人型支原体对喹诺酮类药物耐药的分子机制研究

短 期 诱 导 仅 呈 现 较 低 程 度 的耐 药 和 交 叉 耐 药 ， 仅 斯 帕沙 星 诱 且 导 株 发 生 了 ｇ ｒ ｅ８ ￣ ｅ ； ｙＡ Ｓ ｒ３＋Ｌ ｕ 长期 诱 导 株 呈 现 高 度 耐 药 和 ／ 交 叉 耐药 ， 了环 丙 沙 星 诱 导 株 发 生 ｇ ｒ ｅ８ － ．ｕ外 ， 发 除 ｙＡ Ｓ ｒ３＋Ｉ ｅ 还
了 ｐｒ ａ Ｃ的 Ｓ ｒ ０、 ｅ ８ Ｇｌ８ ｅ ８ Ｓ ｒ １、 ｕ ４和 ｐ ｒ ａＥ的 Ｌ ｕ ４ 。研 究 者 认 ｅ ４０
１ 利 用 喹 诺 酮 类 药 物 诱 导 敏 感 菌 株 使 其 耐 药 ， 所 筛 选 出 的 对
耐 药 菌 株进 行 基 因序 列分 析
Ｂ ｂａ 等 ［ ｅ ｅｒ 于 １９ 年 用 次抑 菌 浓 度 喹 诺 酮 类 药 物 对 Ｍｈ ９６
Ｇ Ａ 导 致 Ｓ ｒ３￣ ｅ ｌ 。叶 萍 等 于 ２ ０ — ｅ８ － Ｌ ｕｌ ０ ９年 也 作 ｒ类 似 的 试 验 ， 以往 不 同 的 是 他 们 不 但 进 行 了 长 期 诱 导 耐 药 试 验 与 （ １ ） 还 进 行 了短 期 诱 导 耐 药 试 验 （ ３代 ） 传 ２代 ， 传 。结 果 发 现
用靶 位是 拓扑 异 构 酶 Ⅳ ， 期 诱 导 可 导 致 交 叉 耐药 。 长
Ｂ ｂａ 等 ｌ ｅｅｒ Ｉ 于 ２ ０ 还 ０ ０年 利 用 曲 伐 沙 星 对 Ｍｈ标 准 菌 株 Ｐ ２ 进 行 多步 诱 导 耐 药 ， 步诱 导后 仅产 生 ３ 耐 药 株 ， 只 Ｇ１ 一 株 其 存 在 １个 位 点 的 突 变 ， ｐ ｒ ｕ４ Ｉ ｕ ２步 诱 导 产 生 １ 即 ａＥ Ｇｌ８ 一 ； ｅ ２ 株 突 变 株 ， 变 位 点 是 ｇ ｒ ｅ８ ￣ Ｉ ｕ （ｌ８ 一 Ｉ ｓ Ａｌｌ９ 突 ｙＡ Ｓｒ３ ＂ ｅ ， ｕ ７ ， ａ １ ； ｙ 一 Ｇ ｕ或 Ｖａ； ３ 诱 导 产 生 １ ｌ ｌ经 步 ４株 耐 药 株 ， 变 位 点 又 增 加 突
沙 星诱 导株 均 发 生 ｐｒ ｅ（ 氨 酸 ） ０ Ｉ （ 亮 氨 酸 ）而 经 ａＣＳ ｒ丝 ８￣ ｌ 异 ｅ ； 诺 氟 沙 和 氧 氟 沙 星诱 导 株 均 发 生 ｇ ｒ ｅ８ － Ｉ ｕ 认为 氧 ｙＡ Ｓ ｒ３－ ． ， ￣ｅ 氟 沙 星 的 首 要 作 用 靶 位 是 拓 扑 异 构 酶 Ⅳ 。 而 Ｋ ｎ ｙ等 于 ｅｎ
Ｓ ｒ丝 氨 酸 ） ３ Ｉ ｕ 亮 氨 酸 ） 但 是 ｇ ｒ 无 论 是 一 步 诱 导 还 ｅ（ ８一 （ ｅ ， ｙＢ 是 多 步 诱 导 均 未 发 生 任 何 变 化 。研 究 认 为 Ｍｈｇ ｒ ｅ８ 一 ｙＡ Ｓｒ３ Ｉ ｕ与 对 喹诺 酮 类 药 物 的耐 药 性 有 关 ， ｅ 因此 揭 示 了 对 Ｍｈ耐 喹 诺 酮 类 药 物 分 子 机 制 的研 究 。
为经多步诱导产生高水平的耐药 ， 高水平 的耐药株 Ｄ 且 ＮＡ 螺 旋 酶 和拓 扑 异 构 酶 Ⅳ 的 基 因 同 时存 在 突 变 。表 明 曲 伐 沙 星 在 Ｍｈ上 的首 要 作 用 位 点 与 金 黄 色 葡 萄 球 菌 和 肺 炎 链 球 菌 一 致 ，
均 为拓 扑 异 构 酶 Ⅳ 。 国 内在 这 方 面 也 有 研 究 。张 冉 等 ｌ １ 于 ２ ０ ０ ０年 利 用 喹 诺
随后 有 学 者 又 于 １ ９ 利 用 氧 氟 沙 星 、 帕 沙 星 逐 步 诱 ９ ８年 斯 导 Ｍｈ耐 药 基 因 的 产 生 ， 以往 实 验 所 不 同 的 是 ， 补 充 了 对 与 其
Ｍ ｈ拓扑 异构 酶 Ⅳ 两个 亚基 的检 测 ， 且 还 分 析 了诱 导 时 间 长 而 短 与耐 药 强 度 的 关 系 。对 于 氧 氟 沙 星 ， 一 步诱 导 产生 ６ ］ 经 株 耐 药 株 ， 是 ｐ ｒ ｐ 天冬 氨 酸 ） ２ 一 Ａｓ （ 冬 酰 胺 ）第 ２ 仅 ａＥ Ａｓ （ ４６ ｎ天 ， 步诱 导 产生 ６株 耐 药 株 ， ３步 诱 导 产 生 ５株 耐 药 株 ， 时 出 第 此 现 了 ｇ ｒ ｅ８ － Ｌ ｕ或 Ｔ ｐ 色 氨 酸 ） 经 第 ４步诱 导 又 产 生 ｙ Ａ Ｓ ｒ３￣ ｅ ｒ（ ， ２ 耐药 株 。对 于斯 帕 沙 星 经 一 步 诱 导 产 生 ４株 耐 药 株 ， ２ 株 第 步 诱 导 产 生 ７株 耐 药 株 ， ３ 诱 导 产 生 １ 第 步 Ｏ株 耐 药 株 ， 与氧 氟
于静 波 综述 ， 孟冬娅△， 薛文成 审校
（ 中国人 民解放 军沈 阳军 区总 医院检验科 ， 沈阳 １ ０ ４ ） １ ８ ０
关键词 ： 支原 体 ， 型 ； 喹 诺 酮 类 ； 耐 药机 制 人
Ｄ １ １ ． ９ ９ｊ ｉ ｎ １ ７ — １ ０ ２ １ ． ９ ０ ７ Ｏ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ． ６ ３ ４ ３ ． ０ １ １ ． ２ ｓ
选 择 一 步 诱 导 后 发 生 Ｇｌ８ 一 Ｌ ｓ菌 株 ， 用 斯 帕 沙 星 进 一 步 ｕ４ ｙ 利
诱 导 产 生 ｇ ｒ ｌ８ 一 Ｌ ｓ ｙＡ Ｇ ｕ ７ ｙ 。选 择 ｇ ｒ ｌ８ 一 Ｌ ｓ的 菌 株 ｙＡ Ｇ ｕ ７ ｙ
用 机 制 是 作 用 于 细 菌 或 支 原 体 的 Ⅱ型 Ｄ ＮＡ 螺 旋 酶 ， Ｄ 即 ＮＡ 旋转酶和拓 扑异 构 酶 Ⅳ， 止 Ｄ 阻 ＮＡ 复 制 、 复 ， 色 体 的 分 修 染
氨 酸 ） ７ Ｉ ｓ赖 氨 酸 ） 经 氧 氟 沙 星 一 步 诱 导 株 检 测 到 ｐ ｒ ８一 （ ｙ ； ａ（ ＂
Ｓ ｒ ０ ￣ ｌ 和 Ｇ ｕ ４ Ｌ ｓ 再 选 择 ｐ ｒ ｅ ８ ￣ Ｉ 株 利 用 氧 ｅ８ － Ｉ ｅ ｌ８ 一 ｙ 。 ａＣ Ｓ ｒ ０ ＂ ｌ ｅ
氟 沙 星 进 一 步 诱 导 ， 第 ２步 诱 导 发 生 了 ｇ ｒ ｅ８ 一 Ｉ ｕ 且 ｙＡ Ｓ ｒ３ 。 ３ （ ０ １ ｌ － ２ ６０ ｌ ７ — １ ０ ２ １ ） ９２ ２ ２
人 型 支 原 体 （ ｃｐａｍ ｏ ｎｓＭｈ 是 人 类 泌 尿 生 殖 系 ｍｙｏ ｌｓ ａｈ ｍｉ ， ） ｉ
１ ９ 用 斯 帕 沙 星 和 氧 氟 沙 星 诱 导 Ｍｈ标 准 株 Ｇ ５导 致 耐 ９ ９年 Ｘ５
两个亚基组成 ， 别 由 ｇｒ ｇｒ 分 ｙＡ、ｙＢ基 因 编 码 ； 扑 异 构 酶 Ⅳ 由 拓 ｐ ｒ ｐｒ ａＣ、ａｅ两 个 亚 基组 成 ， 别 由 ｐ ｒ ｐｒ 分 ａＣ、ａＥ基 因 编 码 。 当碱
基 发 生 突 变 时 ， 致 所 编 码 的 氨 基 酸残 基变 异 ， 而 全 酶 改 变 ， 导 从 阻止 喹 诺 酮 类 药 物 进 入 作 用 区 ， 生 耐 药 或 交叉 耐 药 现象 。 现 发 就 近 年来 所 研 究 的 Ｍｈ耐 喹 诺 酮 类 药 物 的 分 子 机 制 综述 如 下 。
沙 星 相 比较 仅 经 一 步 诱 导 便 出 现 了 ｇ ｒ ｅ８ － Ｌ ｕ或 Ｓ ｒ４ ｙＡ Ｓ ｒ ３ ￣ ｅ ｅ８
酮类 药物 （ 氟 沙 星 、 氧 氟 沙 星 、 酸环 丙 沙 星 、 帕 沙 星 ） 氧 左 盐 斯 对
Ｍｈ 准 菌 株 Ｐ １进 行 诱 导 耐 药 ， 所 筛 选 出 的 耐 药 株 的 标 Ｇ２ 对 ｐｒ ａｅ基 因进 行 序 列 分 析 ， 氟 沙 星 和 左 氧 氟 沙 星 所 诱 导 的 氧 ｐｒ ａＥ基 因第 ７ Ｏ位 Ｇ Ａ， 致 ｐ ｒ ｝２ 一 Ａｓ ， 们 认 为 — 导 ａＥ Ａｓ４ ６ 】 ｎ他 ｐｒ ａＥ基 因 第 ７ Ｏ位 突 变 与 Ｍｈ对 喹 诺 酮 类 药 物 耐 药 有 关 。 随 后 其 利用 同样 的方 法对 临床 敏 感 株 也 进 行 了诱 导 耐 药 ， 分 析 在 ｐｒ ａｅ的 同 时 还 对 ｇ ｒ 进 行 分 析 ， 了 得 出 与 前 述 实 验 一 致 的 ｙＡ 除 结 论 外 ， 发 现 经 环 丙 沙 星诱 导 后 的耐 药 株 的 ｇ ｒ 第 ¨ ３位 还 ｙＡ
野 生 菌 株 Ｐ １进 行诱 导 耐 药 ， 进 行 了一 步诱 导 又 进 行 了 多 Ｇ２ 既
步诱 导 。进 行一 步诱 导 的 菌 株 耐 药 性 和 基 因均 未 发 现 任 何 变 化， 而进 行 多步 诱 导 的菌 株 ， 药 程 度 最 高 的 ４株 均 发 生 ｇ ｒ 耐 ｙＡ
Ｉ 。且 发 现经 ２ 诱 导 的氧 氟 沙 星 和 斯 帕 沙 星 的 最 小 抑 菌 浓 １ ｅ 步 度 均 显 著 增 加 。他 们 认 为 斯 帕 沙 星 诱 导 ｇ ｒ 突 变 ， 首 要 作 ｙＡ 其
用 靶 位 是 ＤＮ 旋 转 酶 ， 氧 氟 沙 星 诱 导 ｐ ｒ 突 变 ， 首 要 作 Ａ 而 ａＣ 其
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国 际检 验医 学杂志 ２１ ０１年 １ １月第 ３ 卷 第 １ Ｉ ｊＬｂＭｅ ，ｏｅ ｂｒ ０１Ｖ １３， ．９ ２ ９期 ｍ ａ ｄＮ ｖｍ ｅ １ ，ｏ．２Ｎｏ１ ２
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综
述 ・
人型 支原 体 对 喹诺 酮 类药 物耐 药 的分 子机 制研 究
一 Ｔｒ， ｐ ｒ ｌ（ 氨 酸 ） ４ Ｉ ｓ 赖 氨 酸 ） 第 ２步 诱 导 ｐ 而 ａＣ Ｇ ｕ 谷 ８一 （ ｙ 需 后 才 产 生 。此 外 还 发 现 了 ｐ ｒ 非 热 点 突 变 Ａｓ６ 一 Ｔ ｒ和 ａＣ ｐ９ ｙ
Ａｒ （ 氨 酸 ）３ Ｈｉ（ 氨 酸 ） 并 分 析 了抑 菌 浓 度 氧 氟 沙 星 、 ｇ精 ７ 一 ｓ组 ， 诺 氟 沙 星 、 酸 环 丙 沙 星 和 培 氟 沙 星 在 液 体 培 养 基 中 传 １ 代 盐 ２ 的耐 药 菌 株 的基 因突 变 情 况 。发 现 经 盐 酸 环 丙 沙 星 和 诺 氟 沙 星 诱 导 株 均 发 生 ｐｒ ａＥ基 因 Ａｓ４ ６ Ａ ｎ 经 氧 氟 沙 星 和 培 氟 ｐ２一 ｓ ；
还 可 引 起 非 泌 尿 生 殖 系 统 感 染 ， 别 是 免 疫 力 低 下 的 人 群 。 特 喹 诺 酮 类 药 物 是 治 疗 Ｍｈ的常 用 药 物 之 一 ， 近 年 来 其 耐 药 性 但 增 加 有 统 计 学 意 义 ， 地 区耐 药 率 已 高 达 ７ 左 右 ｌ 本 Ｏ ６。其 作
药 ， 别 于一 步 诱 导 和 ２步 诱 导 后 检 测 其 耐 药 和 基 因 突 变 情 分 况 ， 斯 帕沙 星 一 步 诱 导 株 检 测 到 ｇ ｒ ｅ８－ Ｌ ｕ和 Ｇ ｕ 谷 经 ｙＡ Ｓ ｒ３￣ ｅ ｌ（
统感染 的常见病 原菌 ， 单 独感 染不常见 ， 其 只有 ０ ８ 常 与 解 ． 脲 脲 原 体 混 合 感 染 ［ 。其 不 仅 可 感 染 泌 尿 生 殖 系 统 引 起 子 宫 １ 内膜炎 、 腔炎 、 孕、 盆 不 自然 流 产 、 产 、 早 胎膜 早破 、 后 感 染 等 ， 产
离 、 录 等 ， 而 达 到 杀 菌 的 目的 。ＤＮ 旋 转 酶 由 ｇ ｒ ｇ ｒ 转 从 Ａ ｙＡ、 ｙＢ
利 用 斯 帕 沙 星 进 一 步诱 导产 生 ｐ ｒ ｅ８￣ Ｉ ， 用 氧 氟 沙 星 ａＣ Ｓｒ０ ｌ 利 ｅ 进 一 步 诱 导 产 生 ｐ ｒ ｌ８ ￣ Ｌ ｓ ａＣ Ｇ ｕ ４ ｙ 。选 择 ｇ ｒ ｅ８ － ｕ突 ｙＡ Ｓ ｒ３ ｅ ＋Ｉ 变 株 利 用 氧 氟 沙 星 和 斯 帕 沙 星进 一 步 诱 导 产 生 ｐ ｒ ｅ８ － ａＣ Ｓｒ０ ￣