血清中碱性磷酸酶的测定

实验操作
• 取试管4支，按表6-3(碱性磷酸酶活力的测定方法)操作。
项 目 测定管 （T） 0.100 － － 1.00 标准管 （S） － 1.00 － 1.00 空白管 （B） － － 0.100 1.00 对照管 （C） － － － 1.00
血清／ml 酚标准工作液／ml 蒸馏水／ml pH＝10.0的碳酸盐缓冲 液／ml
碱性磷酸酶偏低的原因： 碱性磷酸酶偏低的原因：
碱性磷酸酶可出现偏高症状，同时，也可出现偏 低症状，碱性磷酸酶偏低的原因，主要可分以下几种： 1.常见于重症型慢性肾炎，甲状腺功能不全者； 2.营养不良、呆小症； 3.维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质、贫血； 4.遗传性低磷酸酶血症。
临床意义
临床上测定ALP主要用于骨骼 、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊 断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平，可测定 同工酶以协助明确其器官来源。 1．生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可 比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量 高的食物后均可以升高。 2．病理性升高： (1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等； (2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等； (3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。 3．病理性降低：见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血 等。
碱性磷酸酶偏高对身体的影响： 碱性磷酸酶偏高对身体的影响：
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、 继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查.它主要经淋巴 道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障 碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。由于 骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、 骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、 肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清 碱性磷酸酶亦可升高，所以对人体的危害是比较大的。
实验器材与试剂
• （一）器材 器材
5ml移液管、100ul或微量可调式移液器、721E型分光光度计、1cm比色 皿、37℃恒温水浴锅。
• （二）试剂 试剂
（1）0.1mol/L碳酸缓冲液（pH=10.0)：称取无水碳酸钠6.36g、碳酸氢钠 3.36g、4-氨基安替比林1.5g，溶于800ml蒸馏水中，定容至1L,置于棕色 瓶内储存。 （2）20mmol/L磷酸苯二钠溶液：先将500ml蒸馏水煮沸，迅速加入磷酸苯 二钠2.18g（磷酸苯二钠如含2分子结晶水，应称取2.54g)，冷却后加氯 仿2ml防腐，在4℃冰箱内保存。用剩的溶液不应再倒回瓶中。 （3）铁氰化钾的硼酸溶液：称取铁氰化钾2.5g、硼酸17g，各溶于400ml 蒸馏水中，两液混合后，加蒸馏水至1L，置于棕色瓶内避光保存。如出 现蓝绿色，说明试剂变质，应弃去。 （4）酚标准工作液（0.05mg/ml):购买合格的二级标准品。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色
细菌ALP二级结构(蓝色为N末端红色为C末端)
• 测定ALP的方法主要分为二种，一是测定底物 解离下的磷酸根来计算酶活力，如β-甘油磷 酸钠法，但存在血清本身有磷酸根及磷酸化的 缺点；二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合 物，这种方法又可分为：1，酚化合物在显色 剂的作用下显色比色测定。2，生成的酚化合 物本身在一定的条件下就可显色，如磷酸对硝 基酚法。
参考值：成人：3~13Kings单位。儿童：5~28Kings单位。
碱性磷酸酶偏高的原因： 碱性磷酸酶偏高的原因：
当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由 于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升 高。 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具 体讨论如下： 1、生理性原因 儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情 况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因 当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性 肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦 进入 血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸 酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺 机能不全、白血病等[2]。
注意事项
• （1）目前市售的酚标准液多为安装，开后不能久置。 目前市售的酚标准液多为安装，开后不能久置。 • （2）底物液中不含有酚，如空白管显红色，说明磷 底物液中不含有酚，如空白管显红色， 酸苯二钠已分解。 酸苯二钠已分解。 • （3）加入铁氰化钾后必须混均，否则对实验结果会 加入铁氰化钾后必须混均， 有影响。 有影响。
实验原理
•百度文库
在pH=10的环境中，ALP催化磷酸二苯钠的水解，生成苯酚 pH=10的环境中，ALP催化磷酸二苯钠的水解，生成苯酚 和磷酸氢二钠，苯酚与4 和磷酸氢二钠，苯酚与4-氨基安替比林反应生成色素原，该色 素原经铁氰化钾氧化生成红色醌亚胺衍生物。测定红色物质的 吸光度就可以计算酶活力的大小。反应式为：
混匀。37°C水浴保温5min，同时将底物液预热 底物液／ml 1.00 1.00 1.00 1.00
混匀。 37°C水浴保温15min 铁氰化钾溶液／ml 血清／ml 3.00 － 3.00 － 3.00 － 3.00 0.100
计算公式： 计算公式：
ALP的活力＝（ A测定－A 位）
对照）／（A标准－A空白）×0.15×100（Kings单
血清中碱性磷酸 酶活性的测定 磷酸苯二钠法） （磷酸苯二钠法）
实验目的
（1）熟悉酶活性测定方法的一般原理。 1 熟悉酶活性测定方法的一般原理。 熟悉掌握血清中ALP ALP活性测定的原理 （2）熟悉掌握血清中ALP活性测定的原理 与临床意义。 与临床意义。
碱性磷酸酶是一组在碱性环境中水解磷酸酯的酶类，分 子量随不同组织来源不同，广泛分布在人体的骨、肾、肠、 血清、胆汁等部位，但以骨骼，牙齿、肾和肝中含量较多， 正常人血清中的ALP主要来源于肝，少部分来自骨骼。血清 ALP测定可用于肝胆系统及骨骼系统疾病的辅助诊断。是临 床常做的酶类检验项目之一。