紫杉醇HPLC分析方法按USP要求
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紫杉醇HPLC分析检验方法
测试方法1：（适用于天然提取的紫杉醇）
1、试剂：
1.1乙腈
1.2甲醇
1.3磷酸
1.4乙酸
1.5纯化水
2、溶液：
2.1稀释剂：甲醇-乙酸混合溶液（1000:1 V/V）。
2.2系统适用性溶液：精密称取紫杉醇对照品和10-去乙酰-7-差向紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，浓度约为（0.1+0.1）mg/ml。
2.3标准溶液：
标准溶液A：精密称取紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，可采用逐步稀释的方式，浓度约为0.1mg/ml。
标准溶液B：精密称取紫杉醇对照品，用稀释剂溶解，可采用逐步稀释的方式，浓度约为0.01mg/ml。
2.4供试液：
供试液①：取约5mg紫杉醇样品，准确称重，置于5ml的容量瓶中，用稀释剂溶解、定容，混合。
供试液②：取约5mg紫杉醇样品，准确称重，置于50ml的容量瓶中，用稀释剂溶解、定容，混合。
3、流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸的水（45:5:50 V/V），需混合、脱气及过滤。
4、色谱条件：
4.1检测波长：227nm
4.2色谱柱： 4.6- mm×2
5.0-cm，5-μm ，L43填料（PFP，五氟苯基）。
4.3流速：1.2ml/min
4.4柱温： 20℃～25℃
4.5 运行时间:约30min
5、要求：
5.1系统适用性试验：
5.1.1精密度：取系统适用性溶液进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，连续5次进样紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差（RSD％）≤2%；
5.1.2分离度：紫杉醇与10-去乙酰-7-差向紫杉醇的分离度(Rs)≥1.5；
5.1.3拖尾因子：紫杉醇峰的拖尾因子≤1.5。
5.2标准溶液测试：
5.2.1重复进样标准溶液A的紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差≤2%。
5.2.2重复进样标准溶液B的紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差≤15%。
5.2.3检测极限：相关物质的检测定量限为0.005％。
5.2.4相关物质的相对保留时间（RRT）和相对响应因子（f）:
6、相关物质分析：
将标准溶液B和供试液①分别进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，并按色谱图上各相关物质峰面积以外标百分比方法计算相关物质含量（以无水、无溶剂干基计）。
计算公式：
f i×A i×C S0.01
I i = ×100%
A S0.01×C1.0×（1－M1- M2）
式中：
I i—相关物质i的重量百分含量，%；
f i—相关物质i的相对响应因子；
A i—相关物质i的峰面积值，AU*s；
C S0.01—标准溶液中紫杉醇的浓度，mg/ml；
S0.01—标准中紫杉醇峰面积的平均值，AU*s；
C1.0—供试液的浓度，mg/ml；
M1—样品中水分含量；
M2—样品中残留溶剂总量；
7、含量分析：
将标准溶液A和供试液②分别进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，并按色谱图上紫杉醇峰面积计算紫杉醇含量（以无水、无溶剂干基计）。
计算公式：
A u×C S0.1
P = ×100%
A S0.1×C0.1×（1－M1- M2）
式中：
P—紫杉醇重量百分含量，%；
A u—供试液紫杉醇的峰面积值，AU*s；
C S0.1—标准溶液中紫杉醇的浓度，mg/ml；
A S0.1—标准中紫杉醇峰面积的平均值，AU*s；
C0.1—供试液的浓度，mg/ml；
M1—样品中水分含量；
M2—样品中残留溶剂总量；
测试方法2（适用于半合成紫杉醇）
1、试剂：
1.1乙腈
1.2纯化水
2、溶液：
2.1系统适用性溶液：精密称取紫杉醇对照品和10-去乙酰-7-差向紫杉醇对照品，用乙腈溶解，可采用逐步稀释的方式，浓度约为（0.96+0.008）mg/ml。
2.2 标准溶液：取约10mg紫杉醇对照品，准确称重，置于10ml的容量瓶中，用乙腈溶解、定容，混合。
2.3供试液：取约10mg紫杉醇样品，准确称重，置于10ml的容量瓶中，用乙腈溶解、定容，混合。
3、流动相：
流动相A：乙腈-水＝2:3(v/v) ,需混合、脱气及过滤；
流动相B：乙腈。
4、色谱条件：
4.1
4.2
4.3流速：1.2ml/min；
4.4柱温：35℃；
4.5检测波长：227nm；
5、要求：
5.1系统适用性试验：
5.1.1精密度：取系统适用性溶液进样15μl至液相色谱系统，记录色谱图，连续5次进样紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差(RSD％)≤2%；
5.1.2分离度：紫杉醇与10-去乙酰-7-差向紫杉醇的分离度(Rs)≥1.5。
5.2 标准溶液测试：
5.2.1重复进样的紫杉醇峰面积测量值的相对标准偏差(RSD％)≤2%。
5.2.2 相关物质的相对保留时间（RRT）和相对响应因子（f）:
6、相关物质分析：
将供试液进样15μl至液相色谱系统，记录色谱图，并按色谱图上各相关物质峰面积和总峰面积计算相关物质的含量。
计算公式：
f i×Ai
Ii = ×100%
Σ（f i×A i）
式中：
Ii—物质i的面积归一化百分含量，%；
fi—物质i的相对响应因子；
Ai—物质i的峰面积值，AU*s。
7、含量分析：
将标准溶液和供试液分别进样10μl至液相色谱系统，记录色谱图，并按色谱图上紫杉醇峰面积计算紫杉醇的含量（以无水、无溶剂干基计）。
计算公式：
A×C S
P = ×100%
A S×C×（1－M1- M2）
式中：
P—紫杉醇重量百分含量，%；
A—供试液中紫杉醇的峰面积值，AU*s；