基础篇体外分析技术课件
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第六章
体外分析技术（一）
2/20/2021
作者 : 高识
单位 : 吉林大学中日联谊医院
基础篇体外分析技术
1
2/20/2021
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
改变结合体对
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
放射性技术 免疫学技术
1977Yalow 获诺贝尔奖
RIA
Ag
+Ab
*Ag *Ag-Ab
Ag-Ab
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床
改变标记物
与基础多个学科；
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA；
12
• 核医学（第9版） 4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab) 温浴反应达平衡 加入*Ag已知定量(ml)
分离（固相、 液相）B、F
Ag【各种体液（待 测抗原)】与一定量 的*Ag (标记抗原） 共同与限量特异性 Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
2/20/2021
基础篇体外分析技术
2/20/2021
基础篇体外分析技术
9
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平衡
分离（固相、 液相）B、F
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
2/20/2021
RIA标准曲线制作
基础篇体外分析技术
10
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
γ-计数仪：实际测量的放射性信号 是仪器输出的电脉冲数，单位为： cpm（counts perminute）或者 cps（counts persecond）。
γ-免疫计数仪
2/20/2021
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争抑 制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
13
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
放免分析的
三大试剂
RIA试剂盒组成
2/20/2021
➢ 特异性抗体
基础篇体外分析技术
14
• 核医学（第9版）
5. 放射免疫分析的基本试剂
2/20/2021
基础篇体外分析技术
7
• 核医学（第9版） 1. RIA的基本原理
特异性 抗体Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同； 在一定的反应条件下； *Ag、Ab为恒定量； *Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
2/20/2021
基础篇体外分析技术
4
• 核医学（第9版）
微生物： RMA； 酶： R E A ； 受体：R R A ； 特异结合蛋白：CPBA。
11wenku.baidu.com
• 核医学（第9版） • 3. RIA标准曲线制作
常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
2/20/2021
RIA标准曲线
基础篇体外分析技术
基础篇体外分析技术
6
• 核医学（第9版）
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质检 测的新纪元。
S0-S5标准管 100
样品管 —
—
—
—
—
—
100
100
100
100
100
—
—
—
100
100
混匀，37℃温育1小时
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
质控管 — 50 — 100 — 100
500
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清 液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品抗 原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结合 部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab。 （B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸或计 算机拟合曲线。
基础篇体外分析技术
➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
酶：EIA。
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图
RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在
此基
础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的
2/20/2021 手段
基础篇体外分析技术
5
第一节
放射性标记分析技术
2/20/2021
基础篇体外分析技术
2
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
2/20/2021
基础篇体外分析技术
3
• 核医学（第9版）
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础。 核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析方 法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核心， 其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F
2/20/2021
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
基础篇体外分析技术
8
• 核医学（第9版）
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品 质控血清 待测样本 125I-Ag 蒸馏水 抗体
分离试剂
NSB管 100（零标准品）
体外分析技术（一）
2/20/2021
作者 : 高识
单位 : 吉林大学中日联谊医院
基础篇体外分析技术
1
2/20/2021
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
改变结合体对
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
放射性技术 免疫学技术
1977Yalow 获诺贝尔奖
RIA
Ag
+Ab
*Ag *Ag-Ab
Ag-Ab
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床
改变标记物
与基础多个学科；
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA；
12
• 核医学（第9版） 4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab) 温浴反应达平衡 加入*Ag已知定量(ml)
分离（固相、 液相）B、F
Ag【各种体液（待 测抗原)】与一定量 的*Ag (标记抗原） 共同与限量特异性 Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
2/20/2021
基础篇体外分析技术
2/20/2021
基础篇体外分析技术
9
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平衡
分离（固相、 液相）B、F
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
2/20/2021
RIA标准曲线制作
基础篇体外分析技术
10
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
γ-计数仪：实际测量的放射性信号 是仪器输出的电脉冲数，单位为： cpm（counts perminute）或者 cps（counts persecond）。
γ-免疫计数仪
2/20/2021
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争抑 制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
13
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
放免分析的
三大试剂
RIA试剂盒组成
2/20/2021
➢ 特异性抗体
基础篇体外分析技术
14
• 核医学（第9版）
5. 放射免疫分析的基本试剂
2/20/2021
基础篇体外分析技术
7
• 核医学（第9版） 1. RIA的基本原理
特异性 抗体Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同； 在一定的反应条件下； *Ag、Ab为恒定量； *Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
2/20/2021
基础篇体外分析技术
4
• 核医学（第9版）
微生物： RMA； 酶： R E A ； 受体：R R A ； 特异结合蛋白：CPBA。
11wenku.baidu.com
• 核医学（第9版） • 3. RIA标准曲线制作
常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
2/20/2021
RIA标准曲线
基础篇体外分析技术
基础篇体外分析技术
6
• 核医学（第9版）
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质检 测的新纪元。
S0-S5标准管 100
样品管 —
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—
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100
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100
100
混匀，37℃温育1小时
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
质控管 — 50 — 100 — 100
500
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清 液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品抗 原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结合 部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab。 （B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸或计 算机拟合曲线。
基础篇体外分析技术
➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
酶：EIA。
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图
RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在
此基
础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的
2/20/2021 手段
基础篇体外分析技术
5
第一节
放射性标记分析技术
2/20/2021
基础篇体外分析技术
2
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
2/20/2021
基础篇体外分析技术
3
• 核医学（第9版）
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础。 核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析方 法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核心， 其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F
2/20/2021
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
基础篇体外分析技术
8
• 核医学（第9版）
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品 质控血清 待测样本 125I-Ag 蒸馏水 抗体
分离试剂
NSB管 100（零标准品）