酶活性的影响因素
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酶活性的影响因素Vane
VaneVane
Vane知识背景
知识背景知识背景
知识背景?pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂
等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶
的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以
影响酶促反应的速率。
?纳氏试剂（Nessler）是指一种利用红外－可见分
光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量
?Nessler
光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量
的试剂。
?碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生
成红棕色胶态化合物，此颜色在波长420nm左右
会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合
物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反
应液的吸收值而测定氨氮的含量。实验原理：?尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和
二氧化碳
?新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成
NH3
?CO(NH2)2 + H2O ------ 2NH3 + CO2?CO(NH2)2 + H2O ------ 2NH3 + CO2
?尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，
在NaOH环境下生成Na2CO3和NH3、NH3与纳氏试剂作
用，生成棕黄色碘化双汞胺
尿素酶NaOH
?CO(NH2)2 + H2O ------------ ( NH4 )2CO3 ------------
NH3
?NH3 + 纳氏试剂(HgI2.2KI) ------------ NH2.Hg2I3 (棕
黄色)实验材料：器材：
控温水浴锅（每个实验室3个），制冰机，
电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、
移液管（1-2ml）移液管（1-2ml）
试剂：
蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液，
大豆尿素酶溶液，0.1%CuSO4，0.1%HgCl2，
0.1%NaCl，1M NaOH，0.5M H2SO4，纳氏
试剂，班氏试剂，各种pH缓冲液：5.0；6.8；
8.0酶活性的影响因素假设
酶活性的影响因素假设酶活性的影响因素假设
酶活性的影响因素假设?1、
、、
、酶的活性受
酶的活性受酶的活性受
酶的活性受pH的影响
的影响的影响
的影响
?2、
、、
、酶的活性受底物特异性的影响
酶的活性受底物特异性的影响酶的活性受底物特异性的影响酶的活性受底物特异性的影响
?3、
、、
、酶的活性受温度的影响
酶的活性受温度的影响酶的活性受温度的影响
酶的活性受温度的影响
?4、
、、
、酶的活性受重金属离子的影响
酶的活性受重金属离子的影响酶的活性受重金属离子的影响酶的活性受重金属离子的影响1、
、、
、酶的活性受
酶的活性受酶的活性受
酶的活性受pH的影响
的影响的影响
的影响?步骤
?1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4
?2、将1%尿素液3ml分别倒入四支试管中
?3、向前三支支试管中分别倒入1ml的pH为5.0，
6.88.01ml
?31mlpH5.0
6.8，8.0的缓冲液，四号试管加入1ml的蒸馏水
?4、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，
轻摇后静置3分钟
?5、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。
?6、观察并记录实验现象实验记录项目
底物
（/ml）
加入的
pH和蒸
馏水
（/ml）
纳氏试剂
（/ml）
实验现象
试管1试管1
试管2
试管3
试管42、
、、
、酶的活性受底物的特异性的影响
酶的活性受底物的特异性的影响酶的活性受底物的特异性的影响
酶的活性受底物的特异性的影响?步骤
?1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4
?2、向四支试管中分别加入3ml的蒸馏水，
1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液?3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶
液五滴，轻摇后静置3分钟
?4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，
摇匀。
?5、观察并记录实验现象实验记录项目
底物
（/ml）
大豆尿素
酶溶液
（/ml）
纳氏试剂
（/ml）
实验现象
试管1试管1
试管2
试管3
试管43、
、、
、酶的活性受温度的影响
酶的活性受温度的影响酶的活性受温度的影响
酶的活性受温度的影响?步骤
?1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4
?2、向四支试管中分别加入3ml0.1%尿素液
?3、将四支试管分别置于0oC，30oC，100oC，室
10
?30oC30oC100oC
温的水浴中预温10分钟
?3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，
轻摇后静置3分钟
?4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。
?5、观察并记录实验现象实验记录项目
底物
（/ml）