高效液相色谱仪的使用及运行性能测试
高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的
1.了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。?
2.掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
3.掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法,验证各部件及整机的性能。
实验器材?
高效液相色谱仪,LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、CTO-10Asvp温度控制器。Shim-packVP-ODS C18 150×分析柱、20μl进样器、AS3210型超声波发生器。无水甲醇和双蒸水各500ml(脱气处理)、萘、咖啡因(均为色谱纯或分析纯)。
实验原理
高效液相色谱法是一种现代液相色谱法,其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理,得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
描述
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。LC-2010和Agilent1100型为单泵型,适于单一流动相的洗脱;LC-10Avp型为双泵型高效液相色谱仪,适于程序洗脱。单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1。
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实验步骤?
(一)高效液相色谱仪的基本操作步骤(以岛津LC-10A为例)
1.依照顺序开机,自检完毕后进入操作模板;
2.设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告;
3.完成实验过程,打印试验结果,依照顺序关机。
(二)性能测试
高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能,接着是检测器的性能,最后是整机的性能验证。验证目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。
1.验证标准
按照中华人民共和国国家计量检定规程,高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的
合格标准见表9-1。
表9-1 高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准
验证部件验证项目合格标准
流量设定值误差Ss
输液泵
流量稳定性误差SR
柱温箱
柱温箱设定值误差ΔTs < ±2℃
柱温箱控温稳定性Tc ≤1℃自动进样器进样量准确度误差≤±2%
检测器基线噪声≤2×10+5AU
最小检测浓度≤1×(萘的甲醇溶液) 基线漂移≤5×
整机性能定性测量重复性误差RSD≤%
2.验证步骤
(1)输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定将
表9-2 流量、次数、收集时间表
流量设定值(mL/min)
测量次数 3 3 3
流动相收集时间(min)10 55
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(3)自动进样器进样量准确度误差的检定
取进样瓶装入1ml水,用天平精密称定其重量,然后置于自动进样器上让其进样10次,每次50μl。进样完成后再精密称定其重量,由重量差计算进样量准确度,结果填入数据记录与处理的表16-5中。
(4)检测器的检定
①
②的萘/甲醇溶液进样20μl,记录色谱图,由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高算按照下列公式计最小检测浓度CL。
CL=(2×Nd×C)/H
式中: CL:最小检测浓度,;Nd:基线噪声峰峰高,mm;
C:标准溶液浓度,;H:标准溶液峰峰高,mm。
实验结果填入数据记录与处理的表16-6中。
(5)整机性能的检定
℃
数据记录与处理
将上述的实验数据记录于下列各表,并进行相应的数据处理,得出检定结论。
(1)输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定
表9-3 输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定结果
仪型号:泵型号:流动相:色谱柱:鉴定日期:检定人:复核人:
Fs
1次2次3次1次2次3次1次2次3次
W1
W2
t
T
ρT
Fm=(W2-W1)/ ρT·t
SS=(Fm-FS)/FS×100%
平均SS
F=(Fm1+Fm2+Fm3)/3
Fmax
Fmin
SR=(Fmax-
Fmin)/F×100%
此项检定结论:(2)柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS 和控温稳定性TC 的检定表9-4 柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS 和控温稳定性TC 的检定结果
仪型号:柱温箱型号:数字温度仪型号:
T设定35℃45℃
时间读数时间读数
稳定时
第1次
第2次
第3次
第4次
第5次
第6次
第7次
T平均
T最大
T最小
ΔTs=T平均-T设定
Tc =T最大-T最小
此项检定结论:
(3)自动进样量准确度误差的检定
表9-5 自动进样量准确度误差的检定结果
液相色谱仪型号:自动进样器型号:检定温度:℃
进样前进样瓶加水的总重W1(g)进样后进样瓶加水的总重
W2(g)
水的密度ρ
(g/ml)
进样量准确度误
差(%)
进样量准确度误差=[(W1-W2)-(50×10×10-3×ρ)]/(50×10×10-3×ρ)×100%此项检定结论:(4)检测器的检定
表9-6 检测器的检定结果
液相色谱仪型号:检测器型号:色谱柱:
流动相:流速:萘甲醇标准溶液浓度C:配制人:配制日期:
基线噪声Nd 基线漂移H 最小检测浓度CL
最小检测浓度的计算: CL=(2×Nd×C)/H
此项检定结论:
(5)高效液相色谱仪整机性能的检定
表9-7 整机性能的检定结果
液相色谱仪型号:检测器型号:色谱柱:检测波长:nm流动相:
流速:标准溶液类型:浓度:配制人:配制日期:
定性测定(保留时间)定量测定(峰面积)
第1次
第2次
第3次
第4次
第5次
第6次
平均值
测量误差的RSD
备注:测量误差的RSD采用EXCEL函数表格计算
此项检定结论:高效液相色谱仪的验证结果分析和综合评价根据实验测定结果,讨论说明高效液相色谱仪整体运行性能状况。