土贝母皂苷对人肝癌细胞HepG2增殖及细胞周期的影响
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·论著·
土贝母皂苷－Ⅱ对人肝癌细胞ＨｅｐＧ２增殖及细胞周期的影响
晁旭 赵英永 魏敏慧 党琳 马晓军 王文娟
【摘要】 目的 探讨土贝母皂苷－Ⅱ对人肝癌细胞Ｈｅｐ
Ｇ２增殖、细胞周期的影响及其抗肿瘤效应。方法 用不同浓度土贝母皂苷－Ⅱ０、２、４、６、８、１０、１２μｇ／ｍｌ处理ＨｅｐＧ２细胞后，ＭＴＴ法检测细胞生长的抑制率，荧光染色和流式细胞术分别观察凋亡细胞形态和细胞周期的变化。同时，以Ｈ２２
肝癌小鼠模型初步探讨土贝母皂苷－Ⅱ的抗肿瘤作用。结果 土贝母皂苷－Ⅱ能剂量依赖性地抑制ＨｅｐＧ２细胞生长，２４－ｈ半数抑制剂量（ＩＣ５０）
为４．０５μｇ／ｍｌ。ＨｅｐＧ２细胞经土贝母皂苷－Ⅱ处理后，呈现典型的凋亡细胞形态，Ｇ２／Ｍ期细胞数量增加，而Ｇ０／Ｇ１期细胞数明显减少。体内抗肿瘤实验结果证明，土贝母皂苷－Ⅱ对肿瘤的生长有显著的抑制作用。结论 土贝母皂苷－Ⅱ可能是通过使肿瘤细胞滞留于Ｇ２
／Ｍ期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。【关键词】 土贝母皂苷－Ⅱ；
细胞增殖；细胞周期【中图分类号】 Ｒ９６６ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 ０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７４０－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐ
ａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅＨｅｐＧ２ ＣＨＡＯ Ｘｕ，ＺＨＡＯ Ｙｉｎｇｙｏｎｇ，ＷＥＩ Ｍｉｎｈｕｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｈａｎｘｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ
Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉａｎｙａｎｇ ７１２０４６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊ
ｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ Ｈｅｐ
Ｇ２ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｉｔｓ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｖｉｖｏ．ＭｅｔｈｏｄｓＡｆｔｅｒ Ｈｅｐ
Ｇ２ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱ０，２，４，６，８，１０，１２μｇ／ｍｌ，ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｒａｔｅ ｏｆ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｈａｐｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ
ａｎｄ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｉｎ ｖｉｖｏ ｗａｓ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ
ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｈ２２ｒａｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｃｅｌｌ ｇ
ｒｏｗｔｈ ｉｎ ａ ｄｏｅｓ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ＩＣ５０ｖ
ａｌｕｅ ｗａｓ ４．０５μｇ／ｍｌ．Ａｆｔｅｒ ＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱ，ｃｅｌｌａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｔｙｐｉｃａｌ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ Ｇ２／Ｍ ｐｈａｓｅ ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ
ｃｅｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ Ｇ０／Ｇ１ｐｈａｓｅ．Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｃｏｕｌｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ
ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｂａｂｌｙ
ｖｉａ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｓｔａｇｎａｔｅ ｉｎ Ｇ２／Ｍ ｐｈａｓｅ．【Ｋｅｙ
ｗｏｒｄｓ】 Ｔｕｂｅｉｍｏｓｉｄｅ－Ⅱ；Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ［Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇ
ｕｓｔ ２０１２，３８（１５）：１７４０－１７４２．］ 基金项目：
陕西省教育厅科研计划项目（１１ＪＫ０６８２）作者单位：７１２０４６ 陕西中医学院基础医学院（
晁旭、魏敏慧、党琳、马晓军、王文娟）；西北大学陕西省生物医药重点实验室
（赵英永）
土贝母是一种传统中药，
曾被用来治疗肿瘤、炎症和蛇虫叮咬等［
１］
。目前，已经从其中分离出多种三萜皂苷［２－
４］，它们具有抑制多种癌细胞分化和增殖
的功能
［５，６］
。研究发现，土贝母皂苷－Ⅱ是最有希望
用于临床试验的化合物［７］
。
许多抗肿瘤药物或具有肿瘤抑制作用的化合物是通过诱导肿瘤细胞的凋亡作用而达到抑制肿瘤发
生和进展的［８］
。土贝母皂苷－Ⅰ可以通过诱导ＨｅＬａ细胞线粒体丧失功能而使其凋亡［５］
。然而，有关土
贝母皂苷－Ⅱ的抗肿瘤作用及其诱导细胞凋亡机制的研究还没有报道。本课题开展了土贝母皂苷－Ⅱ对人源肝癌细胞ＨｅｐＧ２的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制，并通过动物实验初步探讨了土贝母皂苷－Ⅱ的抗肿瘤作用机制。
材料与方法
一、材料
人源肝癌细胞Ｈｅｐ
Ｇ２购自第四军医大学；ＲＰＭＩ１６４０培养基购自Ｇｉｂｃｏ公司；
小牛血清购自·０４７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期 Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇ
ｕｓｔ ２０１２，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．１５