.用途范围胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500 USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂

5.信息产品名称比活包装产地重组人胰蛋白酶≥2500 USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品重组猪胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液。

大豆蛋白酶解的研究

收稿日期:2005-11-17 修回日期:2005-12-22 作者简介:李大明,男,1982年出生,在读硕士,从事植物蛋白酶解及天然级热反应肉味香精的研究。大豆蛋白酶解的研究李大明,宋焕禄,祖道海北京工商大学化学与环境工程学院　(北京　100037) 摘　要:用几种常用蛋白酶对大豆蛋白进行酶解,利用均匀设计安排试验,确定各种酶的最佳酶解条件,并以水解度(DH )为考察标准,选出水解度最大的酶,确定其最佳加酶量和酶解时间。关键词:大豆蛋白;水解植物蛋白(HVP );水解度(DH );酶解;均匀设计中图分类号:TS201.1 文献标识码:B 文章编号:1672-5026(2006)02-0020-04 Study on enzymatic hydrolysis of soybean protein Li Daming ,Song Huanlu ,Zu Daohai College of Chem ical and Envi ronmental Engi neeri ng ,Beiji ng Technology and B usi ness U niversity (Beiji ng 100037) Abstract :The enzymatic hydrolysis of soybean protein by several normal enzymes is studied.The best condition for enzymatic hydrolysis by experiments uniform designed is confirmed.Making hydrol 2ysis degree (DH )as the standard ,the best adding amounts and hydrolysis time of enzymes whose DH are largest are got. K ey w ords :soybean protein ;hydrolyzed vegetable protein (HVP );hydrolysis degree (DH );en 2zymatic hydrolysis ;uniform designs 大豆蛋白的营养价值很高,含有丰富的优质蛋白质,可以提供充足的人体所需的八种必需的氨基酸以及多种维生素和矿物质等[1]。水解植物蛋白(HVP )是一种营养型食品添加剂,以其柔和丰满的鲜美口感广泛用于肉产品加工、方便面、膨化食品以及调味品中[2]。特别是在Maillard 反应制备肉味香精的研究中,HVP 作为一种前体物质和丰富的氨基酸源得到广泛的应用。Cadwallader 等人以酶解大豆蛋白为前体物质通过Maillard 反应制备肉味香精,并通过GC -MS 和GCO 检测分析出大量特征香味物质[3]。因此HVP 在绿色食品添加剂的生产中将得到广泛的应用。目前工业上主要采用酸水解法生产HVP 。但酸水解反应条件激烈,会破坏氨基酸,此外,酸水解法会产生1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP )和3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD )具有致癌性[4]。酶法水解具有条件温和、副反应少、水解程度容易控制,特别是在营养成分的保留上,具有不可比拟的优点。随着酶工业的发展,酶解方法将替代酸法,成为水解大豆蛋白最有效的方法之一。 1　材料与方法 111　材料 11111　试验原料与主要试剂。豆粕,购于北京和田宽酿造厂;甲醛溶液,优级纯,北京市旭东化工厂;L -酪氨酸,BR ,上海政翔化学试剂研究所;福林酚试剂,Sigma F -9252,北京欣经科生物技术有限公司;干酪素,BR ,北京双旋微生物培养基制品厂;复合风味酶(Flavozyme )、复合内切酶(Protamex )和碱性内切酶(Alcalase ),Novo Nodisk 公司;其他化学试剂均为分析纯;试验用水为蒸馏水。 2Vol.13,2006,No.2 粮食与食品工业 Cereal and Food Indust ry 食品科技

减肥药的现状及研究进展

减肥药的现状及研究进展论文导读：肥胖症是一种常见的代谢症候群。减肥药物现逐渐成为肥胖治疗的一种较好的辅助手段。肥胖，减肥药的现状及研究进展。关键词：肥胖，减肥药肥胖症是一种常见的代谢症候群。毕业论文，肥胖。当人体进食热量多于消耗热量时，多余热量以脂肪形式储存于体内，其量超过正常生理需要量，且达一定值时遂演变为肥胖症。毕业论文，肥胖。因体脂增加使体重超过标准体重20%或体重指数大于27称为肥胖症。如无明显病因可寻者称单纯性肥胖症；具有明确病因者称为继发性肥胖症。单纯性肥胖是肥胖症中最常见的一种，是多种严重危害健康疾病（如糖尿病、冠状动脉粥样硬化心脏病、脑血管疾病、高血压、高血脂症等）的危险因子，在其发病中起着或为病因、或为诱因、或为加重因素、或兼而有之的作用。肥胖已成为发达国家人口发病和死亡的一个主要原因。因此，肥胖症的防治有着十分重要的临床意义【1】。肥胖的治疗应提倡综合疗法，即饮食控制，运动疗法，行为疗法及药物治疗等多方式联合。肥胖的药物治疗是一个有争议的问题，随着对肥胖发病机制的认识深入，减肥药物现逐渐成为肥胖治疗的一种较好的辅助手段。目前临床应用的减肥药按作用机制可分为三类：①

食欲抑制药；②增加能量消耗的药物；③抑制肠道消化吸收的药物。【2】现分类介绍减肥药物及最新研究进展。 1．食欲抑制剂食欲由下丘脑腹内侧的饱中枢与下丘脑外侧区的摄食中枢调节。研究证明，中枢增强或抑制调节摄食功能主要是通过儿茶酚胺诶神经递质如去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺等的变化。毕业论文，肥胖。食欲抑制药大多是通过影响这些递质在下丘脑的合成、释放与再摄取，以调节食欲，改变摄食行为，从而影响体重【3】。西布曲明是一种去甲肾上腺素和5一羟色胺(5-HT)重摄取抑制剂．1997年获美国FDA批准，主要通过产生饱胀感和生热作用治疗肥胖症。研究报告显示，服用西布曲明半年内可观察到体重减轻效果，服用1年可减轻体重超过4kg，长期服用的减肥作用可以保持至少2年【4】。芬氟拉明和右芬氟拉明都是法国施维雅公司的产品，分别于40年前和20年前上市，在美国的上市时间分别为1973年与1976年。此类药物的不良反应包括恶心、腹泻、嗜睡、口干、头痛、头晕、旋转性眼震、下颌震颤等。长期用药可引起心脏瓣膜损害，主要表现为轻至中度二尖瓣或主动脉瓣返流；并能引起肺动脉高压和诱发高血压危象[5]。因此，在1997年FDA宣布禁用芬氟拉明和右芬氟拉明。 2．增加能量消耗的药物目前，还没有专门用于提高产热作用(基础代谢率)的药物。不过，一些药物可能具有这么面。麻黄碱可通过直接兴奋肾上腺素β受体，促进机体产热，也可通过促使中枢神经末梢释放去甲肾上腺素而产生

大豆蛋白酶解产物功能特性的研究进展#(优选.)

大豆蛋白酶解产物功能特性的研究进展摘要：总结了大豆蛋白酶解产物功能特性，主要阐述了大豆蛋白酶解产物的生物活性肽功能特性、轻度酶解产物功能特性以及苦味肽，并作出了展望。关键词：大豆蛋白酶解产物生物活性肽轻度酶解苦味肽功能特性由于大豆蛋白的高营养价值和低成本使它在食品工业上的应用日益广泛，在过去十年里，大豆蛋白开始应用到咖啡增白剂、乳品饮料、蛋黄酱和可食用膜等产品当中。然而，大豆蛋白本身的溶解性，热稳定性，乳化性和起泡性限制了它在某些食品中的应用。通过蛋白酶水解来改善大豆蛋白的功能特性是目前比较可行的方法之一，以下将对酶解所产生的不同分子量的产物特性进行具体阐述。 1 生物活性肽功能特性大豆活性肽的分子量范围大多在500～2000之间，大部分可以直接被人体吸收。在较宽的pH范围内有很好的溶解性，持水能力比原蛋白有很大提高。其生物活性主要有以下几个方面。 1.1 降血脂和胆固醇国外专家研究指出，增加膳食中大豆活性肽含量，可以

降低血清胆固醇浓度。在小鼠喂饲试验中，添加大豆活性肽有利于降低极低密度脂蛋白合成，从而促进肝脏载脂蛋白的合成，防止脂肪在肝脏的积累，促进脂肪的运输和代谢。 1.2 抗氧化活性大豆活性肽的抗氧化活性明显高于大豆蛋白本身。酶解是提高大豆蛋白抗氧化性的有效方法之一，大豆活性肽的抗氧化性是多肽氨基酸序列的一种本质特性。不同的酶，其水解专一性不同，导致水解产物的抗氧化性也不同。大豆活性肽对小鼠体内脂肪过氧化抑制作用强于酪蛋白活性肽，在对红血球抗氧化防御能力的提高方面与酪蛋白活性肽相当，可增强红血球对自由基的攻击抵抗作用。 1.3 低过敏原性很多食物中由于过敏原的存在，会导致一些特异性过敏反应，如一些皮肤病、呼吸道疾病甚至过敏性休克就是由于这个原因所引起。大豆蛋白中也存在着过敏原，但已有研究表明，蛋白降解是降低或消除过敏原的有效方法。通过酶免疫测定法对大豆活性肽的抗原性进行测定，结果指出，活性肽抗原性比大豆蛋白降低1%～2%。 1.4 降血压血压在血管紧张素转换酶（ACE）的作用下进行调节，血管紧张素I不具有活性，在ACE作用下可以转变为血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ具有收缩血管平滑肌的功能，从而引

丝氨酸蛋白酶的相关研究

丝氨酸蛋白酶的相关研究摘要：本文概述了丝氨酸蛋白酶的酶学基础，反应机制，该酶抑制剂的设计及其应用。丝氨酸蛋白酶是一个蛋白酶家族，它们的作用是断裂大分子蛋白质中的肽键，使之成为小分子蛋白质。其激活是通过活性中心一组氨基酸残基变化实现的，它们之中一定有一个是丝氨酸（其名字的由来）。在哺乳类动物里面，丝氨酸蛋白酶扮演着很重要的角色，特别是在消化，凝血和补体系统方面。正是由于该酶的特殊性质，使其在众多领域都有所应用。关键字：丝氨酸蛋白酶；酶学基础；反应机制；应用 Abstract：This article provides an overview of the serine protease enzyme, reaction mechanism, the design and application of enzyme inhibitors. Serine protease is a protease family, their roles are to break large protein molecules in the peptide bond, to become small molecular protein. Its activation is through the active center of a group of amino acid residues change, they must have a serine (the origin of the name). In mammal animal, serine proteases play a very important role, especially in the digestion, Coagulation and complement systems. Because of the special nature of the enzyme, and it has been applied in many fields. Keywords: Serine protease; fundamentals of enzymology; reaction mechanism; application

(人)胰蛋白酶

重组人胰蛋白酶 Cat.No.:RHT03 CAS:9002-07-7 EC:3.4.21.4 来源：人胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.重组生产，无动物源性重组人胰蛋白酶，氨基酸序列及性质与人胰蛋白酶完全相同。无动物源性，无病毒污染。可用于干细胞治疗、肿瘤的细胞治疗等过程中，无抗原性。 2.优势安全性高重组生产，无动物源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等；特殊工艺，无内源性病毒污染，无细菌、真菌、支原体污染；冻干粉，运输及储存安全，活性不易损失；不含任何蛋白酶抑制剂，如PMSF等。上海雅心生物技术有限公司

?纯度高 HPLC纯化；活性特异，无其它蛋白酶活性。 ?活性高比活性不低于2500USP u/mg。 3.用途范围胰蛋白酶是一种内肽酶，可用于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键，从而将大分子蛋白裂解为小肽。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中，如：细胞培养各种组织的细胞分离；变性蛋白质的降解；蛋白质的酶解、测序；干细胞、肿瘤的细胞治疗等。 4.特性纯化HPLC 产品性状白色或类白色冻干粉纯度（HPLC）≥95% 比活不低于2500USP u/mg 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染及活性不含任何蛋白酶抑制剂无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂上海雅心生物技术有限公司

5.信息产品名称比活包装产地重组人胰蛋白酶≥2500USP u/mg10mg,100mg,1g上海雅心活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml(1cm光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值增加0.003定义为一个USP单位。 6.相关产品重组猪胰蛋白酶；重组胰蛋白酶细胞消化液。上海雅心生物技术有限公司

长期雾化吸入α—糜蛋白酶对中晚期COPD患者生存质量改善功效的研究

长期雾化吸入α—糜蛋白酶对中晚期COPD患者生存质量改善功效的研究摘要目的研究分析长期雾化吸入α-糜蛋白酶对中晚期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者生存质量改善功效。方法80例中晚期COPD患者，采用随机数法分为对照组和观察组，每组40例。对照组给予常规吸入皮质激素、家庭氧疗以及支气管解痉药物治疗，观察组在对照组治疗基础上加用雾化吸入α-糜蛋白酶进行治疗。统计比较两组患者平均每年住院及使用抗生素时间、临床症状改善指标以及预后生存质量。结果观察组患者肺部X线改善时间（6.08±4.21）d、哮鸣音消失时间（3.11±1.89）d以及喘憋消失时间（2.08±1.37）d均显著短于对照组的（13.47±5.29）、（9.72±3.28）、（7.47±3.21）d，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。观察组患者平均每年住院与使用抗生素时间均短于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。观察组患者的预后生存质量[自理能力（79.31±4.55）分、精神状态（78.27±5.63）分以及睡眠质量（79.28±5.01）分]均显著优于对照组[自理能力（51.06±4.61）分、精神状态（39.13±4.31）分以及睡眠质量（45.38±4.51）分]，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论雾化机与α-糜蛋白酶价格低廉，长期使用不会明显增加患者经济负担。在改善生存质量的同时，可以明显减少患者的住院时间以及抗生素使用量，为患者节约医疗费用，且副作用小，对心血管几乎没有影响，可在临床推广应用。关键词雾化吸入；α-糜蛋白酶；中晚期慢性阻塞性肺疾病；生存质量慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是临床中比较常见的一种慢性呼吸系统疾病[1]。该疾病治愈难度高，预后质量差，且具有较高的致残、致死率，严重影响中老年患者健康安全。目前，α-糜蛋白酶雾化吸入方式是临床治疗COPD的首选，能够有效提高患者生存质量[2]。本研究就长期雾化吸入α-糜蛋白酶对中晚期COPD患者生存质量改善功效進行统计分析，报告如下。 1 资料与方法 1. 1 一般资料随机抽取2015年1月～2016年9月本院收治的中晚期COPD 确诊病例80例，以随机数法分成对照组和观察组，每组40例。对照组中男20例，女20例，年龄57～95岁，平均年龄（77.72±6.07）岁；观察组中男21例，女19例，年龄55～97岁，平均年龄（78.05±7.43）岁。两组患者的年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。 1. 2 方法对照组患者给予常规吸入皮质激素、家庭氧疗以及支气管解痉药物治疗，具体如下：①给予患者吸入布地奈德气雾剂（鲁南贝特制药有限公司，国药准字H20030987）进行治疗，200 μg/d，每个疗程为10 d；②同期给予患者噻托溴铵（江苏正大天晴药业股份有限公司，国药准字H20060454）进行治疗，1粒/次，1次/d；③辅助吸氧进行治疗。观察组在对照组治疗措施基础上

胰蛋白酶(Trypsin)试剂盒说明书

货号: QS2303 规格：50管/48样胰蛋白酶（Trypsin）试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。测定原理：胰蛋白酶催化水解BAEE的酯键，生成BA，BA在253nm处有吸收峰，通过测定253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解。试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。粗酶液提取：组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到253 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37℃水浴预热30min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入10μL蒸馏水，100μL试剂二，900μL试剂三，迅速混匀于253nm测定0s和60s的吸光度A1和A2，△A空白= A2-A1。 4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入10μL粗酶液，100μL试剂二，900μL试剂三，迅速混匀于253nm测定0s和60s的吸光度A3和A4，△A测定= A4-A3。胰蛋白酶活性计算公式： (1) 按照蛋白浓度计算活性单位定义：37℃每毫克蛋白质每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。胰蛋白酶（U/mg prot）= (△A测定-△A空白) ×V反总÷（Cpr×V1）÷T =101×(△A测定-△A空白) ÷Cpr Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），10μL=0.01 mL；V反总：反应总体积，1.01mL；T：反应时间（min），1min。（2）按照样本质量计算活性单位定义：37℃每克组织每分钟催化253nm处吸光值增加1为1个酶活单位。胰蛋白酶（U/g鲜重）= (△A测定-△A空白) ×V反总÷（W×V1÷V2）÷T 第1页，共2页

胰蛋白酶活力测定

实验胰蛋白酶活力测定一、原理福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸，在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原为蓝色化合物（钨蓝和钼蓝）。蛋白质中含具酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），用胰蛋白酶水解蛋白底物，生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应，生成蓝色化合物，在一定的范围内，蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比。二、实验仪器试管 7220分光光度计恒温水浴锅三、实验试剂福林试剂B：见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度部分(冰箱中) 0.55mol/L碳酸钠溶液：58.3g无水碳酸钠溶于蒸馏水，稀释并定容至1000ml 10%三氯乙酸溶液 0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)： 0.5% 酪素溶液：称取0.5g酪素，以0.5mol/L氢氧化钠1ml湿润，再

加少量0. 2mol/L 磷酸缓冲液稀释。在水浴中煮沸溶解，冷却，稀释并容至100ml ，冷藏在(冰箱)里。 500ug/L 酪氨酸溶液胰蛋白酶溶液(冰箱中) 四、实验步骤标准曲线的制作：按下表加入试剂： 0.20.40.60.81.0蒸馏水 1.0 0.80.60.40.20500ug/L 酪氨酸溶液6 54321管号各管中加0.5%酪素2ml ，于37℃水浴中反应15分钟，然后加入10%三氯乙酸3ml ，过滤除去沉淀，取清液1ml ，加入0.55mol/L 碳酸钠5ml ，再加入福林试剂1ml ，于37 ℃水浴中显色15分钟，测OD 680。以光密度为纵坐标，酪氨酸的微克数为横坐标绘制标准曲线。样品测定：取干燥的试管2支，按下表加入试剂

0 OD6801 1福林试剂B 5.0 5.0 0.55mol/L碳酸钠溶液 37水浴中显色15分钟1 1上清液过滤3.0 3.0 10%三氯乙酸溶液1.0 0 2mg/ml胰酶溶液0 1.0 0. 2mol/L磷酸缓冲液 37水浴中酶解15分钟2.0 2.0 0.5%酪素溶液备注2 1 管号五、结果计算酶活力：在37℃下每分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位。样品中含酶活力单位=A/15 ╳F A—样品测定光密度查曲线得相当酪氨酸ug数 F—酶液稀释倍数原始数据：（注：7号为待测液）液体编号 0 1 2 3 4 5 7 分光光度计值 0 0.057 0.172 0.201 0.255 0.373 0.919 分光光度计值 0 0.057 0.173 0.194 0.263 0.386 0.928 分光光度计值 0 0.068 0.174 0.194 0.271 0.391 0.934

肥大细胞糜酶的研究现状

综一一述肥大细胞糜酶的研究现状? 王一茹１,熊梓汀２,张振宇１综述,岑一瑛１?审校 (１．四川大学华西医院美容整形烧伤科,四川成都６１００００;２．成都中医药大学医学与生命科学学院,四川成都６１００００) 一一[关键词]一肥大细胞;一丝氨酸内肽酶类;一糜酶;一血管紧张素;一糜酶抑制剂;一综述 D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００９Ｇ５５１９．２０１９．０３．０１８中图法分类号:R３２９文章编号:１００９Ｇ５５１９(２０１９)０３Ｇ０３８５Ｇ０４文献标识码:A 一一糜酶是肥大细胞分泌的主要中性蛋白酶之一,是近年来关注度较高的一种糜蛋白样的丝氨酸蛋白酶.其与心血管二肝肾二代谢疾病等都有密切的关系,是血管紧张素Ⅱ(A n gＧⅡ)生成途径中特别是局部组织生成途径中的重要酶类.本文就国内外肥大细胞糜酶的研究进展综述如下. １一糜酶的特性一一糜酶具有种间差异,在人类肥大细胞是相对分子质量为２９?１０３的糖蛋白,其２个糖链通过３个二硫键相互连接,含有和另外一些丝氨酸蛋白酶一致的八肽保守序列及类似的三联氨基酸催化活性中心.糜酶的基因位于人类１４号染色体,其全长达３k b,包括了５个外显子及４个内含子.从D N A结构分析上来看,糜酶和已知的丝氨酸蛋白酶表现出高度同源性[１].在非啮齿动物哺乳动物中,仅发现α型的糜酶基因,其会选择性水解A n g底物A n gＧ(１Ｇ１２)和A n gⅠ,从而产生A n gⅡ[２]. 糜酶大部分存在于人类肥大细胞(M a s t c e l l s)二内皮细胞二间质细胞及细胞间质中,其最适p H值为７．０~９．０,能催化的底物包括A n gⅠ和神经紧张素(N T),糜酶抑素二大豆胰蛋白酶抑制剂(S B T I)二苯甲基磺酰氟(P M S F)二糜蛋白酶抑制剂(Z I G P F M和T P C K)等物质,且能抑制其活性. 糜酶以无活性的前体形式存在于肥大细胞内(p H值为５．５),当各种刺激(如导管损伤二移植物或其他刺激等)作用于组织时,肥大细胞通过脱颗粒的形式释放糜酶至细胞外细胞间质(p H值为７．４),同时由二肽基肽酶Ⅰ(D P P I)激活.因此,在正常组织中糜酶并不具有酶活性,只有在炎性反应的组织里,通过刺激肥大细胞后才能观察到均有活性的糜酶.换句话说,正是由于在正常组织中的糜酶不具有活性,使用糜酶抑制剂时也无相应的靶向点,所以,糜酶抑制剂的临床应用应该有较高的安全性. ２一糜酶的作用２．１一糜酶在A n gⅡ生成中的作用一过去被普遍接受的A n gⅡ的经典生成途径:由肾脏近球旁器生成的肾素,将来源于肝脏的血管紧张素原转化为A n gⅠ, A n gⅠ在肺血管来源的血管紧张素转化酶(A C E)催化下进一步转化为A n gⅡ及A n gⅢ,A n gⅡ通过血管紧张肽受体１(A T１)和A T２来发挥作用.A T１多在成年人中表达,主要是周围组织和脑组织,其作用为加强心血管收缩,使心血管系统的平滑肌肥厚,增加肾脏钠的重吸收等.A T２多在胎儿中表达,在成年人心血管发生病理改变时表达增加,在成年人的心二脑二肾上腺二内皮等中少量表达. 研究显示,血管紧张素转化酶抑制剂(A C E I)不能完全阻断A n gⅡ的生成,而血管紧张素受体拮抗剂(A R B)则可完全抑制A n gⅡ的效应;另外临床中使用A C E I治疗部分疾病时效果欠佳,上述这些均暗示有可能存在A C E以外的A n gⅡ生成途径.目前的研究已证实这种猜测,实际上有糜酶二组织蛋白酶(C a t h e p s i nG)二张力素(T o n i n),激肽释放酶(K a lＧl i k r e i n)等有多种非A C E依赖的A n gⅡ生成途径,而这些又以糜酶途径为主[３Ｇ４]. 很长一段时间,大家都认为在A n gⅡ生成途径中,A n gⅠ是唯一的底物.但新的肾素Ｇ血管紧张素系统(R A S)家族成员A n gＧ(１Ｇ１２)的发现改变了这一概念.A n gＧ(１Ｇ１２)和A n gⅠ的氨基酸序列相似,但在C 端略有不同.研究也证明了在心血管疾病的大鼠和人类中,A n gＧ(１Ｇ１２)的浓度更高[５Ｇ６].现在也有研究证实,在人类心脏组织细胞的体外实验中,通过糜酶转换A n gＧ(１Ｇ１２)和A n gⅠ生成的A n gⅡ远比A C E 更高效[２].而更有实验进一步证实,在人类和啮齿类动物中,A n gＧ(１Ｇ１２)是糜酶作用下生成A n gⅡ的主要５８３现代医药卫生２０１９年２月第３５卷第３期一JM o dM e dH e a l t h,F e b r u a r y２０１９,V o l．３５,N o．３ ?基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(８１５０１６７３);四川省科学技术厅应用基础研究项目(２０１７J Y０３３５).?一通信作者,EＧm a i l:５５０２３０１３０＠q q．c o m.

大豆分离蛋白酶法改性研究进展

万方数据

大豆分离蛋白酶法改性研究进展作者：肖怀秋，李玉珍，兰立新，李继睿， XIAO Huai-qiu， LI Yu-zhen， LAN Li-xin，LI Ji-rui 作者单位：湖南化工职业技术学院应用化学系,株洲市,412004 刊名：酿酒英文刊名：LIQUOR MAKING 年，卷(期)：2007,34(5) 参考文献(21条) 1.刘艳秋;陈光Protamex复合蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究[期刊论文]-食品科学 2005(06) 2.Wendee ChiangD Function properties of soy protein hydrolysate producedfrom a continuous membrane reactor system 1999 3.Jin-Yeol Lee;Hyun Duck Lee;Cherl-Ho Lee Characterization of hy drolysatesproduced by mild-acid treatment and enzymatic hydrolysis of defatted soybean flour 2001(34) 4.Nakai s Sturcture-relationship of food proteins with and emphasis on the importance of protein hydrophobicity 1983(04) 5.S Petruccelli;M C Anon Relationship between the Method of Obtention and the Structural and FunctionalProperties of Soy Protein Isolates.l.Structural and Hydration properties 1994 6.赵国华;明建;陈宗道酶解大豆分离蛋白乳化特性的研究[期刊论文]-中国粮油学报 2002(02) 7.陶红;梁歧双酶水解降低大豆寡肤苦味研究[期刊论文]-食品工业科技 2003(zk) 8.张梅;周瑞宝;马智刚醇法大豆浓缩蛋白酶法改性研究[期刊论文]-中国油脂 2003(12) 9.M QI Solubility and Emulsifying Properties of Soy Protein Isolates Modified by Parcreatin[外文期刊] 1997(06) 10.Sook Y Kim Functional Properties of Proteolytic Emzyme Modified Soy Protein Isolate 1990 11.WU Wu Hydrophobicity,Solubility,and Emulsifying Properties of Soy Protein Peptides Prepared by Papain Modification and Ultrafiltration[外文期刊] 1998(07) 12.郭永;张春红大豆蛋白改性的研究现状及发展趋势[期刊论文]-粮油加工与食品机械 2003(07) 13.Zheng Guo;Anders F Vikbjerg;Xuebing Xu Enzymatic modification of phospholipids for functional applications and human nutrition[外文期刊] 2005(23) 14.刘欣;徐红华;李铁晶微生物蛋白酶改性大豆分离蛋白的研究进展[期刊论文]-大豆通报 2005(04) 15.潘进权;刘耘大豆多肽研究概况[期刊论文]-粮油加工与食品机械 2004(07) 16.Garcia M C Composition and Chracterization of soybean and related products 1997(04) 17.Katsumi Studies on the coagulation of soymilk-protein by commercial proteinase 1987 18.卢阳;王凤翼;孔繁东大豆蛋白酶水解物抗氧化性的研究[期刊论文]-大连轻工业学院学报 2001(04) 19.刘大川;杨国燕酶改性大豆分离蛋白的制备及产品功能性的研究[期刊论文]-中国油脂 2004(12) 20.高安全;姬学亮;张二琴大豆蛋白酶法改性研究[期刊论文]-开封大学学报 2004(03) 21.刘景顺;黄纪念;谭本刚大豆分离蛋白的改性研究 1997(04) 本文链接：https://www.360docs.net/doc/f116029733.html,/Periodical_nj200705020.aspx

胰蛋白酶活性测定教学资料

胰蛋白酶活性测定

由于酶制剂中蛋白质含量各不相同，所以用酶制剂配制E1%的蛋白质溶液时，按照厂家对产品的E1% 的测定值配制溶液。在本实验中，胰蛋白酶酶蛋白样品采用SIGMA 公司生产的产品,生产公司对展品的描述是对280nm紫外吸收值15.3，配制胰蛋白酶标准溶液可根据厂家的这个说明。器材以试剂：器材，电子天平，紫外分光光度计，微量加样器。试剂：标准胰蛋白酶，N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯，HCI, Tris。 1．胰蛋白酶活性测定： 1）配制E1%的胰蛋白酶溶液每组取E1%=15.3的胰蛋白酶样品10mg 放到1ml去离子水中，充分溶解后，放入冰中保存。 2)按照表1 的要求配制试验体系所需其它各种溶液. 3)按照表1的顺序进行测定标准胰蛋白酶的活性。表1 胰蛋白酶活性测定加样顺序试剂步骤1：空白调零步骤2：样品测定 0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液,pH 8.0 , 1.5 mL 1.5 mL 2.0 m mol/L BAEE 1.5 mL 1.5 mL 250C预热5min 250C预热5min 胰蛋白酶:10mg/mL 0 μL 10 μL 蒸馏水10 μL 0 μL 充分摇匀充分摇匀步骤1：?A253 nm/min 调0 ----------- 步骤2：?A253-nm/min -------------- 记录在步骤2样品测定中，加入酶液后立即盖上盖迅速混匀计时，每半分钟读数一次，共读3～4min。测得的结果要使△A253nm/min控制在0.05～0.100之间为宜，若偏离此范围则要适当增减酶量（5μL -20μL之间，空白试验相应增减等体积水）后重新测定，一直到△A253nm/min值落在0.05～0.100之间为止。