纤维素降解菌的分离和筛选

纤维素降解菌的分离和筛选
1.实验目的：1.掌握纤维素降解菌的的分离和筛选的方法
2.学会会培养基的制备
3.再次了解菌落的形态
2.实验原理：从美术楼后面树林中取适量的土壤，用无菌水将得到的样品经适
当稀释, 在28℃下培养1d，稀释10-6、10-7、10-8三个浓度，分别接
种于鉴别培养基中培养, 每组3个平行，在37℃下培养2-3 d，然后
进行初筛，重复以上步骤，直至获得纯的菌株。

最后镜检。

3.试验方法：1. 取样
先从树林中取10g土壤(10—15cm深)。

用灭菌的塑料袋盛装。

2．饥饿培养
秤取10g土壤，置于250ml的装有90ml无菌水的锥形瓶中，摇匀，
在37℃下培养1d。

3.梯度稀释
所需仪器：试管（8支）、洗耳球、移液管。

需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装9ml蒸馏水）、移液
管。

用移液管从饥饿培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌
水的试管中充分混匀。

然后用移液管从此试管中吸取1ml加入另一
盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1,10-2,10-3,
10-1,10-2,10-310-4,10-5,10-6,10-7,10-8不同稀释度的土壤溶液。

4.选择培养
○1刚果红培养基的制备
所需要的仪器有：500ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、
培养基，用2层纱布加棉花做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包
裹两层报纸，用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

灭菌后，
倒9个灭菌平板，凝固后待用。

○2涂布平板
将上述已倒培养基的9个平板底面分别用记号笔写上10-6、10-7、10-8
3种稀释度（每个稀释度划3个平板）。

然后用移液管分别由10-6、
10-7,10-8三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号放入已写好稀释度的平
板中，用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5~10min，使菌液吸附进培养基。

38℃倒置培养2-3d，至菌落长出，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。

○3菌落形态观察
○4划线分离
PDA培养基的制备方法
马铃薯200g
纤维素（cmc）若干克
琼脂15-20g
蒸馏水1000ml
马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤，再加琼脂，融化后不足水至1000ml。

121℃灭菌30min.
待凝固后，从以上涂布的9个平板当中取出1个菌落周围的透明圈比较大的平板。

用接种环挑取菌落在平板培养基上进行梯度划线。

连续做3个平行，置于38℃下培养。

重复以上步骤,进行连续3次纯化培养。

直至获得纯的菌株。

○5斜面培养
选取透明圈大且降解能力强的菌株以待划线时使用。

如上面制备PDA培养基，将其倒入1支灭菌试管里，每管约倒入1/3的培养基，倾斜置放，30min之后，带其凝固，用接菌环挑去少量菌落划线培养，做3个平行。

置于38℃下，培养2-3d。

直至长出菌落。

5.镜检
所需仪器或试剂：菌种的平板培养物、番红、显微镜、酒精灯、载玻片、接种针、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、蒸馏水等。

操作步骤：
制作（挑取、印染）---染色（番红）---静置10min---冲洗（蒸馏水）---加片（盖玻片）---镜检
结果：从形态和印片染色看，该菌属于放线菌。