鲎试剂简介
鲎试剂简介
鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和（1,3）-β-葡聚糖激。目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。
此外，鲎的肉、卵均可食用。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测和真菌（1,3)-β-D-葡聚糖检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。目前能生产鲎试剂的主要有美国、日本、中国等国家。
显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明(终点显色法，含偶氮化试剂) 货号：T7571 保存：阴凉处，最佳2-8℃，避光贮存。 产品内容： 细菌内毒素工作品，5支 鲎试剂， 1.7ml/支，5支 显色基质，1.7ml/支，5支 偶氮化试剂1，10ml/支，5支 偶氮化试剂2，10ml/支，5支 偶氮化试剂3，10ml/支，5支 HCl(反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶 细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，3瓶 用途： 显色基质鲎试剂(Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate，CE TAL)用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。 原理： 鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。在一定时间内，pNA 的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。 同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax=545nm），避免了供试
品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。 检测限： 按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml两个区间(反应时间T1和T2见出厂检验报告)。 用法： 1.材料和设备 1.1试剂 鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2、偶氮化试剂3、HC l (反应终止剂)、细菌内毒素检查用水。 1.2器材 无热原试管、无热原吸头、旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架、恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。 注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。 玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。 2.供试品的贮存与预处理 备注：若供试品为血液类，请参照我厂配套血液相关处理试剂使用说明书。 2.1供试品的pH值应在6-8之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化 钠或0.1N盐酸调节。 2.2若供试品中可能存在鲎实验的干扰物质，处理参见【供试品的干扰试验】。 2.3若供试品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素 检测），需选用特异性鲎试剂（我公司提供）。 2.4若供试品为一些抗菌素如头孢类抗菌素和磺胺制剂会对偶氮染色剂产生偶联反应
鲎试剂实验方法
鲎试剂实验方法 鲎试剂按实验方法可分为：凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。 凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。 特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。因此不列为独立品种。 动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。 根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法（又称动态比浊法）是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。 动态浊度法的特点为：1. 能准确定量。2.检测范围宽，可达4个数量级。3.灵敏度高达0.005EU/ml。4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。6. 和微生物检测系统Elx808（配套IU）及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。 终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。显色基质法由于不依赖凝固蛋白形成凝胶，抗干扰能力强，特别适用于生物制品（蛋白、疫苗等）和临床样品（黄疸、血液、尿液）的细菌内毒素检测。 终点显色法是目前反应时间最短的鲎试验法，只需要16分钟就能得出结果。而且可以偶氮化染色剂，避开某些有色检品自身颜色对鲎试验的干扰。终点显色法不需要特殊的检测仪器就能准确定量。 动态显色法鲎试剂兼有动态浊度法和终点显色法鲎试剂的优点，抗干扰能力强，使用简单方便，检测范围宽，灵敏度高达0.005EU/ml, 是目前世界上最好的鲎试剂。但是价格较高。 如果您仅需要检测样品的内毒素限量，可以选择凝胶法鲎试剂，通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数，做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。日常检测量不大时，可以选择终点显色法鲎试剂，用普通的分光光
显色基质鲎试剂盒使用说明书 (终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法，含偶氮化试剂) 【用途】显色基质鲎试剂( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。 【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下（温 度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应， 激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为 多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。 【检测限】按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1 EU/ml和0.01EU/ml -0.1EU/ml两个区间( 反应时间T 1 和T 2 见出厂检验报告) 。 【试剂盒组成】 细菌内毒素工作品，2支 鲎试剂， 1.7ml/支，2支 显色基质，1.7ml/支，2支 偶氮化试剂1，10ml/支，2支 偶氮化试剂2，10ml/支，2支 偶氮化试剂3，10ml/支，2支 HCl (反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶 细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，2瓶 【贮存】阴凉处, 最佳2-8℃,避光贮存。 【用法】 1 .材料和设备 1.1 试剂 鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HC l ( 反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。 1.2器材 旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。 恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。 注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。 玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。 2. 供试品的贮存与预处理 备注：若供试品为血液类，请参照配套血液相关处理试剂使用说明书。 2.1供试品的pH值应在6 - 8之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化钠或0.1N 盐酸调节。
细菌内毒素检验操作程序文件
目的：规细菌毒素检验操作程序。 围：适用于细菌毒素检查操作。 责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。 容 1准备工作 1.1实验设备及用具 1.1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250℃烘烤1小时。 1.1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。 1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管 1.2毒素标准品与实验试剂 1.2.1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。 1.2.2细菌毒素检查用水（毒素含量＜0.015Eu/mL灭菌注射用水）。 1.2.3细菌毒素国家标准品和工作标准品。 1.2.4 75%乙醇、铬酸洗液。 1.3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。 1.4恒温水浴箱水浴温度调节到37±1℃。 2鲎试剂灵敏度复核 2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（如：λ=0.25 EU/ml），细菌毒素工作标准品加入1ml 细菌毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟。 2.2将工作标准品制备成2λ、λ、0.5λ、0.25λ四个浓度（0.5 EU/ml、0.25 EU/ml、0.125 EU/ml、0.06 EU/ml）的毒素标准溶液，备用。
例：工作标准品为160 EU/ml 时 30 秒。 2.3取18支0.25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入0.1mlBET 水，然后分别加入0.1ml2.2中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入0.1mlBET 水作阴性对照。 2.4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟。放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。再次检查温度是否在所要求的围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。 2.5保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到180°，若关形成凝胶，不变形、不从管壁滑落者为阳性；未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。（注意：保温盒拿取试管过程应避免受到震动而造成的假阴性结果） 2.6 结果判定 当最大浓度2λ4支管均为阳性，最低浓度0.25λ4支管均为阴性，阴性对照2支管为阴性，实验方有效。如图1
动态显色法内毒素检测鲎试剂盒使用说明书
动态显色法内毒素检测鲎试剂盒使用说明书 货号：T7570 规格：48T/盒1.7ml 保存：阴凉处，最佳2-8oC，避光保存。 产品说明： 鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405）。反应液的吸光度(OD值)增加,OD值增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之，OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关，启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。 试验所需材料和器材： 内毒素工作标准品、鲎试剂、显色基质、细菌内毒素检查用水、除热原试管、除热原吸头、除热原96孔微板（或可拆式板条）、旋涡混合器、移液器、试管架、带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件，例如，微板鲎试仪ELx808及软件TALgent或Gen5。 注意事项： ①该试剂盒用于体外细菌内毒素的定量检测，严禁试剂以任何途径进入机体。 ②接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。试验过程应防止微生物的污染。 该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005EU/ml。 ③供试品的pH值应在6.0–8.0之间，若超出此范围，需用除热原的缓冲液、0.1M氢氧化钠或0.1M 盐酸调节。 ④当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验，参见【供试品的干扰试验】。 操作步骤：
1、动态光度测定仪器的设定，以鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU为例： 预热仪器，设置温育温度为37oC。 设置模板及程序。 设定读板波长为405nm，设定动力学参数：读板120分钟，每30秒读一次。 2、内毒素标准溶液配制（浓度10，1，0.1，0.01EU/ml） 2.1、取内毒素工作标准品1支，用砂轮沿安瓿颈部划痕，开启，加入适量（建议在0.5ml-1.2ml 之间）细菌内毒素检查用水，置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。 2.2、将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成所需浓度，每稀释一步均应在旋涡混合器 上剧烈振摇1分钟。 稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。 (参见《内毒素工作标准品使用说明书》)。 3、阴性对照为细菌内毒素检查用水。 4、鲎试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻摇晃溶解显色基质，再将溶解的 显色基质全部加入到鲎试剂中，轻轻摇晃使鲎试剂完全溶解。注意不要用旋涡混合器剧烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内使用。 若采用多道移液器，将溶解的鲎试剂转移到除热原加样槽，并轻轻摇匀。 5、实验操作 取除热原微板，在各孔中分别加入100μl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液，或供试品。 将微板放置于鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU中，37oC预热10分钟。 预热结束，用移液器或多道移液器每孔加入100μl鲎试剂（避免产生气泡!)，中速振摇10秒混匀，于37oC温育120分钟，并且在405nm波长处，每30秒读一次OD值。 6、数据处理 设定启动OD为0.2，软件自动给出其启动时间(T)。 建立标准曲线：lgT=b lgC+a，其中T为启动时间，C为内毒素的浓度，b为直线斜率，a为Y轴截
去内毒素实验方法介绍
去内毒素质粒提取Protocol 内毒性也称为脂多糖或LPS，是革兰氏阴性（如大肠杆菌，E.coli）胞膜上一种成分。细菌外膜的外部脂质成分完全由内毒素分子组成。一个E.coli包含约2百万个LPS分子，每个LPS 分子又由疏水性的脂质A、复杂的多糖链以及带负电荷的磷酸基团组成。因此每个内毒素既包含疏水区域也包含了亲水和带电区域，从而赋予其与其它分子相互作用的独特性质。 图1. 内毒素结构图。 细菌在其活跃生长时表面的内毒素成分较少，而一旦其死亡则会释放大量内毒素。在质粒提取的裂解过程中，内毒素会从细菌的外膜释放到裂解液中。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。 内毒素如何测定？ 历史上，内毒素测定主要是基于内毒素与鲎（一种海洋节支动物，也称马蹄型蟹）血液中的变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时可发生凝血反应。鲎试剂与细菌内毒素产生凝胶反应的机理是：鲎的血液及淋巴液中有一种有核的变形细胞，胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶及凝固蛋白原。当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时，可激活凝固酶原，继而使可溶性的凝固蛋白原变成凝固蛋白而使鲎变形细胞冻融物呈凝胶状态。现在已经发展出更加灵敏的光度计测试方法，该方法主要基于鲎试剂以及一种人工合成的可产生颜色反应的底物。 LPS污染通常用内毒素单位（Endotoxin Units, EU）表示，通常情况下，1ng LPS对应于1到10个EU。
Protocol 常用的试剂盒选择包括Qiagen、Sigma都挺好用的。或者omega、天根等。在选择取出内毒素的质粒提取试剂盒的时候有一个小窍门，就是有的盒子上写着“Endofree”字样，这种试剂盒是专门用来提取用于细胞转染实验的质粒的。一般这种质粒提取试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。同时采用特殊的溶液P4和过滤柱CS，可以有效的去除内毒素、蛋白等杂质。没有这个字样的试剂盒，对于常规的分子克隆实验，如，PCR，酶切，克隆等完全够用了。 如果不是特别的试验，建议采用手工方法，丁香园战友推荐以下的protocol提的质粒免疫动物没有问题，曾用于制备DNA疫苗，可进行大量的去内毒素质粒提取。 1）挑取一个新鲜菌落接种于含5ml LB及相应抗生素的试管，37℃培养8-12小时。 2）用上述新鲜培养物小提质粒鉴定后，剩余的菌液接种于含相应抗生素的400ml LB培养基中，37℃培养12-16小时。 3）用500ml离心筒收集菌液，5000rpm离心10分钟，弃上清。 4）用40ml预冷的STE重悬菌体，转移至2支30ml离心管中，6000rpm 5分钟，弃上清。 5）用3ml预冷的溶液I重悬菌体，再加入6ml新鲜配制的溶液II，轻轻颠倒混匀；再加入4.5ml预冷的溶液III，轻轻颠倒混匀。 6）4℃12000rpm离心10分钟，将上清转移至另外的30ml管中。 7）加等体积的异丙醇，颠倒混匀，置于－20℃20分钟以上。 8）4℃12000rpm离心15分钟，弃上清，70％乙醇洗涤沉淀，37℃蒸发至沉淀边缘透明。 9）加入5ml TE使DNA溶解后，加入5mol/L的LiCl溶液5ml，轻轻混匀，-20℃放置5-10分钟。 10）4℃12000rpm离心15分钟，转移上清，加入等体积的异丙醇，-20℃放置20分钟以上。 11)4℃12000rpm离心15分钟，弃上清，用70％的乙醇洗涤沉淀，倒置控干后，37℃蒸发至沉淀基本透明。 12）用2ml TE溶解沉淀，并加入50μl/管的RNase（5mg/ml），37℃消化过夜。
鲎的研究综述
鲎的研究综述 摘要：鲎是一种具有重要研究意义和经济价值的海洋动物，也是地球上动物界少数现存珍贵的“活化石”。我国是世界上少数拥有鲎资源的国家，世界上95%的中国鲎资源分布在我国，可以说，我国是中国鲎的真正故乡。现存的鲎在地球上已存活有2亿多年历史，是名符其实的活化石。本文主要介绍鲎特点及保护现状。 关键词：鲎；鲎资源；保护 1 鲎的外形特征 鲎的种属鲎（hou）是栖生于海洋中的一种无脊椎动物，在动物学分类学上，鲎属节肢动物门（Arfhropoda）、肢口纲(Merostomate)、剑尾目(Xiphosura)、鲎科(Patypleidae)。目前，世界上现存的鲎为三属四种，北美洲东岸海域产的美洲鲎，属美洲鲎亚科(Subfamily Limulinae)，东南亚海域产的东方鲎、圆尾鲎、巨鲎均属鲎亚科(Subfamily Tachypleinae)。 鲎的外形酷似一把秦琴，全身分为头胸甲、腹甲、剑尾3部分。剑尾酷似一把三角刮刀，挥动自如，是鲎的防卫武器。鲎的嘴巴长在头胸甲的中间，嘴边有一对钳子似的小腿，帮助摄取食物,嘴的周围长有10条腿。雌鲎的4条前腿上，长着4把钳子，而雄鲎却是4把钩子。原来雄鲎总是把钩子搭在雌鲎的背上，让雌鲎背着它四处旅行。鲎的胸腹甲交接部长着一片片像桨一样的腹肢，用来游泳，同时也是它的呼吸系统。鲎一旦被逼离开海水，要经过好几天才死，比蟹类有更强的生命力。 鲎有四只眼睛。头胸甲前端有0.5毫米的两只小眼睛，小眼睛对紫外光最敏感，说明这对眼睛只用来感知亮度。在鲎的头胸甲两侧有一对大复眼，每只眼睛是由若干个小眼睛组成。人们发现鲎的复眼有一种侧抑制现象，也就是能使物体的图像更加清晰，这一原理被应用于电视和雷达系统中，提高了电视成像的清晰度和雷达的显示灵敏度。 鲎形似蟹，身体呈青褐色或暗褐色，包被硬质甲壳。身体由头胸部、腹部和剑尾三部分组成。头胸部和腹部均向背面隆起，前面较圆厚，往后趋向扁平，后面延长在剑尾，沿腹部外缘并排着侧缘棘，构成鲎的特殊体形。鲎雌雄异体。以及呈长纺锤形，位于头胸部背甲心区下面的围心腔内；心脏的背面和侧面在8对心孔。暗褐色的鲎，长得像瓢一样。头胸部上顶着一个宽阔的背甲，背凸腹凹，如马蹄形。它有两对眼睛，一对复眼生在头胸甲两侧，一对单眼长于背部前端。头胸部的腹面不分节，有六对附肢，一般如钳状，只有第六对像耙子一样，用来挖土；成年雄体的第二对末端是弯钩状的，以便结
鲎试剂使用说明书
凝胶法鲎试剂使用说明书 一、检测步骤 1、标准品稀释：开启后加入检查用水（W）1.2ml，置漩涡混合器上混合5min，得到 浓度为10EU/ml的内毒素溶液，标记为（E10），其余各梯度稀释方法如下： 0.3ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml E10 －－－→E1－－－→E0.5－－－→E0.25－－－→E0.125－－－→E0.06－－－→E0.03 2.7mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 1.5mlW 此步骤为新开启标准品者操作，各梯度做好标记，其余操作人员可直接使用。 2、取鲎试剂8支，折断安瓿瓶颈，其中2支作供试品检查管，2支作阴性对照管，2 支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管，做好标记。 3、阴性对照管加入0.2ml检查用水，其余各管加入0.1ml检查用水，每支供试品检查 管另加入0.1ml供试品；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ（即0.1ml 的E0.125）内 毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ（即0.1ul 的E1）内毒素的供试品。 4、封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温金属浴中60min，然后取出观察结果。 在孵育期间避免任何震动！ 二、结果判断 1、将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°，若管内形成凝胶，不变形，不滑落者 为阳性，记录为（+）；反之为阴性，记录为（—）。取出试管应尽量避免受到震动 造成假阴性结果！ 2、阴性对照管必须为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管必须为阳性，否则实验结 果无效。 3、若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水货实验器具受到污染；若阳性对照管 为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价 标示不准，或实验条件不满足；若供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑 制反应的干扰因素存在。
细菌内毒素检查法标准操作规程
细菌内毒素检查法标准操作规程 目的： 建立细菌内毒素检查的基本操作，为细菌内毒素检查人员提供正确的操作规程。 2.依据： 《中华人民共和国药典》2000年版二部。 3.范围： 本标准适用于细菌内毒素检查的操作。 4.职责： QC细菌内毒素检查人员对本标准的实施负责。 5.程序： 5.1. 定义： 5.1.1.细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理， 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 5.1.2.细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 5.1.3.细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定 其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。 5.1.4.细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24 小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。 5.2. 实验设备：电热干燥箱（50~300±1）℃、电热恒温水温箱。 实验用具：注射器(精度0.02ml)、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、注射器盒、时钟。 试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。 5.3. 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金属直镊等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金属直镊等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），经250℃加热30分钟，除去热原。 5.4. 检查法：
关于鲎试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨
关于鲎试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨 鲎试验因其简单﹑快速﹑灵敏﹑准确的特点，被世界各国广泛采用，中国药典和欧美药典将其定为法定的细菌内毒素检查法，大范围地替代了热源检查法。为了确保其检查结果的准确性，本文对鲎试剂的使用进行了探讨，以规范鲎试剂的正确使用。 【关键词】鲎试剂;细菌内毒素检查法 【Abstract】TAL reagent test because of its simple, fast and accurate characteristics was widely adopted around the world. Chinese Pharmacopoeia, European and the United States Pharmacopoeia set it as the statutory bacterial endotoxins test, replaces the pyrogen test on a large scale. In order to ensure the accuracy of test results, the main discussion of this paper is the use of tachypleus tridentatus leach(TAL),to regulate the proper use of TAL. 【Key words】TAL;bacterial endotoxins test 1 鲎试剂的分类 鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。 1.1 按原料来源分一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate)，缩写为TAL。TAL与LAL有相同的功效。 1.2 按实验方法分细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法[1]。则鲎试剂可分为：凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。 凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。 动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂则都是定量检测内毒素的。 1.3 按使用特点分 1.3.1 普通鲎试剂灵敏度0.5～0.125EU/ml，适用于仅需要检测内毒素限量的样品。 1.3.2 高灵敏度鲎试剂灵敏度0.06～0.015 EU/ml，适用于内毒素限量较低的样品细菌内毒素检查。 1.3.3 特异性鲎试剂灵敏度0.5～0.015EU/ml，适用于成分较为复杂，会对鲎试剂产生干扰的样品[2]。 1.3.4 定量法鲎试剂最低检测限0.03～0.005 EU/ml，适用于需要对内毒素进行定量测定的样品。 2 鲎试剂在细菌内毒素检查法中的正确使用 内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大[3]，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。所以，一定要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。 2.1 保证所使用鲎试剂的质量鲎试剂的质量主要表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面：灵敏度稳定;自凝时间不低于24h[4];具有一定的缓冲能力与合适的pH;反应后即形成坚实凝胶，将成胶安瓿翻转180°而不会被破坏。而质量稍差的鲎试剂存放一定时间后(如半年)其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒素的允许限值发生变化[5]。因此，需选择具有国家颁发的批准文号,质量稳定的鲎试剂。
[精华]鲎试剂试验方法
[精华]鲎试剂试验方法 鲎试剂实验方法 鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。 凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至 5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。 特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。因此不列为独立品种。 动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。 根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
SP-MF-2103-01-注射用头孢他啶工艺规程
*****制药有限公司 标准管理程序 目的：建立注射用头孢他啶生产工艺规程，以保证严格的工艺控制和工艺步骤按规定执行。 适用范围：适用于注射用头孢他啶生产全过程。 责任人：制造部经理、粉针车间主任、粉针车间管理员、质监部经理。 内容：见附件
注射用头孢他啶生产工艺规程 目录 1.产品概述 2.处方和依据 3.生产工艺流程图及生产工艺洁净级别划分、工艺监控点 4.工艺条件与操作要点 5.质量标准（原料、包装材料、成品的法定标准、企业标准） 6.物料平衡计算方法 7.技术安全工艺卫生与安全环保 8.设备一览表及主要设备生产能力 9.劳动组织与岗位定员
1.产品概述： 【品名】中文名：注射用头孢他啶 英文名：Ceftazidime for Injection 【规格】1.0g、0.5g、0.75g、1.5g、2.0g(按C22H22N6O7S2计) 【剂型】本品为注射用粉末。 【批准文号】国药准字H、H、H、H、H 【作用与用途】用于敏感革兰氏阴性杆菌所致的败血症、下呼吸道感染、腹腔和胆道感染复杂性尿路感染和严重皮肤软组织感染等。对于由多种耐药革 兰氏阴性杆菌引起的免疫缺陷者感染，医院内感染以及革兰氏阴性杆 菌或铜绿假单细胞菌所致中枢神经系统感染尤为适用。 【用法与用量】静脉注射或静脉滴注 1.败血症、下呼吸道感染、胆道感染等，一日4～6g（2～3瓶），分 2～3次静脉滴注或静脉注射，疗程10～14日。 2.泌尿系统感染和重度组织感染等，一日2～4g（1～2瓶），分2次 静脉滴注或静脉注射，疗程7～14日。 3.对于某些危及生命的感染，严重铜绿假单胞菌感染和中枢神经系统 感染，可酌情增量至一日0.15～0.2g/kg，分3次静脉滴注。 【贮存条件】密闭，在凉暗干燥处保存。 【包装规格】西林瓶装，1.0g×10瓶/盒、0.5g×10瓶/盒0.75g×10瓶/盒 2.0g×10瓶/盒 1.5g×10瓶/盒 【有效期】2年 2.处方和依据： 本品系由头孢他啶和碳酸钠无菌混合粉按无菌分装工艺分装而得，分装规格为1.0g、0.5g、0.75g、1.5g 2.0g(按C22H22N6O7S2计)。处方依据为中国药典2005年版《中国药典》。
凝胶法鲎试剂测内毒素
凝胶法测内毒素 1)实验原理: 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成。用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。试验所用器皿需经处理，以除去可能存在的外源性内毒素，常用的方法是250℃干烤至少1小时，也可用其它确证不干扰细菌内毒素的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。 制备供试品需根据灵敏度λ确定最大有效稀释倍数（MVD）最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD： MVD=c L/λ 其中医用级透明质酸的内毒素限度为0.5EU/mg 2)实验方法 使用的是湛江安度斯生物有限公司生产的鲎试剂盒——灵敏度为λ=0.125-0.25EU/ml.选择λ=0.25EU/ml，孵育时间25分钟的使用方法 1，制备供试液 将所检医用级透明质酸样品配成c=1mg/ml的溶液S0待用，根据灵敏度λ=0.25EU/ml，L=0.5EU/mg,求得最大稀释倍数MVB=cL/λ为2。用水将S0稀释至2倍得供试液 2，制备内毒素溶液：取内毒素检测用水（ETW）及工作标准内毒素（CSE）各一支，开启，
内毒素测定方法
2005年版中国药典《细菌内毒素检查法》 来源--中华人民共和国药典2005年版附录Ⅺ E 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在250℃干烤至少30分钟，也可用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物的污染。 供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0-8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲剂调节PH值。酸或碱溶液须用检查用水在已去除内毒素的容器中进行配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。 内毒素限值的建立药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定： L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示； K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg?h)表示，注射剂K=5E U/(kg?h)，放射性药品注射剂K=2.5 EU/(kg?h)，鞘内用注射剂K=0.2 EU/(kg?h)。 M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml(kg?h)、mg (kg?h)或U/ (kg?h)表示，人均体重按60kg计算，注射时间若不足1小时，按1小时计算。 按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用药实际情况做必要调整，但需说明理由。 确定最大有效稀释倍数（MVD）最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数下可进行内毒素限值的检测。用以下公式来确定MVD： MVD=CL/λ 式中L为供试品的细菌内毒素限值； C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则C等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U /ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD 取1，计算供试品的最小有效浓度C=λ/L。 λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml），或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。 方法1 凝胶法
鲎试剂灵敏度复核记录
文件名称File Name Record of Review for Limulus Reagent Sensitivity File Number REC-SOP-C003059-01 -02 生效日期Effective Date 2018-10-18 有效期至 Expiry Date 2021-10-17 审批及颁发/APPROV AL & ISSUANCE 部门签名日期起草质量控制部 审核 质量控制部 质量保证部 批准质量负责人 颁发质量保证部 会审/COLLECTIVE REVIEW 部门签名日期部门签名日期/ / / 分发/DISTRIBUTION Copy-1 Copy-2/ 质量保证部质量控制部/
文件名称File Name Record of Review for Limulus Reagent Sensitivity File Number REC-SOP-C003059-01 -02 生效日期Effective Date 2018-10-18 有效期至 Expiry Date 2021-10-17 变更历史/CHANGES 版本号修改简述提出人生效日期 01 由原文件RE-C003060《鲎试剂灵敏度复核记录》变 更而来；文件编码改变。 魏永红2017-06-01 02 增加所使用仪器及试剂的信息汪华2018-10-18 附：记录样张
REC-SOP-C003059-01-02 鲎试剂灵敏度复核记录 Record of Review for Limulus Reagent Sensitivity 起草人/日期审核人/日期批准人/日期执行日期 2018-10-18 制订依据SOP-C003059 《细菌内毒素检查法标准操作规程》 1 试剂鲎试剂批号：；规格： ml×支； 生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司； 细菌内毒素检查用水批号：；规格： ml×支；内毒素含量： EU/ml； 生产厂家：□湛江安度斯生物有限公司；□福州新北生化工业有限公司； 细菌内毒素标准品批号：；规格：支/盒；效价：______EU/支； 生产厂家：□中国药品生物制品检定所；□； 2 仪器试管恒温仪型号：TAL-40D 编号：□QC-187 □QC-216 □QC-217 3 操作根据鲎试剂灵敏度标示值（λ）将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混匀15分钟，然后制成2.0λ、1.0λ、0.5λ、和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液。每稀释一步均在旋涡混合器上混匀30秒钟，按检查法项试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管。 保温时间： ~ 浓度 2.0λ 1.0λ0.5λ0.25λ阴性对照 管别 管 1 管 2 管 3 管 4 〈注：结果判断以＋、－表示阳性、阴性〉 如最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值（λc）。 计算公式：λc＝lgˉ1（∑X／4） ＝ ＝ X为反应终点浓度的对数值（lg） 当λc在0.5λ-2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。 4 结论：该批鲎试剂的灵敏度为 EU/ml。 检验人/日期：复核人/日期：
细菌内毒素检验操作程序培训讲学
目的：规范细菌内毒素检验操作程序。 范围：适用于细菌内毒素检查操作。 责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。 内容 1准备工作 1.1实验设备及用具 1.1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250C烘烤1小时。 1.1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。 1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管 1.2内毒素标准品与实验试剂 1.2.1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。 1.2.2细菌内毒素检查用水（内毒素含量v 0.015Eu/mL灭菌注射用水）。 1.2.3细菌内毒素国家标准品和工作标准品。 1.2.4 75%乙醇、铬酸洗液。 1.3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌内毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250r干热灭菌至少60分钟。 1.4恒温水浴箱内水浴温度调节到37± 1C。 2鲎试剂灵敏度复核 2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值（如：入=0.25 EU/ml），细菌内毒素工作标准品加入1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟。 2.2将工作标准品制备成2入、入、0.5入、0.25入四个浓度（0.5 EU/ml、0.25 EU/ml、
0.125 EU/ml、0.06 EU/ml ）的内毒素标准溶液，备用。精品资料
山东天力药业有限公司 标题：细菌内毒素检测操作程序 编号：SOP-QM-243- B 页码：2/9 例：工作标准品为时 0.9ml k 0.125EU/ ml 0.06EU/ ml 0.9ml 0.9ml 注意：每稀释一步均应在混合器上混匀 30秒。 2.3取18支0.25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入 O.lmIBET 水，然后分别加入 0.1ml2.2中 制备好的4 个浓度的标准液，按浓度从高到低依次加入，每个浓度加 4支，；最后2支加 入0.1mlBET 水作阴性对照。 2.4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入 37C± 1C 水浴锅中，保温60±2分钟。放 入水浴前把水搅 动几下，以使水温均匀。再次检查温度是否在所要求的范围，注意保温 和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。 2.5保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到 180。，若关内形成凝胶，不变形、不从管 壁滑落者为阳性；未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。 （注意：保温盒拿取 试管过程应避免受到震动而造成的假阴性结果） 2.6结果判定 当最大浓度2入4支管均为阳性，最低浓度0.25入4支管均为阴性，阴性对照2支 管为阴性，实验方有效。如图1 0.2ml 0.9ml 0.9ml 0.5EU/ ml 0.25EU/ ml ■ 1EU/ ml — 1.4ml 0.9ml 0.9ml 0.5ml 0.9ml 0.5ml ___ k 8EU/ ml
鲎试验(Limulus test)
上图所示：鲎，最具特点的就是鲎的血是蓝色的。 鲎（hòu）亦称马蹄蟹。肢口纲（Merostomata）剑尾目（Xiphosura）海生节肢动物，共4种，见于亚洲和北美东海岸。虽又称马蹄蟹爬上灶、夫妻鱼、鸳鸯鱼，东方鲎等，但不是蟹，而与蝎、蜘蛛以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫（现在只有化石）一样古老的动物。鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。每当春夏季鲎的繁殖季节，雌雄一旦结为夫妻，便形影不离，肥大的雌鲎常驮着瘦小的丈夫蹒跚而行。此时捉到一只鲎，提起来便是一对，故鲎享“海底鸳鸯”之美称。鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。科学家也使用鲎血研究癌症。但是，对鲎抽血后，它们就被放生。 鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。 鲎是一种海洋节支动物，其血液及淋巴液中有一种有核的变形细胞，胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶及凝固蛋白原。当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时，可激活凝固酶原，继而使可溶性的凝固蛋白原变成凝固蛋白而使鲎变形细胞冻融物呈凝胶状态。 检测内毒素血症的一种试验。鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有一种可凝性蛋白质,在极微量内毒素 (0.0005vg/ml)存在时可形成凝胶。本试验即利用此原理测定血液或其他样品中的微量内毒素。在临床病例,下列疾病阳性率较高:内毒素性休克、急性化脓性胆管炎、重症肝炎、腹膜炎、肝硬化等。内毒素检出阳性病例中约有2/3导致死亡。 根据鲎试剂反应的原理可分为定性鲎试剂和定量鲎试剂，对应的试验称定性鲎试验和定量鲎试验。定性鲎试验主要用于药品，医疗器械等产品的内毒素定性检验。定量鲎试验主要用于检测临床病人、动物体内内毒素等方面，以便为医生用药提供参考。鲎试验按方法分： 凝胶法 动态浊度法 终点浊度法 动态显色法 终点显色法