Duchenne型肌营养不良症状(DMD)
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它可全面分析DMD基因的79个外显子的缺失或重复 突变,扩大传统mPCR方法检测缺失的范围,简便、高效, 但技术条件要求高,成本大。
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20
产前诊断--变性高效液相色谱(DHPLC)
DHPLC技术是通过离子对反向液相色谱分析来区分异 源双链核酸分子及同源双链核酸分子DNA片段,筛查 DNA的变化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝胶, 相对高效、经济、自动化程度高。
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2
DMD---临床治疗
药物治疗：糖皮质激素治疗是目前唯一被循 证医学证实有效，可延缓DMD病程的药物。 短期口服激素治疗可增强骨骼肌力量和功能， 并可能在更长时间内稳定骨骼肌力量和功能。
基因治疗：利用不直接引起人类疾病，免疫 原性较小的腺相关病毒（AAV）为载体，导 入人工剪裁的Dys基因。
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8
DMD---实验室诊断
细胞遗传学检查 生物化学检查 基因诊断
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9
DMD---实验室诊断
染色体检查（X ,Y） X染色质检查 X染色质的检查可刮取口腔粘 膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用绒毛 或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇或甲苯 胺蓝染色，在光镜下计数X染色质数目。
Y染色质检查 Y染色质检查适用于具有一个 或一个以上Y染色体的个体或细胞群 。
Duchenne型肌营养不良症状 (DMD)
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1
DMD---临床表现
杜氏肌营养不良(DMD)属于X 连锁隐性遗传病， 是男性中常见的遗传性疾病。发病率约为1/3 500 活男婴，女性多为致病基因携带者，发病者罕见， 且症状较轻。D M D 发病年龄偏小，起病隐袭， 病程长，在男患中症状较重，且病死率高，患者 常常以肌肉的进行性萎缩无力并伴有腓肠肌假性 肥大为特征，多在3,5岁发病，病程进展快，大多 在20岁左右死于心肺衰竭。患儿由卧到站立有特 殊的过程（Gower征），走路为鸭型步态。
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15
产前诊断--策略
确定胎儿性别 如胎儿为男性,则应针对先证者的基因突变或多态 性标记进行分析,确定胎儿是否获得突变等位基因; 如为女性,则可停止基因诊断,因为女性杂合子通常 不患病。
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16
DMD--产前基因诊断方法
多重PCR STR-PCR 探针连接多重扩增(MLPA) 变性高效液相色谱(DHPLC) 抗肌萎缩蛋白的免疫组化
康复治疗、矫形治疗、社会心理治疗等。
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3
DMD---遗传方式及特征
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4
DMD---遗传方式及特征
（1）系谱中常常只有男性患者
（2）父母都无病时，女儿则不会发病，儿子可能 发病；
（3）由于交叉遗传，患者的同胞、舅舅、姨表兄 弟、外甥常常为本病患者；
（4）由于男性患者的子女都正常，故可见隔代遗 传；
由于基因突变情况复杂,产前诊断前要进行先证者预分 析,以确定其基因突变细节及父母基因多态性标记是否 提供了杂合状态的信息,以确定在该家系中实行产前诊 断的途径和策略。
首先应进行家系成员21号染色体上STR标记的分析。
该项检测具备的优点:一是检测21三体综合征,因为 在二次生育时孕妇年龄普遍偏大,生育21三体综合征患 儿的风险大为提高;二是判断是否有母源污染及污染程 度,有时会出现“胎儿材料”完全是母源的情况;三是核 对所分析的DNA材料是否存在混乱。后两点是导致产 前诊断差错的主要原因。
(2)早期诊断:如胎儿受累,处理比较方便(夫妇的知情选择 ),而且万一取材失败或分析中出现问题,还可在稍后时 间取羊水;采集羊水在孕中期,万一发生血性污染则需进 行羊水培养,回旋余地太小,重新取样时间上比较困难。
(3)成功率高:绒毛提取的DNA实质用文好档 量多,成功率高。 14
产前诊断--策略
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6
DMD---分子遗传及突变情况
Dys 和抗肌萎缩蛋白聚糖等蛋白装配在一起形成 抗肌萎缩蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC 形成了一个穿过肌膜传递信号，连接细胞外基质 和细胞内肌动蛋白骨架的重要结构。
Dys 基因表达的缺乏会影响DAPC 的形成，使分 子桥中断，至少导致两个结果：第一，细胞膜变 得更脆弱在肌肉离心性收缩的时候会被机械力破 坏；第二，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离 子通道将会失调。这就是导致疾病的发生机制。
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17
产前诊断--缺失型突变检测方法 多重PCR
DMD是以缺失型突变占基因的突变55%~65%,主要 分布5′端和中央2个缺失热点区,在对其缺失突变热点 区进行基因检测时,可检出至少一半患者。
它是目前用于缺失型DMD诊断最简便最有效的方法, 已成为D/BMD患者基因诊断及产前基因诊断的首选 技术,而且此技术可根据检出缺失外显子是整码还是移 码来判断患者的预后。
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18
产前诊断--非缺失型突变检测方法 STR-PCR
多重PCR方法可检测到缺失型男性患者,对女性携带者 及非缺失型突变患者无能为力。目前应用STR-PCR技 术进行连锁分析已成为非缺失型DMD家系连锁分析的 首选技术。
此方法在有先证者的家系或先证者已故但有肯定携带 者的家系中较有价值,而先证者已故的散发病例意义不 大,是一种概率性诊断,只有选择的STR位点越多,其分析 结果越可靠。
（5）女性患者的父亲一定是患者,母亲一定是携带 者。
注：在XR病中，男性的致病基因只能从母亲传来，
将来只能传给女儿，不存在从男性向男性传递。即
父传女，母传子，称及突变情况
D M D 由抗肌萎缩蛋白（Dys）基因突 变所致，属于进 行性肌营养不良症常见类型。 已证实人类抗肌萎缩蛋白基因定位于X 染色 体短臂上(Xp21.1 － 3)，基因全长约2 220kb，含79 个外显子，cDNA 长14kb， 是目前已知的最大人类基因。
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21
产前诊断--抗肌萎缩蛋白的免疫组 化
抗肌萎缩蛋白不同程度的缺乏是DMD基本病理基础, 因此对DMD患者或携带者除基因水平上检测,还可从 蛋白水平上进行抗肌萎缩蛋白检测。国内学者已用免 疫荧光技术检测抗肌萎缩蛋白,发现它有助于DMD或 其他类型患者的临床诊断。
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22
医师建议
你的女儿有四分之一的概率为DMD的携带者，这样她 与正常男性结婚所生子女当中，儿子有八分之一的发 病可能性，而女儿都不会发病，但会有八分之一为携 带者的几率。所以我建议你女儿进行产前性别鉴定， 选择生育女儿。
假设
Ⅲ-1核型为 Ⅲ-1核型为
XAXa
XAXA
DMD家系图谱
前概率
1/2
1/2
条件概率 1/3
1
联合概率 1/2×1/3 1/2
后概率
1/4
3/4
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13
产前诊断--时机
产前诊断有2个时间窗口:首选10~12孕周采集绒毛;次选 为15~18孕周采集羊水。选择绒毛进行产前诊断的理 由有3条
:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突变为主,母 源污染将导致诊断错误,发生血性羊水时若不经培养则 直接导致诊断错误,而绒毛则可通过形态检查准确挑选 。
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23
联合多重PCR和STR多态单体型连锁分析是缺失和重
复型检测的理想方法,可对胎儿进行初步的产前基因诊
断,但对由新生突变所致的散发型DMD者不能作出检
测,可用其他方法解决。
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19
产前诊断--探针连接多重扩增(MLPA)
目前MLPA是检测缺失和重复突变的新方法,尤其对受 累者致病性突变未知的女性携带者基因突变的筛查更 为重要。
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7
DMD---分子遗传及突变情况
DMD 患者约3 0 % 为自发性突变，其余的 为X染色体隐性遗传。在各种类型突变中， 单个或多个外显子缺失突变患者占65% － 70%；无意义或框移造成的点突变占30%， 重复占5% － 15%：故DMD 突变类型主要 为缺失，其特点是Xp21 上外显子缺失的不 均一性。
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10
DMD---实验室诊断
生物化学诊断
可对血清酶和蛋白质进行定性和定量分析。血清肌
酸激酶（CK）含量在血清酶学检查中最有价值。
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11
DMD---实验室诊断
基因诊断
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12
DMD---风险估计
DMD为XR遗传病 女性携带者中约有1/3血清肌酐正常 Ⅱ—2为携带者，核型XAXa
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产前诊断--变性高效液相色谱(DHPLC)
DHPLC技术是通过离子对反向液相色谱分析来区分异 源双链核酸分子及同源双链核酸分子DNA片段,筛查 DNA的变化,且不需要放射性同位素及溴化乙啶凝胶, 相对高效、经济、自动化程度高。
实用文档
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DMD---临床治疗
药物治疗：糖皮质激素治疗是目前唯一被循 证医学证实有效，可延缓DMD病程的药物。 短期口服激素治疗可增强骨骼肌力量和功能， 并可能在更长时间内稳定骨骼肌力量和功能。
基因治疗：利用不直接引起人类疾病，免疫 原性较小的腺相关病毒（AAV）为载体，导 入人工剪裁的Dys基因。
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DMD---实验室诊断
细胞遗传学检查 生物化学检查 基因诊断
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9
DMD---实验室诊断
染色体检查（X ,Y） X染色质检查 X染色质的检查可刮取口腔粘 膜、阴道粘膜脱落上皮细胞，亦可采用绒毛 或羊水中胎儿脱落细胞涂片，经硫堇或甲苯 胺蓝染色，在光镜下计数X染色质数目。
Y染色质检查 Y染色质检查适用于具有一个 或一个以上Y染色体的个体或细胞群 。
Duchenne型肌营养不良症状 (DMD)
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DMD---临床表现
杜氏肌营养不良(DMD)属于X 连锁隐性遗传病， 是男性中常见的遗传性疾病。发病率约为1/3 500 活男婴，女性多为致病基因携带者，发病者罕见， 且症状较轻。D M D 发病年龄偏小，起病隐袭， 病程长，在男患中症状较重，且病死率高，患者 常常以肌肉的进行性萎缩无力并伴有腓肠肌假性 肥大为特征，多在3,5岁发病，病程进展快，大多 在20岁左右死于心肺衰竭。患儿由卧到站立有特 殊的过程（Gower征），走路为鸭型步态。
实用文档
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产前诊断--策略
确定胎儿性别 如胎儿为男性,则应针对先证者的基因突变或多态 性标记进行分析,确定胎儿是否获得突变等位基因; 如为女性,则可停止基因诊断,因为女性杂合子通常 不患病。
实用文档
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DMD--产前基因诊断方法
多重PCR STR-PCR 探针连接多重扩增(MLPA) 变性高效液相色谱(DHPLC) 抗肌萎缩蛋白的免疫组化
康复治疗、矫形治疗、社会心理治疗等。
实用文档
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DMD---遗传方式及特征
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4
DMD---遗传方式及特征
（1）系谱中常常只有男性患者
（2）父母都无病时，女儿则不会发病，儿子可能 发病；
（3）由于交叉遗传，患者的同胞、舅舅、姨表兄 弟、外甥常常为本病患者；
（4）由于男性患者的子女都正常，故可见隔代遗 传；
由于基因突变情况复杂,产前诊断前要进行先证者预分 析,以确定其基因突变细节及父母基因多态性标记是否 提供了杂合状态的信息,以确定在该家系中实行产前诊 断的途径和策略。
首先应进行家系成员21号染色体上STR标记的分析。
该项检测具备的优点:一是检测21三体综合征,因为 在二次生育时孕妇年龄普遍偏大,生育21三体综合征患 儿的风险大为提高;二是判断是否有母源污染及污染程 度,有时会出现“胎儿材料”完全是母源的情况;三是核 对所分析的DNA材料是否存在混乱。后两点是导致产 前诊断差错的主要原因。
(2)早期诊断:如胎儿受累,处理比较方便(夫妇的知情选择 ),而且万一取材失败或分析中出现问题,还可在稍后时 间取羊水;采集羊水在孕中期,万一发生血性污染则需进 行羊水培养,回旋余地太小,重新取样时间上比较困难。
(3)成功率高:绒毛提取的DNA实质用文好档 量多,成功率高。 14
产前诊断--策略
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6
DMD---分子遗传及突变情况
Dys 和抗肌萎缩蛋白聚糖等蛋白装配在一起形成 抗肌萎缩蛋白的结合蛋白复合物(DAPC)。DAPC 形成了一个穿过肌膜传递信号，连接细胞外基质 和细胞内肌动蛋白骨架的重要结构。
Dys 基因表达的缺乏会影响DAPC 的形成，使分 子桥中断，至少导致两个结果：第一，细胞膜变 得更脆弱在肌肉离心性收缩的时候会被机械力破 坏；第二，框架蛋白，尤其是对机械力敏感的离 子通道将会失调。这就是导致疾病的发生机制。
实用文档
17
产前诊断--缺失型突变检测方法 多重PCR
DMD是以缺失型突变占基因的突变55%~65%,主要 分布5′端和中央2个缺失热点区,在对其缺失突变热点 区进行基因检测时,可检出至少一半患者。
它是目前用于缺失型DMD诊断最简便最有效的方法, 已成为D/BMD患者基因诊断及产前基因诊断的首选 技术,而且此技术可根据检出缺失外显子是整码还是移 码来判断患者的预后。
实用文档
18
产前诊断--非缺失型突变检测方法 STR-PCR
多重PCR方法可检测到缺失型男性患者,对女性携带者 及非缺失型突变患者无能为力。目前应用STR-PCR技 术进行连锁分析已成为非缺失型DMD家系连锁分析的 首选技术。
此方法在有先证者的家系或先证者已故但有肯定携带 者的家系中较有价值,而先证者已故的散发病例意义不 大,是一种概率性诊断,只有选择的STR位点越多,其分析 结果越可靠。
（5）女性患者的父亲一定是患者,母亲一定是携带 者。
注：在XR病中，男性的致病基因只能从母亲传来，
将来只能传给女儿，不存在从男性向男性传递。即
父传女，母传子，称及突变情况
D M D 由抗肌萎缩蛋白（Dys）基因突 变所致，属于进 行性肌营养不良症常见类型。 已证实人类抗肌萎缩蛋白基因定位于X 染色 体短臂上(Xp21.1 － 3)，基因全长约2 220kb，含79 个外显子，cDNA 长14kb， 是目前已知的最大人类基因。
实用文档
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产前诊断--抗肌萎缩蛋白的免疫组 化
抗肌萎缩蛋白不同程度的缺乏是DMD基本病理基础, 因此对DMD患者或携带者除基因水平上检测,还可从 蛋白水平上进行抗肌萎缩蛋白检测。国内学者已用免 疫荧光技术检测抗肌萎缩蛋白,发现它有助于DMD或 其他类型患者的临床诊断。
实用文档
22
医师建议
你的女儿有四分之一的概率为DMD的携带者，这样她 与正常男性结婚所生子女当中，儿子有八分之一的发 病可能性，而女儿都不会发病，但会有八分之一为携 带者的几率。所以我建议你女儿进行产前性别鉴定， 选择生育女儿。
假设
Ⅲ-1核型为 Ⅲ-1核型为
XAXa
XAXA
DMD家系图谱
前概率
1/2
1/2
条件概率 1/3
1
联合概率 1/2×1/3 1/2
后概率
1/4
3/4
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13
产前诊断--时机
产前诊断有2个时间窗口:首选10~12孕周采集绒毛;次选 为15~18孕周采集羊水。选择绒毛进行产前诊断的理 由有3条
:(1)防止母源污染:DMD和SMA以缺失型突变为主,母 源污染将导致诊断错误,发生血性羊水时若不经培养则 直接导致诊断错误,而绒毛则可通过形态检查准确挑选 。
实用文档
23
联合多重PCR和STR多态单体型连锁分析是缺失和重
复型检测的理想方法,可对胎儿进行初步的产前基因诊
断,但对由新生突变所致的散发型DMD者不能作出检
测,可用其他方法解决。
实用文档
19
产前诊断--探针连接多重扩增(MLPA)
目前MLPA是检测缺失和重复突变的新方法,尤其对受 累者致病性突变未知的女性携带者基因突变的筛查更 为重要。
实用文档
7
DMD---分子遗传及突变情况
DMD 患者约3 0 % 为自发性突变，其余的 为X染色体隐性遗传。在各种类型突变中， 单个或多个外显子缺失突变患者占65% － 70%；无意义或框移造成的点突变占30%， 重复占5% － 15%：故DMD 突变类型主要 为缺失，其特点是Xp21 上外显子缺失的不 均一性。
实用文档
10
DMD---实验室诊断
生物化学诊断
可对血清酶和蛋白质进行定性和定量分析。血清肌
酸激酶（CK）含量在血清酶学检查中最有价值。
实用文档
11
DMD---实验室诊断
基因诊断
实用文档
12
DMD---风险估计
DMD为XR遗传病 女性携带者中约有1/3血清肌酐正常 Ⅱ—2为携带者，核型XAXa