病毒载量检测有助于排除人免疫缺陷 病毒抗体可疑结果中 …

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病毒载量检测有助于排除人免疫缺陷

病毒抗体可疑结果中的非感染者

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【摘要】目的研究病毒载量检测是否能够辅助排除人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ・一ｕｎｏｄ胡ｃｉｅｎｃｙｖ血ｓ，ＨＩＶ）抗体可疑样本中的非感染者。方法选择在筛查实验中两种酶联试剂检测结果不一致

（一阴一阳、样本ｓ／ｃＯ比值＜６）、且确认实验检测结果为“ＨＩＶ抗体可疑”的样本】９份测定病毒载量。对这些个体的感染状况进行跟踪随访，观察６个月后抗体进展情况。结果１９份筛查实验结果不一致的抗体可疑样本的病毒载量检测均为阴性，随访复查条带无进展，均排除感染ⅢＶ的可能。结论在抗体筛查实验和确认实验反应均很弱的条件下，病毒载量检测阴性有助于排除非ⅢＶ感染原因造成的抗体检测中的可疑结果。

【关键词】ＨＩＶ；病毒载量；诊断，鉴别

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【№ｙｗｏｒｄｓ】ＨＩＶ；Ｖｉ“ｌｏ础Ｄｉａ舯８ｉ８，ｄｉ雎ｒｅｎｄａｌ

艾滋病的诊断依赖于人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）抗

体检测，程序为：先筛查实验［一般为酶联免疫吸附

实验（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｍａｓｓａｙ，ＥｕｓＡ）］，

后确认实验［免疫印迹实验（ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ，ｗＢ）］。

目前国内ＨＩＶ抗体的确认实验依赖于ｗＢ一种方

法，而ｗＢ实验结果有３种：ＨＩＶ抗体阳性、ＨＩＶ抗

体阴性、ＨＩＶ抗体可疑。

造成抗体可疑样本检出数量和检出率逐年上升

有多种原因，从方法学、试剂及检测人群来看：（１）

ｗＢ方法中硝酸纤维膜上的ＨＩＶ抗原（共有１０种抗

原）与人体血液中的某砦成分是共同抗原，发生交

叉免疫反应而出现ｗＢ条带（对应１０条带）。有研

究证明：由于ｗＢ实验固有的敏感性，即使在无高危

作者单位：１０００１３北京市疾病预防控制小心性病艾滋病防治所

通信作者：黑发欣，ＥＩＤａⅡ：ｈｄ＆＠ｂｊ州＆ｏ蜡论著．

行为的普通人群中，也可以有ｌＯ％～３２％的个体表现为ｗＢ可疑。（２）ＧｅｎｅｈｂＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ８ＨＩＶ—ｌ及ＨＩｖ＿２检测试剂盒的敏感性在不断提高，更容易出现ｗＢ条带。（３）随着国家艾滋病防治政策的深入，艾滋病抗体检测人群在不断扩展，从高危人群向普通人群延伸。因为医疗行为和血源筛查”。等原因而检测艾滋病抗体的情况越来越多，这部分人群更容易出现ｗＢ条带。

从检测者自身免疫状况及临床角度分析，抗体可疑结果常见的原因有：（１）ＨＩＶ感染急性期；（２）晚期艾滋病（ＡＩＤｓ）病人；（３）ＨＩＶ疫苗接种；（４）自身免疫病；（５）肾衰竭和血液透析；（６）遗传性胰腺囊肿；（７）多次怀孕或输血；（８）肝病；（９）注射用药；（１０）乙肝、狂犬等疫苗注射，等等“…。其中原因，ＨＩＶ疫苗接种目前局限于参加疫苗实验者；ＨＩＶ

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感染急性期、晚期ＡＩＤｓ病人通过核酸检测均能检出血浆中存在大量病毒”’；其他的第４—１０条为临床极为常见的原因，均可造成ｗＢ实验出现条带，干扰Ｈ１ｖ感染的诊断，而通过核酸检测，就可以排除这些原因造成的可疑结果”…。

核酸检测技术中应用最广泛、结果最可靠的就是病毒载量。本研究就测定病毒载量是否有助于排除ＨＩｖ血清学实验出现的不确定结果进行探讨。

材料与方法

所有的实验在北京市疾病预防控制中心艾滋病确认中心实验室内完成。检测程序如下：各ＨＩＶ抗体筛查实验室迭检的样本首先同时用两种酶联试剂筛查，其一为阳性或两者均阳性的样本经ＷＢ方法确认。

１．一般情况：从我实验室的检测数据来看，抗体可疑样本的检出数量和榆出率２００３至２００６年均呈上升趋势：２００３年，共完成３９９人次ＨＩＶ抗体ｗＢ检测，其中４６人份结果可疑，检出率为１１．５％；２００４年，共完成７８７人次抗体ｗＢ检测，其中１２２人份结果可疑，检出率为１５．５％；２００５年，共完成１１２４人次抗体ｗＢ检测，其中１７８人份结果可疑，检出率为１５．８％；２００６年，共完成１６３７人次抗体ｗＢ检测，其中３２３人份结果可疑，检出率为１９．７％。本研究选择在筛查实验中两种酶联试剂检测结果不一致（一阴一阳）、且确认实验检测结果为“ＨＩＶ抗体可疑”的１９份样本作为研究对象，测定病毒载量，并随访复查其ＨＩＶ感染情况。

２．实验方法与试剂：（１）筛查实验采用双抗原夹心一步法，同时用阿克苏ＨＩＶ－ＡｂＥＬＩｓＡ检测试剂盒（荷兰生物梅里埃有限公司）三代（简写为ＥＩＡ－３）和四代（简写为Ｅｎ＿４）两种试剂。（２）确认实验采用ｗＢ法，新加坡ＧｅｎｅＩａｂＤｉａ掣１０ｓｔｉｃｓｍＶ－１及ＨⅣ＿２检测试剂盒。（３）ＨＩＶ—ｌ病毒载量测定采用美国Ｒｏｃｈｅ公司提供的ｃＯＢＡｓＡｍｐｌｉｃｏｒ型全自动核酸扩增与检测系统。所有试剂均在有效期内使用，并严格按试剂盒说明书操作。

３．被检血样：本研究样本人选标准为：（１）在筛查实验中，ＥＩＡ－３和ＥＩＡ＿４结果不一致，而且样本ｓ／ｃＯ比值［注：样本的Ａ值与临界值（ｃｕｔｏｆｆ值）的比值简称为：ｓ／ｃｏ比值］均＜６；（２）在确认实验中，均出现了ｗＢ免疫条带（图１），其检测结果均报告为“ＨＩｖ抗体可疑”；（３）个人信息完整，能完成每３个月１次、共２次的随访和抗体复查工作。

４．仪器：Ｄｓｘ全自动酶标仪（美国Ｔｈｅｍｏｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ），Ａｕ协ｂｌｏｔ叫ｓｔｅＩｎ３６免疫蛋白确认仪（Ｇｅｎｅｌａｂｄｉ８印ｏｓｔｉｃｓ）、生物安全柜（美国ｎｅｍｏｆｏｎｎａ），核酸提纯仪（Ｍａ刚ＡＰｕｒｅＬｃ，美国Ｒｏｃｈｅ公司），核酸扩增与检测仪（ｃ０ＢＡｓＡｍｐｌｉｃｏｒ，美国Ｒｏｃｈｅ公司）。

结果

共有１９份样本人选本研究，其流行病学背景、抗体ＥＩＡ筛查、ｗＢ确认及病毒载量检测结果见表１。可以看出，从带型分析来看，ｐ２４是表达的主要条带。表明１９份样本的抗体反应都比较弱，但由于ＨＩＶ检测的特殊性，检测人员均谨慎地作了条带判断，出具了“ＨＩＶ抗体可疑”的报告。

对１９份样本的病毒载量检测结果表明：它们中无一样本出现阳性（均＜４００拷贝／Ⅱｄ的检出下限），提示并不是处于ＨＩＶ感染的窗口期。７１。按照《全国艾滋病检测技术规范（２００４年版）》的要求，对这些样本均完成了６个月的随访和抗体复查，其ｗＢ带型均无进展，证实并未感染ｍＶ。

综合以上分析可以看出，在抗体筛查实验和确认实验反应均很弱的情况下，病毒载量检测阴性有助于排除ＨＩＶ感染。

带型１为阳性对照，２一“所对应的样本编号参照袁ｌ

图ｌ样本的ｗＢ条带分析