非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变

!实验研究!
非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变
李才锐( !+ !姜德咏+ !孙曙光( !洪!卫(
基金项目!中国云南省科技厅资助课题 ! " # $UE [(*%[& # ’ 中国湖 南省科技厅资助课题! " # $ &[=h %&%[ ^ %# 作者单位$( ! Z’(&&& # 中国云南省大理市" 大理学院附属医院眼 科’+ ! [(&&(( # 中国湖南省长沙市"中南大学湘雅二医院眼科 作者简介$李才锐"男" 博士" 副主任医师" 眼科主任" 院长助理" 研究方向$玻璃体视网膜病% 通讯作者$李才锐$; 7 < V< 5 9 9 2-# 9 1 . : ; $ 7 # 1 收稿日期$+&&’8 (&8 (+!!修回日期$+&&’8 ((8 () , ) * & ( , 32 & ( , . % 7 ) ( = ( & ’’ 1 "S " =4/ =N "R b : ? M : . /0@ Q # /0g$\ . < ; E6: . V5 9 : 7< 5 9 : /# A. 9 -E# 3 W /9SX A-9 -. ; 1 # ; 4# Y :Q . /U5L . , -: /# /8 # V5 C 56: . V5 9 5 C1 : 7 5 $ !N #" +&&’ ’’ ! Z # $()*(8 ()*[
1 %" # 5 .6 ( %# ( 6 ’ 7: $ Q 4//. / K < # G : /7 : . ;=7 : 5 /7 5. /6 f 5 7 -/# ; # 0 E "? !" -: /. # $UE [(*%[& # ’ R 4/. /K < # G : /7 : . ; =7 : 5 /7 5 . /6 @ 5 A. < 9 1 5 /9 -: /. # $ &[=h %&%[ ^ %# f 5 7 -/# ; # 0 E@ 5 A. < 9 1 5 /9 "? !" ( " 9 @ 5 A. < 9 1 5 /9# 3X A-9 -. ; 1 # ; # 0 E -5 B 3 3 : ; : . 9 5 6 R # C A: 9 . ;# 3@ . ; : ? # ; ; 5 0 5 . ; :Z’(&&& " Q 4//. / K < # G : /7 5 -: /. 5 A. < 9 1 5 /9# 3 " @ " ? ’+ @ -5 =5 7 # /6 H : . /0 E .R # C A: 9 . ;# 3? 5 /9 < . ;=# 49 X A-9 -. ; 1 # ; # 0 E " 9 "? "? -. /0 C -. [(&&(( " R 4/. /K < # G : /7 5 -: /. F /: G 5 < C : 9 E 8 %9 9 ’ : ; %# 5 ’ # < ’ 6 %$ ? . : 8 M 4: b : $ @ 5 A. < 9 1 5 /9 # 3 X A-9 -. ; 1 # ; # 0 E -5 "9 "@ . ; : Z’(&&& " Q 4//. /K < # G : /7 5 " B 3 3 : ; : . 9 5 6R # C A: 9 . ; # 3 @ . ; : ? # ; ; 5 0 5 ? -: /. $; 7 < V< 5 9 9 2-# 9 1 . : ; $ 7 # 1 (&8 (+!!B 7 7 5 A9 5 6$ +&&’8 ((8 () M 5 7 5 : G 5 6$ +&&’8
= # 6 ’ 9 # .6 ( %# wenku.baidu.com> /%" 9 # .> %? @ ; 4 6 4 .> 7%> %+A" B %> C D" E %C F" G ’ < C HIID $IHK, LHHMNODHP J ’ > $= Q 7.( > /@C HIIIROFSC < %7P T T T C = /@C < #
< % 3 & 0+ " % / ’ " 2 3 ’ " . ) , % : 0) 6. ) . ; ) / ’ #’ + " % / ’ ’ # 1" 2’
( "+ ( 8 .( , Y " ( V ( " G ’ , * %# + /( .# ++ " W 4 " , $ " .# + W " # " X’ ( ( %# +
摘要 目的!研究早期糖尿病视网膜病变的小鼠模型 % 方法!" X @小鼠随机分为正常对照组 ! [ "(+‘ U 组" & m ]# 和糖尿病组 ! [ "(+‘ U 组" & m (+ # " 每组取 [‘ U 和 (+‘ U处 死小鼠"光镜和电镜观察视网膜结构的改变 % 结果!糖尿病组 [‘ U 时毛细血管基底膜增厚 " 可见内皮细 胞*周细胞和神经节细胞超微结构改变 % (+‘ U 时基底膜 明显增厚"内皮细胞*周细胞和神经节细胞凋亡增加% 结论!在糖尿病早期发生了视网膜神经元细胞超微结构病 变和微血管病变% 关键词!" X @小鼠 ’# 型糖尿病’ 糖尿病视网膜病变
$ # O $
国际眼科杂志!!" # # $ 年% "月第 $ 卷!!!第 &期 " ’ ( ) " " * + % $" ! 电子信箱!, . / " # # # 0% & 1 / 2 3 4 电话!#
醛液固定 眼 球 " 石 蜡 包 埋 % 切 Z " 1的 切 片 在 光 镜 下 定 位 " 常规 R \染 色 " 光 学 显 微 镜 下 ! 双 盲 法 # 观 察 视 网 膜 结构 " 选择满意 部 位 用 数 码 照 相 机 拍 照 " 再 利 用 北 航 医 学图像分析 系 统 进 行 视 网 膜 厚 度 的 分 析 % 另 取 对 照 组 和糖尿病组小 鼠 " 于 糖 尿 病 第 [‘ U 和 (+‘ U 摘除眼球法 处死小鼠 "%&0 ^ b戊 二醛溶液 固定眼 球 " 环 氧 树 脂 包 埋 % 1的半 薄 切 片 在 光 镜 下 定 位 % 后 做 超 薄 切 片 " 醋 切 (" 酸双氧铀和 枸 椽 酸 铅 双 重 染 色 % 透 射 电 子 显 微 镜 观 察 视网膜超微结构的改变并选择满意部位拍照 % 凋亡细胞 体积变小 " 细 胞 质 浓 缩 % 细 胞 核 内 染 色 质 高 度 盘 绕 " 出 现空泡结构为 凋 亡 ( 期 ’ 细 胞 核 的 染 色 质 高 度 凝 聚 * 边 缘化为 +. 期 ’ 细胞核裂解为碎块 " 产生凋亡小体为细胞 凋亡的 +V 期 ! 晚期 # % 统计学处理$所测数据采用 =K == (&$ & 统计软件包进 检验及相关分析方法进行 行处理"采用双因素方差分析*( 统计"!d &$ &) 为显著统计学差异 % %结果 \染色检查发 % $ $常规显微镜检查 ! 正常对照组小鼠 R 现视网膜 (& 层组织排列整齐 " 未见异常改变% 糖尿病组 \染色发现视网膜增厚 " 以内丛状层和视杆* 视锥 小鼠 R 细胞层增厚明显% 视网膜排列较正常组紊乱! 表 ( # %
!引言 "@ # 是糖尿 . V5 9 : 7< 5 9 : /# A. 9 -E M 糖尿病视网膜病变 ! 6: 病常见的并发症% 但糖尿病视网膜病变的发病机制尚未 完全阐明"其预防及治疗仍不完善 " 尤其对于疾病的早期 诊断*预防及治疗尚不完善% 因此糖尿病视网膜病变的早 期病变研究已成为目前的研究重点 (("+) % 非肥胖性糖尿病 /8 # V5 C 56: . V5 9 5 C X @ ! /# "" # 小鼠是指一种遗传性 # 型糖尿 病的啮齿类动物模型 "该病的发病机制受遗传和环境因素 的双重影响 (%) % 本动物模型与 人类 # 型糖 尿病相 似 ([) % 目前 " X @小鼠视网膜病变的专门性研究尚未见报告 % 我 们利用 " X @糖尿病鼠观察视网膜的早期病变情况 % $材料和方法 $ $ $材料 !" "购 X @^ b 9 小鼠 %& 只" 鼠龄 [‘ U" 体质量 (Z0 自美国 S . 7 UC # / 实验室 % 在无特定病原体 ! C A5 7 : 3 : 7 8 A. 9 -# 8 0 5 /3 < 5 5 > "=K # 环境下繁殖饲养! 恒温 ++a" 湿度 ))k# " 自 由饮净化水和全价营养颗粒喂养% 每周用电子天平测小 鼠体质量和进食量 ( 次% X /5 8 f # 47 - ! 快速血糖仪* 血糖 试纸! 美国强生公司 # " 尿糖试纸 ! 苏州制药厂 # " \ =8 Z&&= 电子天平! 长沙湘平科技发展有限公司 # " 透射电子显微 镜! 日立 R 8 Z&& # % 饲养 " X @小鼠的营养配方饲料" 常规 高压灭菌% $ $ %方法 ! 鼠龄 (&‘ U 开始每周检测尿糖 + 次 " 发现尿糖 强阳性后用血糖仪测血糖 " 连续 + 次血糖 #(Z$ ’1 1 # ; ^ b 诊断为糖尿病 % 已发生糖尿病的 " X @雌鼠作 为试验 组 (+ # " 随机 分 为 糖 尿 病 第 [‘ U 及 (+‘ U + 组" 每 组 Z !& m 只 % 未发病的同龄 " X @雌鼠作 为 对 照 组 ! & m ] # "根据 时间 [ "(+‘ U 分 + 组% 取 对 照 组 和 糖 尿 病 组 小 鼠" 于 糖 尿病第 [‘ U 和 (+‘ U 摘除眼球法处死小鼠 "[&0 ^ b多聚甲
李才锐"姜德咏"孙曙光"洪卫$ 非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网 国际眼科杂志"+&&’ ’’ ! Z # $()*(8 ()*[ 膜病变$
4 / #3 % 2" #$ $ %’( 5 1 =0, 3&0% 1 & + ’ % 8 & ) 2 + =1 , ) * & ( , 3 2 & ( , . % 7 ) K !! ( = A $ ? $ C D < > % . K % * & ’& 1 , ) * & ( & ’ !? D <# 0, 3& /& 2 & ! #B 1 , 4 , 1 & 1) (2 ) . 1 % 0 , . ( % ) 3% . ( 2 % +9 2 % 5 7 ! #/ " # ) . 1) 1 , ) * & ( , 39 2 % 5 7 ! #/ $’ # A$ &0, 3&, .* % ( -9 2 % 5 7 ’ /& 2 & & 6’ ) . 1 $’ /& & 6’" ) . 1 + , 9 () . 1 ’) 32 , 8 , 3& 1) ( ! /& & + & 3( 2 % . , 3 0, 32 % ’3% 7 & ’ /& 2 &5 ’& 1( %% * ’& 2 4 &2 & ( , . ) + 3) . K 9 & ’A B > N O $ > . 3, 1 & . 3&% 81 , ) * & ( & ’ , . %# /& & 6’ ? D < $ $# " !: ’1 0, 3&, ’ "’ V! !$ J &# # ’ , ( ’) 4 & 2 ) 9 &( , 0&, ’ $%" A ’ 0 %" A ) = ’A ’# : & ( , . ) + 3) 7 , + + ) 2 = * ) ’& 0& . ( 0& 0* 2 ) . & * & 3) 0& ( , 36& . & 1) . 15 + ( 2 ) ’( 2 5 3( 5 2 &3) . 9 & ’ % 8 & . 1 % ( & + , ) + 3& + + ’" 7 & 2 , 3= ( & ’) . 19 ) . 9 + , % .3& + + ’ /& 2 &% * ’& 2 4 & 1, .( &! K /& & 6 1 , ) * & ( , 3 0, 3& A: & ( , . ) + 3) 7 , + + ) 2 = * ) ’& 0& . ( 0& 0* 2 ) . & * & 3) 0&( , 36& . & 12 & 0) 2 6) * + = A! 7 % 7 ( % ’, ’ % 8& . 1 % ( & + , ) + & 2 , 3= ( & ’ ) . 19 ) . 9 + , % . 3& + + ’ , . 32 & ) ’& 1, .( & $’ K 3& + + ’" 7 /& & 61 , ) * & ( , 3 0, 3& A $ ; D ? ; O N > " D ? N + ( 2 ) ’( 2 5 3( 5 2 &3) . 9 & ’ % 8 2 & ( , . ) + . & 5 2 % . ! 3& + + ’ ) . 12 & ( , . ) +0, 32 % ) . 9 , % 7 ) ( = /& 2 &% * ’& 2 4 & 1, .( & & ) 2 + = ’( ) 9 &% 81 , ) * & ( & ’A ? D < 0, 3& ) 2 &9 % % 1) . , 0) + 0% 1 & + ’8 % 2 & ) 2 + =1 , ) * & ( , 32 & ( , . % 7 ) ( = A B R PD : < > % . K % * & ’&1 , ) * & ( & ’ 0, 3& = 7 &% . &1 , ) * & K $. ’( !Q