大豆磷脂中磷脂酰胆碱的脂肪酸组成分析

合集下载

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

大豆磷脂中磷脂酰胆碱的脂肪酸组成分析

夏海涛3

　刘玉芬　侯进龙

(齐齐哈尔大学化学与化学工程学院,齐齐哈尔161006)

　2002202230收稿;2002206226接受

1　引言磷脂是生物膜的主要成分,是由甘油骨架、极性基团和不饱和脂肪酸组成的脂质类化合物。磷脂种类(PC ,PE 等)的化学组成决定磷脂的物理特性,进而影响生物膜的功能。研究表明:磷脂脂肪基团中不饱和碳2碳键是决定其相变温度的关键因素,同时,环境因素影响磷脂的脂肪酸组成,随环境温度的变化,磷脂的脂肪酸组成也作出相应的调整。因此,测定磷脂酰胆碱的脂肪酸组成,对研究大豆的遗传性及环境因素对其所造成的影响具有重要意义。

磷脂脂肪酸组成的分析已有报道,但对于大豆磷脂酰胆碱脂肪酸组成的分析国内至今未见报道。本文用正相半制备高效液相色谱法分离制备大豆磷脂酰胆碱,水解酯化后,用气相色谱法测定脂肪酸组成。结果表明,大豆磷脂酰胆碱主要由C 16∶0,C 18∶0,C 18∶1,C 18∶2和C 18∶35种脂肪酸组成,该方法可用于各种磷脂的脂肪酸分析。

2　实验部分

2.1　仪器与试剂　P2000型高效液相色谱仪(美国Therm o Separation 公司);Lichros orb si 260色谱柱(大连依利特公司),SE DEX 55型蒸发光散射检测器(法国Dikma 公司);Vista 402型色谱数据处理机(美国Varian 公司);VIST A 6000型气相色谱仪(美国Varian 公司);FI D 检测器。正己烷、异丙醇(色谱纯)、脂肪酸(分析纯);二次蒸馏水;磷脂酰胆碱PC 、磷脂酰乙醇胺PE 、磷脂酰肌醇PI 、磷脂酸PA 均为标准品(美国S igma 公司);粉末大豆磷脂。

2.2　半制备液相色谱分析条件　Lichros orb si 260色谱柱(10μm ,30cm ×8mm i.d ),流动相∶(A )正己烷Π异丙醇=58Π42

(V ΠV );(B )正己烷/异丙醇/水=55Π42Π3(V ΠV );梯度程序:0～5min ,溶剂A 从100%变为0%,保持20min ,25～30min ,溶

剂A 从0%变为100%,保持10min ;流速:1.8m L Πmin ;蒸发光散射检测器温度80℃,空气压力2.2×105Pa 。进样量:0.5

m L 。各磷脂用相同条件下标准品的保留时间定性。从柱后收集磷脂酰胆碱,在氮气流下蒸发干燥,储存冰箱中备用。

2.3　脂肪酸的甲酯化　称取磷脂酰胆碱1mg ,加入苯2正己烷(1∶1)3m L ,1m ol ΠL 氢氧化钾2乙醇溶液3m L ,密封,于40℃放置40min 完成甲酯化。冷却,稀酸中和,加25m L 水,吸出析出的有机相,浓缩后供气相色谱分析。

2.4　气相色谱分析条件　色谱柱4m ×2mm i.d ,固定相为Chroms orb WHP 60～80,10%DEG S;FI D 检测器,柱温195℃;氮气流速25m L Πmin ,H 2流速30m L Πmin ,空气流速250m L Πmin ;进样量5μL 。

3　结果与讨论

3.1　磷脂的分离　磷脂的分离有多种方法,应用最多的是以硅胶为固定相的正相高效液相色谱法,由于流动相组成的变化影响磷脂的分离,所以本实验比较了流动相组成比例不同时的分离效果,选定以上的梯度程序为磷脂分离的最佳洗脱条件。在该条件下,样品中组分的出峰顺序为:PE 18.89min ,PA 23.38min ,PI 26.88min ,PC 31.25min 。

3.2　磷脂的酯交换甲酯化　气相色谱分析脂肪酸一般采用甲酯化法,常用的有硫酸2甲醇法,三氟化硼2甲醇法等。本实验选择的方法特别适用于微量和痕量脂肪酸的分析。

3.3　测定结果　气相色谱分析脂肪酸采用增加峰高法定性,峰面积归一化法定量。3次平行测定的结果为:亚油酸5411%,RS D =0.43%,油酸22.4%,RS D =1.68%,棕榈酸11.6%,RS D =2.37%,亚麻酸7.5%,RS D =5.68%,硬脂酸414%,RS D =0.98%

。第31卷