DNA的粗提取与鉴定_实验报告.ppt
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DNA的粗提取与鉴定
一、基础知识 （一）提取DNA的方法
1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理 或化学性质的生物大分子
2、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化 学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
3、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的 盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀， 或者相反
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样 的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全， 提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到 丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞 成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
与
鉴
定
鉴定DNA
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
选择适宜材料
破碎细胞
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
方法步骤
加入物质
1.制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA 最大限度地释出
⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 mo1／L 的 NaCl 溶液 40 mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而 使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是 DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋 白质变性，与DNA分离
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精 溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶 液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用 玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸 吸取上面的水
DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图
4、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质 则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步分离 5、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而 DNA在80℃以上才会变性
当度D度D用D析NNN在0的度在DN时渐出为氯为这.AAANa1增溶，。的N化C的的在一04A0大a解Dl.增2②液液钠．1溶溶溶盐溶C原mN。4度加中l的如的1液m解解溶A解溶o理①溶线浓解4随溶而浓何l物浓的o度度液m/度液度根度图液lN，mL解逐度通度溶质o／最最中时最据a下最浓o，中或l可渐继解C使过/的大 低 溶lL小DL，／，析l度小思的降度续溶以时控D量N解， 。？时L出DD考溶；低N低增又液A制时浓或浓 利使，NN？A在D在解加逐当浓；于，，NAAN在N什度的aAa盐C么在曲溶Cl 溶溶l NaCl 溶 液 中 的 溶 解 度是如何变化的？
冷却的95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入 2mol (2)加入 DNA (3)4 mL二苯胺试剂
／L 的 NaCl 溶液 5mL
B:(1)向试管中加入 2mol ／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解 细胞膜 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl， 有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考 虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功 的可能性更大
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞
动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中 加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过 滤后收集滤液即可
讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再 加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂 (细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和 蛋白质,但对DNA没有影响
6、DNA的鉴定
DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此， 二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
二、实验设计
（一）实验材料的选取
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、 哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、 在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取 2～3种实验材料）
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一 只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试 管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看 看溶解有DNA的溶液是否有蓝色
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
2mol/L
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
5、过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤
6、再次溶解DNA
源自文库
取滤物
2mol/LNaCl溶液
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精
DNA的鉴定
DNA
总结：
实验原理
的
粗
提 取
DNA粗提取
一、基础知识 （一）提取DNA的方法
1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理 或化学性质的生物大分子
2、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化 学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
3、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶 液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的 盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀， 或者相反
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样 的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全， 提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到 丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞 成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
与
鉴
定
鉴定DNA
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
选择适宜材料
破碎细胞
DNA的纯化
DNA的溶解和析出
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
方法步骤
加入物质
1.制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA 最大限度地释出
⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 mo1／L 的 NaCl 溶液 40 mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而 使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是 DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋 白质变性，与DNA分离
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精 溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶 液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用 玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸 吸取上面的水
DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图
4、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质 则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步分离 5、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而 DNA在80℃以上才会变性
当度D度D用D析NNN在0的度在DN时渐出为氯为这.AAANa1增溶，。的N化C的的在一04A0大a解Dl.增2②液液钠．1溶溶溶盐溶C原mN。4度加中l的如的1液m解解溶A解溶o理①溶线浓解4随溶而浓何l物浓的o度度液m/度液度根度图液lN，mL解逐度通度溶质o／最最中时最据a下最浓o，中或l可渐继解C使过/的大 低 溶lL小DL，／，析l度小思的降度续溶以时控D量N解， 。？时L出DD考溶；低N低增又液A制时浓或浓 利使，NN？A在D在解加逐当浓；于，，NAAN在N什度的aAa盐C么在曲溶Cl 溶溶l NaCl 溶 液 中 的 溶 解 度是如何变化的？
冷却的95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入 2mol (2)加入 DNA (3)4 mL二苯胺试剂
／L 的 NaCl 溶液 5mL
B:(1)向试管中加入 2mol ／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解 细胞膜 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl， 有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考 虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功 的可能性更大
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞
动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中 加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过 滤后收集滤液即可
讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再 加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂 (细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和 蛋白质,但对DNA没有影响
6、DNA的鉴定
DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此， 二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
二、实验设计
（一）实验材料的选取
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、 哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、 在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取 2～3种实验材料）
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一 只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。 混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试 管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看 看溶解有DNA的溶液是否有蓝色
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
2mol/L
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
5、过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤
6、再次溶解DNA
源自文库
取滤物
2mol/LNaCl溶液
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精
DNA的鉴定
DNA
总结：
实验原理
的
粗
提 取
DNA粗提取