小鼠急性酒精性肝损伤模型的动态研究

中图分类号：R114

文献标识码：A

文章编号：1002－3127（2010）05－0378－03

·实验研究·

小鼠急性酒精性肝损伤模型的动态研究

赵敏，黄俊明，谭剑斌，周轶琳，杨杏芬，陈瑞仪，胡帅尔，黄建康（广东省疾病预防控制中心毒理所，广东广州510300）

【摘要】目的

建立小鼠急性酒精性肝损伤模型并筛选敏感检测指标。方法

实验分8个组，实验组小鼠采用一

次经口灌胃50%的乙醇（12ml /kg ）后禁食4、6、8、10、12、16、20和24h ，相应对照组灌胃给予纯净水并禁食同等时间。血液生化指标检测包括血中三酰甘油（TG ）、胆固醇（CHOL ）、丙氨酸转氨酶（ALT ）、天冬氨酸转氨酶（AST ）、碱性磷酸酶（AKP ）、胆红素（TBIL ）和Y-谷氨酰转酞酶（Y-GGT ）；16h 实验组和对照组血中高密度脂蛋白（HDL ）和低密度脂蛋白（LDL ）含量；并取动物肝脏，冰冻切片苏丹Ⅲ染色后，观察肝组织脂肪变性程度。结果经口一次灌胃给予小鼠50%的

乙醇后禁食16h ，实验组与对照组比较呈现明显的脂质代谢紊乱，包括血中TG 含量显著升高、HDL 值显著降低、病理肝

组织脂肪变性程度明显加重。结论

在该实验条件下，50%的乙醇经口灌胃一次后禁食16h ，可造成小鼠急性酒精性肝

损伤模型，可通过测定血中TG 、

HDL 含量及肝组织脂肪变性程度等指标进行模型评价。【关键词】酒精；急性；肝损伤

基金项目：保健食品功能评价方法及有关程序修订项目（2009）

作者简介：赵敏，博士，副主任医师，研究方向：食品毒理学与毒性病理学。并列第一作者：黄俊明，主任医师，研究方向：食品毒理学。

目前国内外尚未建立完善的急性酒精性肝损伤的

动物模型，因此探索酒精性肝损伤的机理，筛选对预防酒精性肝损伤有效的保健食品，

建立一个与人类酒精性肝损伤发展病变过程相似的动物模型极为重要。本文对小鼠急性酒精性肝损伤模型的研究，以期建立小鼠急性酒精性肝损伤模型并筛选敏感检测指标。1材料与方法

1.1

动物昆明种雄性小白鼠，10 12周龄、体重30

g 左右，广东省医学动物中心提供，合格证号SCXK （粤）2008-0002。颗粒饲料由广东省医学动物中心提供。动物实验室为SPF 级，实验动物使用许可证号：SYXK （粤）2008-0011，室温（22ʃ2）ħ，湿度60%

80%。1.2

剂量和分组

用体积分数为50%的乙醇（分析

纯，以蒸馏水稀释）造成肝损伤模型，灌胃量12ml /kg

（乙醇密度0.8g /ml ，折合乙醇的剂量为4.80g /kg ）。实验分8个组，每组10只动物，分别为乙醇灌胃后禁

食4、

6、8、10、12、16、20和24h 处死动物；每组均设阴性对照，

阴性对照组按相同的量灌胃给予洁净水，并与相应实验组禁食同等时间。1.3

观察指标

1.3.1

血液生化学指标检测：各时间点实验结束，动

物均采用戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，进行血中三

酰甘油（TG ）、胆固醇（CHOL ）、丙氨酸转氨酶（ALT ）、天冬氨酸转氨酶（AST ）、碱性磷酸酶（AKP ）、胆红素（TBIL ）和Y-谷氨酰转酞酶（Y-GGT ）的检测。16h 实验组和对照组加做血中高密度脂蛋白（HDL ）和低密度脂蛋白（LDL ）的检测；上述指标用日立7600-010全自动生化仪检测，试剂由原仪器生产商供应。1.3.2

病理组织学检查：取新鲜小鼠肝脏左叶做冰冻切片，苏丹Ⅲ染色后镜检并评分。镜检主要观察脂滴在肝脏分布的范围和面积。0分表示肝细胞内脂滴散在，稀少；1分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的1/4；2分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的1/2；3分表示含脂滴的肝细胞不超过肝脏面积的3/4；4分表示肝组织几乎被脂滴代替［1］

。

1.4统计学方法数据用SPSS11.0软件包进行方差和秩和分析，检测水准α=0.05。2结果

2.1

血液生化指标

2.1.1对血中TG 和CHOL 含量的影响：由表1可

见，给予50%的乙醇后禁食4、6、8、10、12、16和20h 时酒精实验组TG 含量与对照组比较有上升趋势，其

中8、10、12、16和20h ，实验组与对照组比较，差异有

统计学意义（P <0.05）。给予50%的乙醇后禁食4 24h ，酒精实验组CHOL 与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。

表1给予50%的乙醇后禁食不同时间

小鼠血中三酰甘油的变化

禁食时间（h）对照组乙醇组

4 1.13ʃ0.54 1.40ʃ0.44

60.92ʃ0.30 1.35ʃ0.75

8 1.12ʃ0.39 1.99ʃ0.69*

100.84ʃ0.12 1.58ʃ0.45*

120.83ʃ0.21 1.32ʃ0.49*

160.60ʃ0.26 1.73ʃ0.98*

20 1.00ʃ0.22 2.23ʃ0.58*

240.74ʃ0.280.78ʃ0.19注：与对照组比较，P<0.05；n=10。

2.1.2对血中ALT和AST含量的影响：由表2可见，给予50%的乙醇后禁食4h，酒精实验组ALT和AST 与对照组比较上升，差异有统计学意义（P<0.05）；其余各实验组和对照组比较未见显著性差异。

表2给予50%的乙醇后禁食不同时间

小鼠血中ALT和AST的变化

禁食时间

（h）

ALT AST

对照组乙醇组对照组乙醇组

420.0ʃ3.728.9ʃ6.8*54.2ʃ7.166.4ʃ15.0*

630.0ʃ3.725.9ʃ5.167.3ʃ21.369.5ʃ10.4

817.0ʃ4.518.0ʃ1.550.6ʃ4.647.9ʃ7.2

1014.7ʃ3.316.5ʃ2.650.7ʃ4.947.6ʃ9.1

1216.4ʃ2.120.1ʃ7.065.1ʃ10.064.0ʃ12.6

1619.4ʃ6.717.7ʃ4.366.3ʃ9.160.6ʃ4.3

2016.9ʃ4.514.9ʃ3.754.6ʃ8.356.2ʃ13.9

2416.7ʃ6.316.7ʃ3.255.8ʃ9.557.0ʃ16.6

注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。

2.1.3对血中AKP含量的影响：由表3可见，给予50%的乙醇后禁食4和6h，酒精实验组AKP与对照组比较上升，差异有统计学意义（P<0.05）；其余各实验组和对照组比较，未见显著性差异。

表3给予50%的乙醇后禁食不同时间

小鼠血中AKP的变化

禁食时间（h）对照组乙醇组

4129.1ʃ45.0175.5ʃ35.1*

6115.1ʃ29.8163.2ʃ49.4*

8107.7ʃ33.095.1ʃ35.0

1095.2ʃ22.9119.6ʃ41.6

12100.3ʃ38.1107.7ʃ20.9

16108.0ʃ35.1136.6ʃ32.1

20106.0ʃ14.081.8ʃ30.3

24107.2ʃ17.488.4ʃ35.0注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。2.1.4对血中TBIL和Y-GGT含量的影响：给予50%的乙醇后禁食4 24h，酒精实验组TBIL和Y-GGT与对照组比较，差异无统计学意义。

2.1.5对血中高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）含量的影响：给予50%的乙醇后禁食16h，酒精实验组血中HDL值与对照组比较显著降低（P< 0.05）；血中LDL值实验组与对照组间未见显著差异。结果见表4。

表4给予50%的乙醇后禁食16h对小鼠

血中HDL和LDL的影响

组别剂量（g/kg）HDL（g）LDL（g）

对照组0.00 2.00ʃ0.160.20ʃ0.09

乙醇组 4.80 1.40ʃ0.49*0.19ʃ0.06

注：与对照组比较，*P<0.05；n=10。

2.2肝脏病理组织学变化实验组动物肝脏的病理改变以肝细胞脂肪变性为主（图1）。对照组肝细胞内也可见脂肪变性，伴随禁食时间不同，脂肪变性程度不同

。

冰冻切片，苏丹Ⅲ染色；ZEISS Axioskop40，ˑ10

图1经口灌胃50%乙醇后禁食16h实验组

和对照组肝细胞脂肪变性比较

由图2可见，给予50%的乙醇后禁食4、6、10、12、16和20h，酒精实验组肝脏脂肪变性病理评分值与对照组比较升高，其中16和20h实验组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

目前，酒精的消费量呈全球性猛增，同时酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发病亦见显著增加。本文建立小鼠急性酒精性肝损伤模型目的是为了快速准确地筛选对酒精性肝损伤有辅助保护作用的保健食品。急性酒精性肝损伤的机制为机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，乙醇可致α-磷酸甘油增多而促进TG合成，致使脂肪在肝细胞内沉积［2-3］。因此脂质代谢异常为急性酒精性肝损伤的