益生菌开题报告

4. 1. 7 验证 根据实验的最终优化配比值，进行配料，压制奶片并测定奶片的片重，硬度，脆碎 度，活菌数，并进行感官评价。
4. 2 制作工艺
菌种活化 冻干 配料 菌种扩培 收集菌粉 粉碎 菌粉 离心收集菌体 预冻
奶粉
搅拌
混匀
压片
检验
包装
4. 3 检测指标
4. 3. 1 感官指标 项目 外观 （15） 好 12-15 外形完整，光滑，厚 薄均匀，边缘整齐 色泽 （15） 12-15 乳黄色，色泽均匀 一般 9-11 凹面面积不超过 1/3， 有少量的破碎 9-11 黄色，表面有少量的 斑点，色泽分布基本 均匀 风味 （25） 20-25 口感幼滑，不粘牙 15-19 食之较幼滑，无粗糙 感，不粘牙 口感 （25） 20-25 有牛奶特有的香味 15-19 奶味淡或稍浓 <9 暗黄色，表面有大量 的斑点，颜色较暗， 色泽分布不均匀 <15 口感粗糙，难以下咽， 粘牙 <15 奶味过浓或基本没 有，有明显蛋腥味 质地 （20） 15 20 内质结构细密均匀， 断面组织紧密 11 14 内质结构较均匀，断 面组织基本密实 <11 内质结构松散，断面 较松软或呈粉状 差 <9 表面破碎严重
表1 单因素 蔗糖（%） 菊糖（%） 木糖醇（%） 安赛蜜（%） D-异抗坏血酸（%） 茶多酚（%） CMC D-甘露醇（%） 4 0.3 1 0.01 0.04 0.01 0.1 0.1 5 0.5 2 0.02 0.05 0.012 0.2 0.2 6 0.7 3 0.03 0.06 0.014 0.3 0.3 各单因素梯度设置 添加量梯度 7 0.9 4 0.04 0.07 0.016 0.4 0.4 8 1.1 5 0.05 0.08 0.018 0.5 0.5 9 1.3 6 / 0.09 0.02 0.6 0.6 10 1.5 7 / 0.1 0.022 0.7 0.7
3. 实验材料 3. 1 菌种
嗜酸乳杆菌 双歧杆菌
3. 2 培养基
MRS 固体培养基 MRS 半固体培养基
3. 4 实验仪器
培养箱 耳球 精灯 装置 天平 移液管 pH 计 量筒 平皿 烘箱 冰箱 玻片 厌氧管 20ml 标签纸 烧杯 吸 酒
光学显微镜 菌种保藏设备
超净工作台
针管（1ml）20ml 冷冻冰箱
灭菌锅
恒温培养箱 压片机
显微摄影
冷冻干燥器
高压灭菌锅
YD—1 硬度测试仪
CS—2 脆碎度测试仪等
4. 实验方法 4. 1 益生菌奶片的制备
4. 1. 1 培养基制备 1)嗜酸乳杆菌 MRS 肉汤培养基：葡萄糖 2％、蛋白胨 1％、酵母粉 0.4％、牛肉膏 0.8％、无水乙酸 钠 0.5％、 柠檬酸氢二铵 0.2％、 K2HPO4 0.2%、 MgSO4 0.02%、 MnSO4 0.004%、 吐温 80 0.1％、 pH5.5～5.9。 MRS 半固体培养基：与液体培养基成分相同，琼脂粉加量 0.3%～0.4%。 MRS 固体培养基：与液体培养基成分相同，琼脂加量 0.7%。 保护剂：肌醇 0.01%、氯化钠 0.3%、牛血清蛋白 0.07‰、丙氨酸 0.03‰. 冻干保护剂：海藻糖 13%、 Na 2 HPO4 0.23%、乳糖 3.5%、脱脂奶粉 24%。 2)双歧杆菌 MRS 乳糖培养基： 乳糖 2％、 蛋白胨 1％、 酵母粉 0.4％、 牛肉膏 0.8％、 无水乙酸钠 0.3 ％、柠檬酸氢二铵 0.2％、K2HPO4 0.2%、MgSO4 0.02%、MnSO4 0.005%、吐温 80 0.1％、 L—半胱氨酸盐酸盐 0.05%、pH6.2～6.4。 保护剂： NaCl 0.74%、山梨醇 0.08%、谷氨酸 0.002%。
4. 3. 2 片重检查 取奶片 10 片，精密称定每片的片重并求得平均片重，然后以每片片重与平均片重 比较，超出差异限度(±7.5%)的药片不得多于 2 片，并不得有 1 片超出限度 1 倍。 4. 3. 3 硬度 奶片硬度适宜咀嚼即可 4. 3. 4 脆碎度 片重为 0.5g 或以下者取若干片，使其总重约为 5g；片重大于 0.5g 者取 10 片。用 吹风机吹去脱落的粉末，精密称重，置于脆碎度测定仪中，转动 100 次。取出，同法除 去粉末，精密称重，减失重量不得过 1%，且不得检出断裂、龟裂及粉碎的片。本试验一 般仅作 1 次。如减失重量超过 1%时，可复检 2 次，3 次的平均减失重量不得过 1%，并不 得检出断裂、龟裂及粉碎的片。 4. 2. 3 活菌数检测 菌粉活菌计数：取 5 片益生菌片称重(约 3g)粉碎，用无菌生理盐水稀释至 10mL，
本 科 生 毕 业 论 文 开题报告
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益生菌奶片的研究
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1. 实验目的及意义
益生菌定义为 “一种通过改善肠道微生物平衡从而对宿主施加有益影响的微生物添 加物” 。常应用的益生菌是产生乳酸的细菌，如嗜酸乳杆菌和双歧杆菌等，它们是人类 肠道重要的生理菌，对机体有多种其它正常生理菌群无法比拟的生理作用。其生理作用 包括：调整肠道菌群；提高蛋白质和维生素的代谢；防止便秘；产生抗菌素；缓解乳糖 不耐症；治疗肝损伤；降低结肠癌的发病率；抗肿瘤；增强免疫系统；降低胆固醇；治 疗泌尿系统感染等。肠道菌群的组成对人体营养、免疫、癌症、衰老等有着密切的关系， 促进肠道中有益菌的增殖，抑制有害细菌的生长，对于高血压、高血脂、心脏病、糖尿 病和癌症等生活习惯病防治方面的主要意义，已经引起各国的重视。因此，目前益生菌 及其制品成为国内外研究热点， 在食品、 保健品、 药品等领域已有多种益生菌制剂问世， 并普遍受到广大消费者的欢迎。 而奶片的主要营养成分主要包括蛋白质、脂肪、碳水化合物等，由于其营养丰富、 可直接食用、携带方便、保质期长等优点，与鲜奶相比，奶片无需冷藏、无需加热食用， 已成为乳制品中的亮点。食用奶片可享受到牛奶的风味和质地，独有的加工工艺，保留 了牛奶中多种营养成分。将益生菌加入奶片中，制成益生菌咀嚼奶片． 这样在保留了 牛奶的营养的同时又达到了上述的益生菌的生理保健目的。 此产品成本中等， 附加值高， 可成为市场上新星的产品，有很好的市场前景。
冻干保护剂：甘氨酸 5.5%、碳酸氢钠 0.8%、低聚糖 7%、精氨酸 4.5%、脱脂乳 25%。 磷酸缓冲液： K 2 HPO 4 76g、 KH 2 PO 4 40.8g 培养基需 121℃高压灭菌，15 分钟。 4. 1. 2 菌种的活化及菌粉制备 将嗜酸乳杆菌与双歧杆菌分别以 5%的接种量接入无菌无氧的的 MRS 液体培养基中 进行活化，37℃培养 18h,活化三代。将菌种离心（10000r/min） ，无菌操作加入冻干保 护剂， 倒平板进行平板预冻 （-40.3℃） 及冻干操作。 收集菌粉， 要求活菌数> 1 10 cfu/g。 4. 1. 3 各单因素筛选 按量将 0.1%的冻干菌粉与下述原料混合调配,然后压成直径 8×8×3mm 的片剂 （压 片压力等参考实验仪器） 。测定奶片的片重，硬度，脆碎度并进行活菌计数，感官评价。
of ACE inhibitors on mortality and morbidity in patients with AMI: Does tissue selectivity matter VALUE IN HEALTH 14 (2011) 184 –191 [10] N. Khaowpha A. Mitrevej and N. Ruangwises. Nutritional Values and Stability of Goat Milk Tablets 12-20 [11] Mayurachat Natvaratat1 Penkwan Chompreeda Vichai Haruthaithanasan and Hathairat Rimkeeree Optimization of Supplementary Protein Milk Tablet Formulation for Rural Mahidol University Journal of Pharmaceutical Science 2010; 37 3-4 ,
2006 年第 4 期 （总第 119 期） [3] 邓丽. 芮汉明. 益生菌的研究进展. 广州食品工业科技. -0025-084 [4] 麻士卫. 高鹏飞. 王秋实. 阎建军. 邓承远. 赵虎云. 益生菌咀嚼片硬度与益生 菌细胞存活率的关系. 食品与发酵工业 [5] 王人 悦. 郑琳琳. 佟永薇. 益生菌制品的应用及前景展望. 食品研究与开发. 第 34 卷 11 期 [6] 马强. 吕嘉枥. 赵维俊. 影响益生菌奶片压制中活菌数因素的研究. 中国乳品工 艺. 1001-2230（2011）11-0013-03 [7] 朱敖兰. 杨洁. 生物制品冻干保护剂及其保护机理的研究进展. 喀什师范学院学 报 第 28 卷第 6 期 1007-2764(2003)增刊
2. 产品研发现状
目前，奶片食品还没有国家标准，生产工艺较为简单，配方也无固定的模式，其 硬度、粘度或营养辅料的比例视消费者的爱好或需要而定。各种配方的奶片执行各自企 业制定的企业标准，营养成分含量的差别是比较大的。奶片的配方不统一，又随意性。 尽管各种品牌奶片的配方不同，营养成分的含量也不尽相同，但是奶片中的蛋白质和脂 肪含量应该，也大多是在 70%左右，每天用量可折合鲜奶 250 毫升或奶粉 30 克。而且有 关奶片的相关指标和规定尚未出台，从营养价值和卫生角度衡量，也没有一个统一的规 范。在研究开发奶片产品时，必须要做到营养均衡，同时奶片产品应该有自身的特点， 必须有良好的风味及口感，食用及携带方便，所以在研究开发奶片产品时，主要是从奶 片产品的营养、风味及口感方面进行研究。
-9 -10 -11 震荡摇匀。再取 1mL,反复如前稀释，取 10 ,10 ,10 三个稀释度，将灭菌并已冷却至
45℃的 MRS 固体培养基倾注于平皿， 分别吸取 1ml 置于灭菌平皿中。 每个平皿倾注约 15ml. 迅速混匀，使其凝固，注意不要有气泡。37℃下培养 24—48h，待形成肉眼可见的菌落 后，可进行计数。 奶片活菌计数：取 5 片益生菌片称重(约 3g)粉碎，用无菌生理盐水稀释至 30mL， 震荡摇匀。再取 1mL,反复如前稀释，取 10 4 ， 10 5 两个稀释度，将灭菌并已冷却至 45 ℃的 MRS 固体培养基倾注于平皿， 分别吸取 1ml 置于灭菌平皿中。 每个平皿倾注约 15ml. 迅速混匀，使其凝固，注意不要有气泡。37℃下培养 24—48h，待形成肉眼可见的菌落 后，可进行计数。
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4. 1. 4 P-B 试验 由于单因素试验只讨论一种因素的影响，而忽视因素间的交互作用，不能获得最佳 的优化条件。因此需根据 8 组单因素试验的数据结果进行 P-B 试验设计，从其中筛选出 对活菌数等指标的主要影响因素。 4. 1. 5 爬坡试验 根据 P-B 的试验结果，可以进一步设计爬坡试验，从而将主要因素设定在一个更精 确的范围内，让实验结果更加可靠。 4. 1. 6 响应面 通过响应面可以获得响应值的数学表达式，即回归方程，从而预测最佳值。
[8] M. Vikrama. A. Baczewski.B. Shanker. L. Kempel. Accelerated Cartesian expansion (ACE) based framework for the rapid evaluation of diffusion, lossy wave, and Klein–Gordon potentials Journal of Computational Physics 229 (2010) 9119–9134 [9] Iftekhar Kalsekar, PhD Julie Koehler, PharmD, FCCP John Mulvaney, MHA. Impact
5 实验进度安排
实验周次 1 2 3 4-14 论文任务及要求 收集资料，并对资料进行整理； 制定实验方案，进行讨论； 实验仪器、设备及药品的准备； 进行实验；
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实验数据的整理、分析，撰写论文； 撰写论文，对论文进行预审、补充； 准备答辩。
参考文献
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