TRPC6介导的自噬调控机制及其在近端肾小管细胞氧化应激损伤中的作用研究.doc
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TRPC6介导的自噬调控机制及其在近端肾小管细胞氧化应激损
伤中的作用研究
活性氧（reactive oxygen species,ROS）是在生物体内氧代谢过程中产生的高活性含氧物质的总称,包括过氧化物、超氧化阴离子和羟自由基等,既是正常代谢的副产物,也可以在病理条件下产生,如肾缺血/再灌注
（ischemia/reperfusion,I/R）损伤。正常情况下,ROS在细胞的信号转导和维持细胞内稳态中发挥重要作用,但是ROS的过度生成会引起氧化应激反应,对细胞产生损伤。例如在肾的I/R损伤中,ROS导致的氧化应激使肾近端小管细胞（proximal tubular cells,PTC）受损。
自噬（Autophagy）在细胞损伤修复中扮演着重要角色,它是普遍存在于大部分真核细胞中的一种现象,可通过溶酶体介导降解细胞内长寿蛋白和受损的细胞器。自噬既是正常情况下维持细胞内稳态的重要保守机制,也是一种细胞在外界压力、饥饿、缺氧和内质网应激等特殊情况下的自我生存机制。自噬机制的受损与肿瘤、神经退行性疾病、代谢相关疾病、免疫性疾病等发病过程密切相关。
大量证据表明,自噬与非选择性阳离子通道超家族TRP（transient receptor potential）有着密切联系。经典型瞬时受体电位通道6（transient receptor potential canonical6,TRPC6）是TRP中的一员,在肾脏疾病中发挥重要作用。然而,在肾的近端小管细胞中,TRPC6与自噬的关系以及它们在肾氧化应激损伤
中的作用尚不清楚。
本研究采用野生型（wild type,WT）小鼠和TRPC6基因敲除
(TRPC6-/-)小鼠作为实验材料及研究对象,利用肾小管体外贴壁培养法培养原代近端小管细胞,利用分子生物学方法探讨了TRPC6在ROS导致的
PTC自噬中的作用及其对细胞凋亡的影响。在本研究中,我们发现氧化应激触发PTC中TRPC6依赖的Ca2+内流,进而抑制自噬,使细胞更容易死亡。我们还证实TRPC6基因敲除(TRPC6-/-)或利用SAR7334抑制TRPC6均可增强自噬流,减轻氧化应激导致的PTC凋亡。
TRPC6敲除的保护性作用可以被自噬抑制剂氯喹（Chloroquine,CQ）和巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1,BAF）所阻止。此外,本研究还表明,阻断TRPC6可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR和ERK1/2信号通路促进自噬流。本研究首次证明TRPC6介导的Ca2+内流在抑制PTC氧化应激诱导的细胞保护性自噬中具有重要作用,TRPC6可能成为未来防治肾氧化应激损伤的新靶点。