体外分析技术讲义
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常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
RIA标准曲线
• 核医学（第9版） 4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab) 温浴反应达平衡 加入*Ag已知定量(ml)
B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
• 核医学（第9版）
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品
NSB管 100（零标准品）
S0-S5标准管 100
样品管 —
质控管 —
质控血清
—
—
—
50
待测样本
—
—
100
—
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
第一节
放射性标记分析技术
• 核医学（第9版）
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
分离（固相、 液相）B、F
Ag【各种体液（待 测抗原)】与一定量 的*Ag (标记抗原） 共同与限量特异性 Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
RIA试剂盒组成
放免分析的 三大试剂 特异性抗体
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
体外分析技 术
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
• 核医学（第9版）
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础。 核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析方 法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核心， 其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
125I-Ag
100
100
100
100
蒸馏水
100
—
—
—
抗体
—
100
100
100
混匀，37℃温育1小时
分离试剂
500
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清
液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质检 测的新纪元。
• 核医学（第9版） 1. RIA的基本原理
特异性 抗体Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同； 在一定的反应条件下； *Ag、Ab为恒定量； *Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
• 核医学（第9版）
1. 酶标记免疫分析
酶标记免疫分析技术（EIA）中以酶联免疫吸附 法（ELISA）应用最广泛。
ELISA是用聚苯乙烯作微量反应板，酶标记抗 原或抗体，反应模式与RIA/IRMA相同，用酶替代了 125I，检测仪器是酶标仪。
常用的酶有：辣根过氧化物酶、碱化磷酸酶、 葡萄糖氧化酶。
Ab 非竞争性结合
过量 正相关
快 宽 大分子 无
RIA法与IRMA法比较示意图
IRMA与RIA低剂量区不确定因素比较示意图
第二节
非放射性标记免疫分析技术
• 核医学（第9版）
1. 酶标记免疫分析 2. 化学发光免疫分析 （1）直接化学发光免疫分析 （2）化学发光酶免疫分析 3. 电化学发光免疫分析 4. 光激化学发光免疫分析 5. 时间分辨荧光免疫分析 6. 上转发光免疫分析技术
酶标仪与洗板机
• 核医学（第9版） 2. 化学发光免疫分析 （1）直接化学发光免疫分析
用能产生化学发光的化合物代替放射性标记物，标记抗原或抗体，其他步骤和RIA或 IRMA基本相同，反应以后，利用碱性条件下化学发光物质在氧化物作用下可以发生单光子 放射。检测光子的数量就可以反映复合物的量。常用的化学发光物质是异鲁米那和吖啶酯。
RIA沉淀分离法示意图
RIA固相分离法示意图
• 核医学（第9版）
二、免疫放射分析技术
免疫放射分析技术是指在体外应用放射性核素标记抗体，过量的标记抗体与待测抗 原混合，待充分反应后，除去游离的标记抗体，其放射性强度与待测抗原呈正比。
IRMA反应原理示意图
IRMA标准曲线示意图
• 核医学（第9版）
免疫放射分析分离方法
（1）抗体：亲和力、特异性、滴度（稀释度）； （2）标记抗原： 比活度wk.baidu.com放射化学纯度、免疫活性、 生物活性、半衰期足够长、125I； （3）标准品：化学结构、免疫活性、定量精确。
RIA法抗体稀释曲线示意图
• 核医学（第9版） 6. 放射免疫分析的分离方法
（1）液相分离方法（沉淀法、双 抗体法、双抗体法+沉淀法）； （2）固相分离法。
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平衡
分离（固相、 液相）B、F
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
RIA标准曲线制作
• 核医学（第9版） • 3. RIA标准曲线制作
1. 双抗体夹心法（双位点法）； 2. 标记第三抗体法（标记双抗法）； 3. 双标记抗体法； 4. 生物素链霉亲和素分离法。
• 核医学（第9版）
标记物 原理 抗体量 标准曲线 达到平衡的速度 可测范围 应用对象 低剂量区不确定因素
RIA法
Ag 竞争性结合
限量 负相关
慢 窄 大分子、小分子 有
IRMA法
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
RIA标准曲线
• 核医学（第9版） 4. 未知样品的测量
加入已知定量(ml)抗体 (Ab) 温浴反应达平衡 加入*Ag已知定量(ml)
B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
• 核医学（第9版）
2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品
NSB管 100（零标准品）
S0-S5标准管 100
样品管 —
质控管 —
质控血清
—
—
—
50
待测样本
—
—
100
—
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
第一节
放射性标记分析技术
• 核医学（第9版）
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
分离（固相、 液相）B、F
Ag【各种体液（待 测抗原)】与一定量 的*Ag (标记抗原） 共同与限量特异性 Ab发生反应
RIA分析待测样本测量示意图
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
RIA试剂盒组成
放免分析的 三大试剂 特异性抗体
• 核医学（第9版） 5. 放射免疫分析的基本试剂
体外分析技 术
第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
• 核医学（第9版）
体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础。 核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析方 法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核心， 其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
125I-Ag
100
100
100
100
蒸馏水
100
—
—
—
抗体
—
100
100
100
混匀，37℃温育1小时
分离试剂
500
500
500
500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清
液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质检 测的新纪元。
• 核医学（第9版） 1. RIA的基本原理
特异性 抗体Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同； 在一定的反应条件下； *Ag、Ab为恒定量； *Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
• 核医学（第9版）
1. 酶标记免疫分析
酶标记免疫分析技术（EIA）中以酶联免疫吸附 法（ELISA）应用最广泛。
ELISA是用聚苯乙烯作微量反应板，酶标记抗 原或抗体，反应模式与RIA/IRMA相同，用酶替代了 125I，检测仪器是酶标仪。
常用的酶有：辣根过氧化物酶、碱化磷酸酶、 葡萄糖氧化酶。
Ab 非竞争性结合
过量 正相关
快 宽 大分子 无
RIA法与IRMA法比较示意图
IRMA与RIA低剂量区不确定因素比较示意图
第二节
非放射性标记免疫分析技术
• 核医学（第9版）
1. 酶标记免疫分析 2. 化学发光免疫分析 （1）直接化学发光免疫分析 （2）化学发光酶免疫分析 3. 电化学发光免疫分析 4. 光激化学发光免疫分析 5. 时间分辨荧光免疫分析 6. 上转发光免疫分析技术
酶标仪与洗板机
• 核医学（第9版） 2. 化学发光免疫分析 （1）直接化学发光免疫分析
用能产生化学发光的化合物代替放射性标记物，标记抗原或抗体，其他步骤和RIA或 IRMA基本相同，反应以后，利用碱性条件下化学发光物质在氧化物作用下可以发生单光子 放射。检测光子的数量就可以反映复合物的量。常用的化学发光物质是异鲁米那和吖啶酯。
RIA沉淀分离法示意图
RIA固相分离法示意图
• 核医学（第9版）
二、免疫放射分析技术
免疫放射分析技术是指在体外应用放射性核素标记抗体，过量的标记抗体与待测抗 原混合，待充分反应后，除去游离的标记抗体，其放射性强度与待测抗原呈正比。
IRMA反应原理示意图
IRMA标准曲线示意图
• 核医学（第9版）
免疫放射分析分离方法
（1）抗体：亲和力、特异性、滴度（稀释度）； （2）标记抗原： 比活度wk.baidu.com放射化学纯度、免疫活性、 生物活性、半衰期足够长、125I； （3）标准品：化学结构、免疫活性、定量精确。
RIA法抗体稀释曲线示意图
• 核医学（第9版） 6. 放射免疫分析的分离方法
（1）液相分离方法（沉淀法、双 抗体法、双抗体法+沉淀法）； （2）固相分离法。
• 核医学（第9版） 3. RIA标准曲线制作
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平衡
分离（固相、 液相）B、F
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
RIA标准曲线制作
• 核医学（第9版） • 3. RIA标准曲线制作
1. 双抗体夹心法（双位点法）； 2. 标记第三抗体法（标记双抗法）； 3. 双标记抗体法； 4. 生物素链霉亲和素分离法。
• 核医学（第9版）
标记物 原理 抗体量 标准曲线 达到平衡的速度 可测范围 应用对象 低剂量区不确定因素
RIA法
Ag 竞争性结合
限量 负相关
慢 窄 大分子、小分子 有
IRMA法