红外测定蛋白质结构

ＹＹＳＷＤＢ００８７　蛋白质多肽二级结构的测定傅立叶变换红外光谱法
YY-SW-DB-0087
蛋白质／多肽傅立叶变换红外光谱法　
１．　范围 本方法采用傅立叶变换红外光谱法测定蛋白质和多肽的二级结构为半定量方法
具有样品用量小和不需要高纯晶体等特点蛋白质等的结构除能获得有关组分的信息外如水溶液酸碱性等这是用其它仪器难以得到的成果
主要是对其红外光谱中酰胺Ｉ谱带（氘代后，称酰胺Ｉ酰胺Ｉ
谱带为
无规卷曲和转角等不同结构振动峰的加合带在１６２０ｃｍ１７００ｃｍ目前常应用去卷积
使加合带中处于不同波数的无规卷曲等各个吸收峰得以分辨，最后经谱带拟合　３．试剂　３．１ Ｄ２０　光谱纯真空干燥箱中１０５然后保存在干燥器中备用　ＨｇＣｄＴｅ或ＤＴＧＳ检测器　５．试样制备　５．１ 液体样品ｗ／ｖ装入密封式液体池或可拆卸式液体池液层厚度为２５　５．３ 固体样品以样品ｌ２００ｍｇ的比例在玛瑙研钵中研细混匀在油压机上以１２０００　ｌｂ５ｍｉｎ
　５．４ 薄膜法一种是将样品加热熔融另一种方法是将样品制成溶液熔融法制膜时必须注意升华和其它化学变化因为溶剂的去除比较麻烦往往需要在真空干燥箱中烘数小时之久常常选用对样品溶解度好易挥发的溶剂主要记录蛋白的酰胺Ｉ　６．２　图谱分析１１　范围为一宽峰
１７００ｃｍ－１范围为酰胺Ｉ经去卷积处理后谱带可分离出７个未确定峰位的吸收峰进一步确定７个吸收峰的波数位置对峰位半峰宽
谱带拟合的准确性用残余均方根因子表示 一般认为
无规卷曲常出现在１６４３　ｃｍ
－１折叠结构分别在１６２３ｃｍ－１
而１６６５ｃｍ－１和１６８０ｃｍ－１附近的两个吸收峰常被指定为转角结构的吸收，中
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１６１２　ｃｍ－１附近的吸收峰解释为蛋白质和多肽的侧链吸收
选择吸收峰半高宽为１６ｃｍ分辨率增强因子ｋ＝２．３
拟合过程中依次优化峰高，半高宽，最后调整峰位
８．参考文献　
１　张丰德南开大学出版社，　１９９６．　１８５－１９４　２　聂松青．　生物物理学报，１９８９，５（２）：２０８－２１２　
３　宋占军．　生物化学杂志
高等教育出版社。