非洲猪瘟实验室诊断(课堂PPT)

图7：病猪脾（上）与正常脾大小的比较。（急性ASF）
图8：急性ASF 猪肿大的褐色脾。（巴西品种）
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图9：肾淤斑及出血点（急性） 图10：肾盂及肾乳头部的出 血斑（急性）
图11：肾盂处散在的出血点（急性ASF ） 图12：肿大、出血的肝胃淋巴结，可出见有血凝块。（急性）21
图13：肝胃淋巴结切面，肿大并呈暗红色。（急性ASF） 图14：心包积液及心包肌层有散在的出血点。（急性ASF
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病原
➢特点之二：基因多变
基因组两端各有一个高变区，基因型多达 22个
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病原
➢ 特点之三：抵抗力强
温度：
60℃ 20分钟；
56℃ 70分钟
25-37 ℃ 数周
4℃
>1年
冻肉 数年到数十年
pH：
4——11.5 无血清 4——13.4 有血清 未熟肉品、腌肉、泔水中可长时间存活
乙醚、氯仿等脂溶剂可破坏囊膜使其失活 9
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ASF感染的主要特征
猪 (野猪和家猪) 软蜱
感染
表现出临床症状
携带者
Virus
Ab
病毒血症: 感染后2-3天到8天，持续很长时间（数月） 特异性抗体: 从感染后
的7-11天至数月，甚至数年
排毒:从 感染早期（第2天）以后持续很长时间。甚至康复后。
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实验室诊断
病原学
病毒分离— 血细胞吸附试验 直接免疫荧光法
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出血
➢瘀点 ➢瘀斑
肾皮质出血点、出血斑17
肺部局部肉芽肿，形成结节
慢性型
肺局部肉变，实变
纤维素性心包炎，并可见出血点
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图1：ASF 猪尸体底部的发绀病变。图2：耳尖的发绀病变。
图3： 血性腹泻 （血痢）。
图4：急性ASF 死猪肺小叶间的水肿19 。
图5：胃的基底膜淤血（急性） 图6：典型肿大脆化脾。 （黑浆果脾，急性ASF）
析 出 的 血 清
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实验室诊断
病原学样品
•抗凝血 •淋巴结 •脾脏 •肾脏 •骨髓
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实验室诊断的安全原则
• 保障人员的安全
– 穿戴：眼罩、手套、实验服、口罩和鞋套等
– 行为：洗手、禁止聊天，实验室内禁止食用食 物和饮料等
– 了解化学试剂的特性和潜在的危险
• 保障样品的安全
– 防止样品交叉污染 – 一次性手套
非洲猪瘟实验室诊断
African Swine Fever, ASF
国家外来动物疫病研究中心 中国动物卫生与流行病学中心
定义
非洲猪瘟是家猪、疣猪、欧洲野猪和美洲野猪的一种传 染性极强的出血性疾病。所有年龄的猪都易感。 ——世界动物卫生组织
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• 可ຫໍສະໝຸດ Baidu现为最急性、急性、亚急性和慢性四 种形式
• 严重程度与毒株、猪种及流行时间的长短 有关
• 急性型以高热、食欲废绝、皮肤发绀、网 状内皮系统出血为特征，发病后2-10天内 死亡，病死率可高达100%
• 临床上，与古典猪瘟非常相似，难以区分 • 目前没有疫苗！！！
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• 只感染猪 • 家猪和欧亚野猪非常易感
– 感染后存活的猪可能变为无症状的携带者
• 非洲的野生宿主能持续感染很长时间并且 没有临床症状
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良好的工作区域
• 第一步
– 实验前清洁试验区域（台面、移液器等） – 注意消毒剂的期限
• 第二步划分不同的区域
– 样品处理（BSL-3提取病毒DNA） – PCR检测（Mix配制、加DNA、扩增等） – ELISA检测区域（加血清、洗涤、终止等）
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GLP (good laboratory practice)
（FAT） 普通PCR和荧光定量
PCR
双抗体夹心ELISA测 定ASFV抗原
实验室诊断
血清学
间接ELISA测定ASF 特异性抗体
阻断ELISA检测ASF 特异性抗体
免疫印迹
间接免疫荧光测抗体
唯一确诊单位：国家外来动物疫病研究中心
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实验室诊断
血清样品
合
×
格 血
液
样
品
不合格血液样品 分离好的血清单独 包装，并一一编号
）
图15：胆囊水肿（急性ASF） 图16：肺部可见肉芽肿病变， 形成一结节（慢性ASF）22
图17：肺实变区（慢性ASF）
图18：心包脏层附有纤维素， 而且可见出血点（慢性ASF）
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鉴别诊断
• 高致病性蓝耳病 • 猪皮炎肾炎综合征（PDNS）由PCV-2引起 • 细菌性败血症 • 香豆素中毒 • 真菌毒素中毒 。。。。
Mityana, Uganda, 2010
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临床诊断
亚急性型（中等毒力毒株）
• 症状同急性型，但较轻 • 死亡率低 • 持续时间长（3周）
慢性型（低毒力毒株）
• 消瘦或发育迟缓，体弱
• 偶见体温升高，波状热
• 呼吸困难，湿咳
• 怀孕母猪流产
• 多处皮肤局部红斑、溃疡
• 耳部、腹部、大腿内侧可能凸起或坏死
• 软蜱是自然界中的贮主并且可以作为传播 媒介
• 法典中将非洲猪瘟的潜伏期定为15天。
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重要性
•OIE动物卫生法典要求必须报告 的动物疫病 •我国动物疫病名录一类动物疫病 •我国《中长期动物疫病防治规划 （2012-2020年）》 明确重点防 范的外来动物疫病
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病原
–非洲猪瘟病毒科中唯一成员
临床症状
➢最急性型
➢急性型
➢亚急性型
➢慢性型
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临床诊断
最急性型
•无临床症状，突然死亡
急性型（强毒株）
• 发烧（41-42°C） • 食欲减退 • 不愿活动 • 局部皮肤变红或变蓝色 • 腹泻 • 呕吐 • 呼吸困难 • 流产 • 死亡率高（10-100%）
仔猪发生ASF，耳、鼻、唇、腿发红，神经症状，数小时内死亡。
• 易继发感染，如继发引起肺炎和关节炎
• 感染后能康复，但终身带毒
• 死亡率低，可见血清转阳
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临床诊断
各种毒力的毒株均可导致流产
•胎儿可能全身水肿 •胎盘、皮肤、心肌或肝脏可能有淤血点
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➢病理诊断
诊断
脾脏 肿大 易碎
暗红色至黑色
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胃、肝、肾各部位淋巴结肿 大、出血；
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水肿
➢肺、肝、膀胱 ➢胆囊充盈 ➢结肠系膜
– Asfarviridae Asfivirus ASFV
–兼具虹彩病毒和痘病毒的某些特性 –唯一核酸为DNA的虫媒病毒 –只有一个血清型
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病原
➢ 特点之一：基因组大
蓝耳病病毒 15kb 12 倍
170~190kb
猪瘟病毒 12kb 15 倍
Genome CSFV
口蹄疫病毒 8kb 24 倍
Genome FMDV
• 原则
制定一整套标准以确保质量、可靠性和完整性， 可 核查结论和可追溯性数据的报告。