棘球蚴病

摘要
诊断狗或其他易感食肉动物的棘球蚴病的依据是从其粪便或小肠中检出棘球绦虫。

中间宿主棘球蚴病的诊断依据是从几乎所有器官，特别是肝和肺中查出棘球蚴。

病原鉴定目前分类学上公认棘球绦虫属有四个种，即细粒棘球绦虫，多房棘球绦虫、少头棘球绦虫、伏尔格利棘球绦虫。

后两种很少感染动物。

这四个种的成虫和幼虫阶段在形态上都不相同。

而且，许多种问、种内变种已有报道，特别是细粒棘球蚴绦虫，但惟一可靠的鉴定基础是DNA分析。

肉眼往往能发现组织器官中的棘球蚴。

做绵羊棘球绦虫检查时要格外留意可能存在的水泡绦虫感染。

福尔马林固定的病料经常规方法染色后，组织学检查可以进行确诊。

过碘酸希夫反应(PAS)阳性的无细胞堆积层(不管有没有问质细胞性核胚芽层膜)的存在是棘球绦
虫中绦期的一种示病性特征。

检查野生动物或家犬棘球属绦虫成虫时，取小肠收集虫体。

一般都会采用槟榔素作为调查的一种手段，来查明犬是否流行绦虫病。

工作人员处理病料时，要谨慎操作，以防传染。

对于成虫感染，检测粪便中的抗原在免疫学试验进展方面是一个重大的进步。

终末宿主的多房棘球蚴绦虫的PCR／DNA检测方法已经成熟，但是细粒棘球蚴仍然没有检测方法。

血清学试验在被感染的犬和羊的血清中可检测到六钩蚴、囊胞液和原头蚴的抗体，但是由于不能鉴别流行期和早期感染，所以这个试验仍然没有可操作性。

对疫苗和诊断用生物制品的要求正在研制预防幼虫的优良疫苗，但是仍然没有细粒棘球蚴成虫的疫苗。

A诊断技术
目前在分类学上公认的棘球绦虫属的四个种是细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、少头棘球绦虫及伏尔格利棘球绦虫，后两种限于中美和南美。

这些是成虫和幼虫阶段在形态学上的区别。

已经有大量报道种内和种问变异。

尽管近来很重视细粒棘球蚴的基因型，但仅有四种描述被分类学所接受。

明确不同基因的完整排列需要进一步的研究。

·细粒棘球绦虫
寄生虫在家犬和大量有蹄动物中传播，犬／羊循环最重要，森林动物的中间和终末宿主也能感染细粒棘球蚴，例如狼和鹿。

成虫长2～7mm，一般有3～4个节片，很少有6个节片的，倒数第二个节片是成熟节片，生殖孔位于成熟节片和孕卵节片的中后方。

最后一个节片(孕卵节片)的长度通常比整个成虫的一半还要长。

原头蚴顶突上有二排小钩，钩的大
小不同，第一排长为22～45um，第二排长为18～38um。

含卵子宫发育良好，呈囊状。

在幼虫阶段只是充满液体的水泡或有室的囊泡，虽然也有一些小室相通，但它只是一个单室小腔。

呈扩张型生长，并可能产生内源性子囊，单个水泡的直径可达30cm并且最频繁地出现在肝和肺，也可能发展到其他组织，被称为细粒棘球蚴囊。

细粒棘球绦虫专属寄生于家畜循环包括：犬和绵羊：地中海地区，南美(阿根廷、巴西、智利、秘鲁和乌拉圭)，非洲(埃塞俄比亚、肯尼亚和苏丹)，中东和地中海东部诸岛譬沿岸诸国在内的地区，俄罗斯，中亚(哈萨克、吉尔吉斯斯坦和乌兹别克斯坦)，蒙古，中
国和大洋洲；犬和马：比利时，爱尔兰，意大利，瑞士和英联邦；犬和牛：比利时，德国，南非和瑞士；犬和猪：波兰；犬和驯鹿：挪威北极圈附近地区、瑞典和阿拉斯加。

犬和骆驼专属寄生情况需要进一步查明。

．多房棘球绦虫．
寄生虫在野生动物终末寄主之间传播(例如：狐狸，)和小啮齿动物(田鼠和旅鼠)。

家犬和猫易感，而猫比犬不易感。

成虫长1.2~3.7mm，通常有4～5个节片，倒数第二个节片是
特征性成熟节片。

生殖孔位于成熟节片和孕卵节片中前方开口。

含卵子宫呈囊状。

在顶突上有钩，大的为27．6～34．3um，小的为22·7～31.0um。

中绦期是由一种多泡性结构、直径通常不超过几毫米的小水泡聚集而成的。

囊蚴与细粒棘球蚴不同，通常含有半固体而非液体基质。

幼虫通过发芽增殖，因而导致组织浸润，通常称之为泡状棘球蚴。

珍头棘球绦虫
通常以野猫为终末宿主，(如：细腰猫），大的啮齿动物(如：蓬刺鼠属，天竺鼠)为中间宿主。

成虫长1．9～2．9mm，一般都有3个节片，倒数第二个节片是成熟节片。

生殖孔位于成熟节片中前方，大致在孕卵节片的中部。

含卵子宫呈囊状。

中绦期具有多室性，充满液体，有形成分隔和多室的倾向，原始头节的钩状突起上紫钩长25．9～27．9um，单个囊的直径达5cm左右。

其好嗜部位为内脏器官和肌肉。

至今，只有三个关于人类患本病的报道。

在犬体内没有出现成虫。

．伏尔格利棘球绦虫
伏尔格利棘球绦虫的终末宿主通常是灌木犬，但家犬易感，中间宿主是大啮齿动物(如：天竺鼠)。

成虫长3．9～5-6mm，一般有三个节片，倒数第二个节片是成熟节片。

生殖孔位于成熟节片和孕卵节片中部后方。

含卵子宫没有侧囊，呈特征性的长管状。

与其他节片相比呈囊状结构。

中绦期和少头棘球蚴相似。

据报道，区别这两个种的方法是比较其大小和在原始头节上钩状突起的钩的比例，少头棘球蚴的钩长，大的为25．9～37．9um(平均33·4um)，小的为22．6～29．5um(平均25．45um)。

而伏尔格利棘球绦虫的钩长为19·1～43·9um(平均41．64um)，小的为30．4～36．5um(平均33．6um)。

少头棘球球绦虫的钩鞘和钩为50：50，而伏尔格利棘球涤虫为30：70。

据报道，超过40人感染伏尔格利棘球绦虫；大多数感染本病起因于家犬，在猫体内没有发现成虫。

一般称为多囊棘球蚴。

1．病原鉴定
中间宿主的诊断需要检查器官中生长的卵囊子囊的形态，特别是在肝和肺中多见。

犬或其他食肉动物棘球蚴病的诊断，需从其粪便和小肠中找到棘球绦虫。

a)棘球蚴病的诊断
·剖检
有许可证的屠宰场可以对家畜的棘球蚴病作出诊断，对野生动物的诊断只能靠野外检查。

样品要用4％～10％福尔马林盐水固定和防腐，也可以冷藏和冷冻保存供以后检查。

可以在许多器官中直接观察到棘球蚴，但对大动物如绵羊和牛，必须用手触摸或剖开观察。

猪、绵羊和山羊可感染水泡绦虫(r．hydatigena)，当这两种寄生虫在肝脏中都存在时，很难将它们区别开来。

猪蛔虫也可在绵羊肝脏形成“白点”，增加诊断难度。

对野生动物如
哺乳动物和啮齿动物鉴别诊断时，应考虑几种其他的绦虫幼虫。

样本经福尔马林固定后，可用常规组织学染色。

棘球绦虫中绦期的一个独特的特征是：具有PAS阳性的无细胞堆积层(有或无核胚芽层膜)。

在育囊内或在包囊沙中的原头节的存
在也是其诊断特征。

细粒棘球蚴的基因型一般从保存于90％的乙醇中原头节获得DNA。

b)食肉动物成年绦虫诊断
·剖检
研究野生动物绦虫病都用剖检的方法，如果是家犬应选择安死术。

需要强调的是，必须作棘球绦虫成虫的分离鉴定工作，因为通常条件下检查粪便时不可能对棘球绦虫卵和其他绦虫卵作出鉴别。

被检动物死后，需尽快取出小肠，并结扎两端。

如材料不用冷冻或4％～10％的福尔马
林固定，则应迅速检查，否则虫体在24小时内会被消化。

4％～10％福尔马林不会杀死虫卵。

将新鲜小肠切成数段，浸泡于37℃盐水中待检查，附着于肠壁上的虫体可以用放大镜看到并计数(细粒棘球蚴和伏尔格利棘球绦虫)。

为精确计数，未固定的肠段最好切成4～6 段，切开浸于37~C盐水中30分钟，以便释放虫体，肠内容物冲洗到另一容器中，作细致检查，用刮片刮肠壁，病料煮沸后过筛冲洗除去颗粒，冲下来的内容物和碎屑置于黑色器皿中，用放大镜和光学显微镜作虫体计数。

通常在犬小肠的1／3段发现细粒棘球蚴。

·黏膜括取物
用于棘球蚴检查而剖检的狐狸(或犬)的尸体或小肠，剖检前应当在一70～一80％冷冻3～7天。

多房棘球蚴的卵可抵抗一50~C的冷冻。

应当在显微镜下刮取小肠黏膜，并且将黏附物取下置于一个方形塑料彼得里培养皿中。

刮取时应在120倍的实体显微镜下边滑动边检查。

建议将小肠分前、中、后三段，每段各刮取5处黏膜，共15个。

一般在／J,N~9第二段
的中问发现多房棘球蚴。

·样品保存
由于虫体脆弱，所以作形态研究时最好用巴氏吸管把虫体移到生理盐水中。

洗去杂质，静置约30分钟，虫体停止活动后，将上层液体去掉，加5％～10％的冷福尔马林(5℃)或FAA固定液(80t~L 95％的乙醇，lOmL 37％～40％甲醛，5mL冰醋酸)再作用12小时。

染色：用蒸馏水将虫体洗15分钟，：]=Mayer’s副胭脂红染液(1．0g胭脂红酸，0．5g氯化铝，4．0g氯化钙，100mL70％乙醇)染色12～24小时。

NXo．5％～1．0％盐酸溶液数秒钟去掉多余的染料。

然后在浓度递增的乙醇(35％、50％、70％、85％、95％、100％)分别脱水15 分钟，在100％乙醇中浸2次。

用二甲苯除去酒精(10分钟)，再用甲基水扬酸盐或木馏油
去污。

在用任何适当的基质和树脂如香脂、picolyte等进行包埋之前，应用二甲苯清洁样品几分钟。

进行以上检查时，工作人员有被感染的危险，应采取相应措施避免感染。

感染材料
在一80‘℃冰冻48小时或一70℃4天可去掉污染。

焚烧口罩、手套及围裙。

尽管氢氧化钠能够杀死一部分卵，但化学消毒不可靠。

污染材料加热消污。

降低湿度(40％)、提高室温(30℃)至少48小时实验室可达到消除传染。

最近，一些以简化和改进终末宿主群流行病学调查和可以诊断活动物感染为目的的方法已经建立。

这些方法有粪中抗原检测和(DNA)PCR检查(见下文)。

c)槟榔素检查与监测
槟榔素用于检查狗群中绦虫感染情况，它作为驱虫药现已被吡喹酮(抗蠕虫药)代替。

槟榔素是抗副交感神经药，引起出汗，刺激唾液、泪腺、胃、胰、肠等组织腺体。

增加肠道紧张性与平滑肌运动，从而引起排便。

肝脏是主要解毒场所。

槟榔素也直接作用于虫体，使虫体麻痹，但不致死，使虫体从肠壁上掉下来。

药物必须口服，虫体随粪便排出。

这一般用于细粒棘球蚴的初诊，但是，仍然有15％～25％的犬不能排便。

对于含盐酸槟榔素25mg／片的药片，可以接受的剂量如下：最少l片／14k体重，最多1片／’7kg体重，最适1片／10kg体重。

怀孕母犬和心脏异常的动物不宜用槟榔素。

由于一些犬对泻药不敏感，建议追加氢溴酸槟榔素作为灌肠剂，但是，用此方法成虫可能在这个阶段还没有麻痹，导致假阴性出现。

因此，这些犬应当在用药3～4天后再用药1次。

犬服药后排便至少要有两个过程：第一步是排粪，这不必介意，随后会排出黏液。

此时，将排出的黏液分成几份，分别进行检查，一般不推荐这样做，因为很难查出绦虫。

最好是将黏液样品(约4 mI|)用100ml_。

自来水稀释，并盖上一薄层煤油(或石蜡)(约1一nL)，煮沸5分钟。

煤油的作用是避免起泡沫，减少气味。

工作人员有感染本病的危险，因此工作时应当穿工作服、靴子、一次性手套和口罩。

连
裤服用后应煮沸消毒，靴子用10vA，氢氧化钠溶液消毒，排泄物取样后尽快煮沸。

第一次排泄的犬可能继续排出成虫、节片和虫卵，因此，在排泄和进水后应当停留2小时，槟榔素检测后，犬停留的地点应当用煤油和火焰喷雾。

d)粪抗原试验
最近槟榔素检测法，粪抗原夹心EI_,ISA检测抗体两种试验方法都已成熟，并且显示了很好的特异性，由于动物感染棘球蚴后10～14天内即可快速检测到粪抗原，而且随着虫体的排出，抗体水平很快下降。

试验敏感性和特异性分别是～70％和98％(·1317，引。

槟榔素试验既可定性，又能定量，是犬感染绦虫流行病学的基本的和最有价值的方法。

进一步的研究显示，在犬群中常规检测细粒棘球蚴时，粪抗原试验比槟榔素试验更有实用价值。

在狐狸的细粒棘球蚴监测时，这个试验与剖检比较仍然是决定性的诊断(6)。

特异性粪抗原ELISA试验现已经成熟，并且以其充分的特异性和敏感性被认为可取代槟榔素试验。

在犬和其他终末宿主的特异性的棘球蚴的检测中(引，棘球蚴粪抗原的检测种特异性在98％左右，并且整体敏感性约’700A，，然而，当平均虫数大于50～100时，敏感性可达到100％uJ，。

舄’，犬、澳洲野狗、狐狸和狼的检测已成功地采用粪抗原EL[SA试验，更重要的是，也可以检测红狐和家犬的多房棘球蚴感染(。

，巧)。

当捕获EL[SA用于检测细粒棘球蚴的Es抗体又用于其细胞节片抗体时，多房棘球蚴感染的敏感性可台_．降低，尽管属特异性仍没有变。

多克隆或单克隆粪抗原ELISA试验，主要是针对多房棘球蚴的早期感染而不是针对于细粒棘球蚴的感染，试验表现了较高的敏感性和特异性，细粒棘球蚴的检测敏感性较差，在0％～80％。

然而，少量寄生的多房棘球蚴粪抗原ELISA的敏感性低于剖检时的黏膜涂片法。

棘球蚴用于检测粪便中粪抗原的精确性还没有明确。

然而，它们在5％正常盐水中煮沸和对过碘酸盐处理的稳定性表明有抗原碳水化合物的参与。

可以在棘球蚴排卵之前检查到粪抗原。

，这有利于潜伏期感染的检查。

此外，粪抗原
水平在给感染犬服用抗蠕虫药5天内回到感染前的水平。

对于狐狸多房棘球蚴的检查，剖检是费时的工作，EHSA粪抗原检查是另一个可选的检查。

狐狸粪便样品应当从直肠而不是小肠中取得，犬和狐狸的棘球蚴粪抗原可在20％下保存1周。

·粪抗原试验程序(细粒棘球蚴)。

i)粪样品加等量的磷酸盐缓冲液(PBS)，pH7．2，加0．3％吐温。

20(PBST)，置于有盖的洁净的5mL试管中。

粪便的上清液可立即试验或保存在一20~C或更低温度下。

混浊或黏稠的上清液仍然可用于试验。

ii)已经用纯化的兔抗细粒棘球蚴节片提取物的IgG片段A蛋白的适宜浓度(通常
5ttg／mL)包被的96孔微量反应板，每孔加人，包被液为100~L 0。

05M pH9．6的碳酸氢钠或碳酸钠缓冲液。

反应板盖严并在4~C下孵育过夜。

iii)用PBST液洗涤每孔3次，每次1分钟；每孔加同样的缓冲液100￡tL，反应板室温下孵育1小时。

iv)弃去PBST，每孔加粪样品上清液50t~L和50皿乳牛血清，反应板室温下孵育1小时
并用薄膜密封。

v)洗涤反应孔，参照iii，并加入10％的漂白液(次氯酸盐)。

vi)用PBST适宜稀释兔抗细粒棘球蚴节片提取物I蜘过氧化物酶结合物，每孔加
100FL。

反应板室温下孵育1小时。

vii)洗涤反应板同iii。

viii)每孔加100FL四甲基乙二胺联苯胺底物(TMB，KPL Labs)，将反应板置于暗室，
室温20分钟。

ix)每孔加100txL 1M磷酸终止反应。

颜色从蓝到黄为阳性。

吸收波长为450nm。

x)试验应设立阴性和阳性最低判定值标准。

标准值也可以从OIE参考实验室获得(见
本手册第四部分)。

通常，i；H性到阴性临界值是阴性对照平均吸收值的标准偏差取±3，或不
用参考标准对照阳性，而用组平均吸收值。

e)DNA识别方法
终末宿主：终末宿主感染细粒棘球蚴和多房棘球蚴的鉴别诊断可以用扩增粪便中多房棘球蚴卵的PCR DNA来完成‘。

m’。

多房棘球蚴Ulsn RNA基因引物是种特异性的，表现100％
的特异性。

实际操作时，建议监测终末宿主(例如：狐狸)用粪抗原试验，确诊用PCR DNA试验。

在欧洲，多房棘球蚴的传播一般发生在细粒棘球蚴的地区或出现非常频繁的地区。

在其他地区包括近东地区(土耳其和伊朗)，中亚，俄罗斯和中国，两种病可能同时发生∞’。

多房棘球蚴感染的进一步诊断要求调查寄生虫的间歇性排卵和持续性的排卯的DNA。

细粒棘球蚴还没有通用的PCR／DNA试验。

中间宿主：DNA杂交方法还没有通用于家畜中间宿主的细粒棘球蚴的检查。

然而，这些方法的重要性在于对细粒棘球蚴的流行病学分离鉴定。

对于野生动物或异常的家畜多房棘球蚴中间宿主小的病变，DNA杂交技术可能是有用2．血滑学试验
a)中间宿主
用于人的免疫学试验，在动物中缺乏敏感性和特异性，不能代替剖检叼，m’。

b)终末宿主
对用于犬类棘球蚴病的免疫学诊断方法进行了大量的研究，随着包囊的消化，虫卯发育、生氏、寄居等各个阶段形成的抗原就会暴露于犬的小肠，这时很容易测出感染犬血清中的六钩蚴和原头蚴抗体。

但不能判定是近期感染还是以往感染，因此，没有用于临床。

B．对疫苗和诊断用生物制品的要求
1．中间宿主
基于从六钩蚴提取的单多缩氨基酸抗原和用DNA重组的基因技术疫苗已经成功地用于抗绵羊的T．o、，i。

这个技术现在已经成功地应用与细粒棘球蚴的预防∽’。

第一阶段重组六钩蚴抗原疫苗EG95在试验室预防细粒棘球蚴可达到96％～98％的保护。

保护时间可达到12个月，并且能够通过初乳传给羔羊。

第二阶段，将免疫的羔羊自然感染，导致类似的保护水平。

细粒棘球蚴EG95疫苗现在能够批量生产并且有潜力明显地减少控制过程中包囊攻击阶段的时间。

绵羊包虫病疫苗的使用应当与犬的用药以及卫生保健教育结合起来。

2．终末宿主
尝试用未提纯的棘球蚴抗原免疫犬做了大量的试验，至今还没有真正的成功。

犬的黏膜负．疫和棘球蚴感染需要进一步研究。