饲养层细胞的影响因素

饲养层细胞的影响因素

饲养层种类

STOPMEF：对各种动物都较适宜，，但最可靠的方法还是根据动

物种类筛选最佳饲养层为宜。有研究表明，PMEF比STO更适合用于

小鼠ES(胚胎干细胞)的培养。

UE(子宫上皮细胞)

BRL(大鼠肝细胞)等

动物种类

需要经过筛选来确定最适宜该种动物ES分离克隆的饲养层

丝裂霉素处理滋养层的时间

目前丝裂霉素(常用有丝分裂阻断剂)处理时间在小鼠成纤维细胞上一般要求为：在37摄氏度，5%二氧化碳饱和温度的条件下处理

24h，时间过短达不到预定目的，成纤维细胞不能被成功地抑制住，

时间过长则使细胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，从而直

接影响ES细胞增殖和分化的抑制。同时处理完的清洗工作也很重要，一般要求用无钙镁PBS冲洗4~5遍，以确保丝裂霉素的彻底清除。

饲养层细胞的代数及密度

以小鼠成纤维细胞为例，选3~5代，密度为10^6-10^7个/ml为宜，代数过低所含杂细胞太多，代数过高则细胞活力降低。

在细胞培养中有分化抑制作用的单层贴壁细胞

所谓饲养层细胞就是指一些特定细胞(如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞)，经有丝分裂阻断剂(常用

丝裂霉素)处理后所得的细胞单层。是细胞培养，尤其是胚胎干细胞

培养常用的生长增值促进剂和分化抑制剂。

在正常机体内，细胞除了获得一些血液来的营养外，还在细胞与细胞之间互换特殊的物质，用于分裂分化和营养等。因而，在细胞

体外培养中，除了正常的培养基外，先培养一层特殊的细胞，然后

再在其上接种要实验的细胞，这样更能模拟体内环境。这些特殊的

细胞就是饲养层细胞，通常是成纤维类细胞，这些细胞可以提供实

验细胞更好的营养，有的分化研究则是必须有饲养层细胞。

在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养

细胞(Feedercell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少

量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一过程中

必须使用饲养细胞。