橄榄油紫外分光光度检测法

COI/T20/Doc. no. 19/Rev. 3 2010

油脂紫外分光光度检测法

前言

紫外吸光度的检测能反应油脂的品质，加工过程会引起油脂吸光度的变化。由于油脂中的某些成分存在共轭双键和三键结构，所以会在特定波长下有紫外吸

收。吸收度用E 1%

1cm表示( 1 g 油脂溶解于100 mL 溶剂，比色皿光径为1 cm )。

一般情况下也用K（消光系数）表示。

1.范围

本标准规定了动植物油脂紫外吸光度测定的方法。

2.原理

将油脂溶解在所需溶剂中，以此溶剂为参比液，测定样品在特定波长下的吸光度。

记录分光光度计的读数并计算样品的吸光度。

3.仪器

3.1 分光光度计，可读取220 nm ～360 nm 波长。

3.2 1 cm 光径石英比色皿。

3.3 25 mL 容量瓶。

4.试剂

4.1 分析纯异辛烷（2,2,4-三甲基戊烷），以蒸馏水为参比溶液，在220 nm 处的透光率不低于60%，在250 nm 处不低于95%。

或者用分析纯环己烷，以蒸馏水为参比溶液，在220 nm 处的透光率不低于40%，在250 nm 处不低于95%。

或者用其它能完全溶解油脂的溶剂。

5.测定步骤

5.1 待测样品必须完全混匀并且无悬浮物。若油脂在室温下是液态的，则需在30℃左右用滤纸过滤。固体脂肪在高于溶点温度10℃以内均质化并用滤纸过滤。

5.2 精确称量0.25 g 样品，置于25 mL 容量瓶内，用溶剂（异辛烷或环己烷）溶解样品，并稀释至刻度。该溶液必须清澈，如有乳光或浑浊现象必须立即用滤

纸过滤。

5.3 将待测溶液倒入石英比色皿，用溶剂做参比，使用分光光度计测定在 232 nm ～ 276 nm 波长范围的吸光度，吸光度必须在0.1～0.8之间，否则应适当加大样品浓度或进行稀释重新测定。

5.4 如果吸光度测定之前油脂需要过氧化铝柱，则按以下步骤处理：30 g 碱性氧化铝用己烷溶成悬浮状，装层析柱。待氧化铝压实之后将多余的己烷吸出，使液面高于氧化铝约 1 cm 。溶解 10 g 油脂于 100 mL 己烷，按 5.1 均质化并过滤，然后倒入层析柱。收集洗脱液，在低于25℃下真空减压浓缩至无溶剂。然后立即按5.2步骤处理得到的油脂样品。

5.5 如溶剂使用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm ，如使用环己烷则最大吸收波长为 270 nm 。

6. 结果计算

6.1 记录相应波长下的吸光度，按下式计算：

c.s

E k λ

λ=

式中：

K λ：波长λ下的吸光度（以浓度1 g/100 mL ，1 cm 比色皿波长λ测得吸光度表示）； E λ：波长λ下测得的试样吸光度；

C ：试样溶液中样品的浓度，单位为 g/100 mL ； S ：比色皿光径，单位为 cm 。 结果应保留两位小数点。

6.2 橄榄油的吸光度测定方法与欧盟规定的官方方法一致，涉及到用异辛烷做溶液检测 232 nm 和 270 nm 波长下的吸光度，并且需测定吸光度的变异值（ΔK ），按下式检测：

2

K K K ΔK 4

m 4m m +-+-

=

K m 是波长m 下的吸光度，最大吸收波长在 270 nm 附近。

注：如溶液用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm 和 232 nm ，如溶液用环己烷，则最大吸收波长为 270 nm 和 232 nm 。

附录Ⅰ

分光光度计的校正

A.2. 仪器必须六个月校验一次，包括波长响应值和响应值的准确性。

A.2.1. 波长校验可以用汞灯或使用合适的滤光片进行。

A.2.2. 光电管和光电倍增管响应值的校验按以下步骤进行：称0.2000 g分析纯铬酸钾溶于0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液中，定溶至1000 mL。取上述溶液25 mL 于500 mL 容量瓶中，用0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液稀释至刻度。用0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液作为参比溶液，1 cm 光径比色皿，测定此溶液在275 nm处的吸光度，应该为0.200±0.005。

方法精密度

2009年，来自13个国家的21个拥有IOC认证的实验室参加了这次由执行秘书处实施的合作检测。

共检测了五个样品：

A: 特级初榨橄榄油

B: 二次离心橄榄油

C: 精炼油橄榄果渣油

D: 初榨橄榄油+菜籽油+高油酸葵花籽油

E: 初榨橄榄油+精炼大豆油

测试结果见下表（A.1-A.6）

表A.1 232 nm处的紫外吸收（异辛烷为溶液）项目 A B C D E 实验室数量21 22 22 22 22 可接受数量20 18 18 21 17 均值 1.76 2.10 3.81 3.85 2.82 重复性标准偏差Sr 0.0259 0.0126 0.0155 0.0359 0.0193 重复性变异系数

1.47 0.60 0.41 0.93 0.69 CV（r），%

重复性限r 0.073 0.035 0.043 0.101 0.054

再现性标准偏差

0.0773 0.0692 0.174 0.2108 0.0694 SR

再现性变异系数

4.38 3.29 4.58

5.48 2.46 CV（R），%

再现性限R 0.216 0.194 0.488 0.590 0.194 表A.2 232nm处的紫外吸收（环己烷为溶液）项目 A B C D E 实验室数量21 21 21 21 21 可接受数量18 20 20 21 21 均值 1.76 2.12 3.83 3.86 2.79 重复性标准偏差S r0.0250 0.0216 0.0423 0.0405 0.0322

重复性变异系数

1.42 1.02 1.11 1.05 1.19 CV（r），%

重复性限r 0.070 0.060 0.119 0.113 0.093 再现性标准偏差S R0.0493 0.0730 0.1513 0.1378 0.0996

再现性变异系数

2.81

3.44 3.95 3.57 3.57 CV（R），%

再现性限R0.138 0.204 0.424 0.386 0.279