纤维素降解菌的分离和筛选

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纤维素降解菌的分离和筛选

1.实验目的:1.掌握纤维素降解菌的的分离和筛选的方法

2.学会会培养基的制备

3.再次了解菌落的形态

2.实验原理:从美术楼后面树林中取适量的土壤,用无菌水将得到的样品经适

当稀释, 在28℃下培养1d,稀释10-6、10-7、10-8三个浓度,分别接

种于鉴别培养基中培养, 每组3个平行,在37℃下培养2-3 d,然后

进行初筛,重复以上步骤,直至获得纯的菌株。最后镜检。

3.试验方法:1. 取样

先从树林中取10g土壤(10—15cm深)。用灭菌的塑料袋盛装。

2.饥饿培养

秤取10g土壤,置于250ml的装有90ml无菌水的锥形瓶中,摇匀,

在37℃下培养1d。

3.梯度稀释

所需仪器:试管(8支)、洗耳球、移液管。

需要先经高压蒸气灭菌的仪器:试管(每只内装9ml蒸馏水)、移液

管。

用移液管从饥饿培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌

水的试管中充分混匀。然后用移液管从此试管中吸取1ml加入另一

盛有9ml无菌水的试管中,混合均匀,以此类推制成10-1,10-2,10-3,

10-1,10-2,10-310-4,10-5,10-6,10-7,10-8不同稀释度的土壤溶液。

4.选择培养

○1刚果红培养基的制备

所需要的仪器有:500ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、

培养基,用2层纱布加棉花做成瓶塞,将瓶口塞紧,再在瓶塞外包

裹两层报纸,用线绳扎紧,在121℃下高压蒸汽灭菌20min。灭菌后,

倒9个灭菌平板,凝固后待用。

○2涂布平板

将上述已倒培养基的9个平板底面分别用记号笔写上10-6、10-7、10-8

3种稀释度(每个稀释度划3个平板)。然后用移液管分别由10-6、

10-7,10-8三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号放入已写好稀释度的平

板中,用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀,室温下静置5~10min,使菌液吸附进培养基。38℃倒置培养2-3d,至菌落长出,产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。

○3菌落形态观察

○4划线分离

PDA培养基的制备方法

马铃薯200g

纤维素(cmc)若干克

琼脂15-20g

蒸馏水1000ml

马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后纱布过滤,再加琼脂,融化后不足水至1000ml。121℃灭菌30min.

待凝固后,从以上涂布的9个平板当中取出1个菌落周围的透明圈比较大的平板。用接种环挑取菌落在平板培养基上进行梯度划线。连续做3个平行,置于38℃下培养。

重复以上步骤,进行连续3次纯化培养。直至获得纯的菌株。

○5斜面培养

选取透明圈大且降解能力强的菌株以待划线时使用。

如上面制备PDA培养基,将其倒入1支灭菌试管里,每管约倒入1/3的培养基,倾斜置放,30min之后,带其凝固,用接菌环挑去少量菌落划线培养,做3个平行。置于38℃下,培养2-3d。直至长出菌落。

5.镜检

所需仪器或试剂:菌种的平板培养物、番红、显微镜、酒精灯、载玻片、接种针、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、蒸馏水等。

操作步骤:

制作(挑取、印染)---染色(番红)---静置10min---冲洗(蒸馏水)---加片(盖玻片)---镜检

结果:从形态和印片染色看,该菌属于放线菌。

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